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gp350及gp350-C3d3融合基因真核载体的构建及其免疫功能研究

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免疫学杂志 2011年第5期27卷 390-393,397页

作者：宋天喜曹朝晖江伟凡董世访杨桦第三军医大学新桥医院耳鼻咽喉头颈外科重庆400037 南华大学生物化学与分子生物学教研室衡阳421000

目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与3个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。方法将gp350基因序列分别与经BglⅡ和BamHⅠ双酶切的真核表达载体***和***连接,转化后挑取阳性克隆进行PC... 详细信息

目的构建EB病毒包膜糖蛋白gp350全长序列及其与3个补体片段C3d串联基因在人体真核细胞中表达的载体,并进行其免疫功能的初步研究。方法将gp350基因序列分别与经BglⅡ和BamHⅠ双酶切的真核表达载体***和***连接,转化后挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定并测序;将重组载体利用脂质体法分别转染人类Hela细胞培养16~24 h后,用Western blot及细胞免疫组化染色检测gp350蛋白和gp350-C3d3融合蛋白的表达。结果成功构建含gp350全长基因序列的载体***和***,并能够转染人类Hela细胞;经细胞免疫组织化学染色及Westernblot蛋白检测转染组均能常规水平表达,对照组则无该蛋白表达,但两转染组的表达量无明显差异。结论构建成功含有gp350的2个真核表达质粒并能够在人体细胞中表达相应蛋白,为下一步进行检测功能性试验奠定基础。

关键词： EB病毒鼻咽癌 gp350 DNA疫苗

自身免疫疾病中的LIGHT-LTβR/HVEM信号通路的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1382-1384页

作者：曹朝晖董世访江伟凡尹卫东许桂莲南华大学生化与分子生物学教研室湖南衡阳421001 第三军医大学基础部免疫学教研室重庆400038

LIGHT(TNFSF14)的两个主要受体:HVEM和LTβR,均为TNFR超家族成员。LIGHT-HVEM途径是重要的T细胞共刺激信号途径,而LIGHT-LTβR在改变树突细胞和间质细胞的功能方面发挥重要作用。HVEM还可与两个免疫球蛋白超基因家族成员即抑制T细胞活化... 详细信息

LIGHT(TNFSF14)的两个主要受体:HVEM和LTβR,均为TNFR超家族成员。LIGHT-HVEM途径是重要的T细胞共刺激信号途径,而LIGHT-LTβR在改变树突细胞和间质细胞的功能方面发挥重要作用。HVEM还可与两个免疫球蛋白超基因家族成员即抑制T细胞活化的BTLA和CD160相互作用,HVEM在刺激和抑制信号之间充当一种分子开关。人和实验动物模型研究显示LIGHT-LTβR/HVEM途径在自身免疫疾病的炎症反应和病理发生中起重要的免疫调节作用。因此,在免疫相关疾病的免疫干预治疗中,LIGHT是一种良好的潜在靶标。本文就LIGHT-LTβR/HVEM途径在免疫相关疾病中作用的最新研究进展做一综述。

关键词： LIGHT T细胞自身免疫疾病

IFN-γ和TNF-α协同对MIN6细胞凋亡的影响

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免疫学杂志 2012年第3期28卷 191-193,199页

作者：董世访曹朝晖江伟凡李桂清姜曼胡小波许桂莲南华大学生化与分子生物学教研室衡阳421001 第三军医大学基础部免疫学教研室重庆400038

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α协同对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察比较了IFN-γ、TNF-α单独及其组合对MIN6细胞活性的影响,并进一步通过光学显微镜和激光共聚焦显微镜从形态学上对其毒性... 详细信息

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α协同对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6凋亡的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察比较了IFN-γ、TNF-α单独及其组合对MIN6细胞活性的影响,并进一步通过光学显微镜和激光共聚焦显微镜从形态学上对其毒性作用进行了验证,最后通过流式细胞术区分了其对MIN6细胞的凋亡和坏死的作用。结果 IFN-γ和TNF-α单独作用对MIN6细胞活性有轻微影响,但两者组合对MIN6细胞的活性具有显著的抑制作用,并且早期凋亡的细胞百分率明显高于IFN-γ单独处理组(69.91%&13.03%),而坏死或晚期凋亡细胞的百分率两组之间没有差异(2.14%&2.41%)。结论IFN-γ和TNF-α协同可促进MIN6细胞的凋亡。

关键词： IFN-γ TNF-α MIN6细胞凋亡

LIHGT-HVEM/LTbR途径缺陷诱导T细胞的失能

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免疫学杂志 2010年第9期26卷 747-750页

作者：尚宇航姜曼杨菲曹朝晖董世访江伟凡陈戬吴玉章许桂莲第三军医大学基础部免疫学教研室重庆400038 南华大学生物化学与分子生物学教研室衡阳421001

目的探讨LIGHT-HVEM/LTbR信号通路缺陷对T细胞应答的影响。方法以LIGHTKO小鼠为动物模型,制备脾脏单细胞悬液,加入抗CD3mAb和抗CD28mAb刺激。通过3H-TdR掺入法检测了细胞的增殖能力、ELISA和FACS分别检测了细胞培养上清和胞内IFN-gamma... 详细信息

目的探讨LIGHT-HVEM/LTbR信号通路缺陷对T细胞应答的影响。方法以LIGHTKO小鼠为动物模型,制备脾脏单细胞悬液,加入抗CD3mAb和抗CD28mAb刺激。通过3H-TdR掺入法检测了细胞的增殖能力、ELISA和FACS分别检测了细胞培养上清和胞内IFN-gamma和IL-10的水平,并探讨了这些细胞对外源性rIL-2的反应性。结果与野生型的C57BL/6小鼠相比,LIGHTKO小鼠的脾细胞表现为低下的增殖活性(P<0.05);细胞培养上清中Th1细胞因子IFN-gamma的水平显著下降(P<0.05);与ELISA结果一致,FACS胞内染色结果表明,IFN-gamma阳性T细胞的百分率显著下降,而LIGHTKO小鼠脾细胞IL-10的产生却显著高于野生型的对照小鼠(P<0.01)。进一步的研究表明LIGHTKO小鼠这种缺陷的IFN-gamma产生主要与CD8+T细胞亚群有关,而CD4+T细胞亚群IFN-gamma的产生是正常的。外源性rIL-2的加入可使LIGHTKO小鼠T细胞恢复正常的增殖能力和IFN-gamma的产生。结论 LIGHT-HVEM/LTbR信号通路缺陷导致T细胞的失能。

关键词： LIGHT-HVEM/LTbR 失能 T细胞

IFN-γ和TNF-α联合对MIN6细胞caspase-3活化的影响

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免疫学杂志 2014年第1期30卷 17-20页

作者：曹朝晖覃剑董世访郑权友杨菲谭雨龙尹卫东李桂清南华大学心血管疾病研究所和动脉硬化学湖南省重点实验室衡阳421001 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所急救部重庆400042 重庆医科大学儿童医院中心实验室 400014 第三军医大学基础部免疫学教研室重庆400038

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6中caspase-3活化的影响。方法用IFN-γ、TNF-α单独或联合刺激MIN6细胞后,Western blot分析比较caspase-3活化的情况,并用免疫细胞化学法检测了其活化产物cleaved caspase-3的产生... 详细信息

目的研究细胞因子IFN-γ和TNF-α对小鼠胰岛瘤细胞株MIN6中caspase-3活化的影响。方法用IFN-γ、TNF-α单独或联合刺激MIN6细胞后,Western blot分析比较caspase-3活化的情况,并用免疫细胞化学法检测了其活化产物cleaved caspase-3的产生;酶学比色法测定细胞因子IFN-γ和TNF-α联合作用活化caspase-3的时间依赖性以及MTT法比较caspase-3特异性的抑制剂AC-DEVD预处理前后MIN6细胞活性的变化。结果 IFN-γ或TNF-α单独作用不能活化caspase-3,但两者联合作用24 h后可检测到caspase-3活化裂解片段的产生;Caspase-3的活性随着IFN-γ和TNF-α处理时间的增加而升高,呈现明显的时间依赖性;抑制caspase-3的活化可有效改善MIN6细胞的活性,并且呈剂量依赖性。结论 IFN-γ和TNF-α对MIN6细胞活性的抑制作用与caspase-3的活化密切相关。

关键词： IFN-γ TNF-α MIN6细胞 Caspase-3 I型糖尿病

新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞和Foxp3^+Tregs、Th17表达的影响

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免疫学杂志 2017年第2期33卷 107-112页

作者：刘茹田琴琴陈云秀田永露张光莉陈明孟庆清董世访罗征秀儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童发育重大疾病国际科技合作基地 400014 郑州大学第一附属医院儿科 450052 重庆医科大学附属儿童医院呼吸科

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3^+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(***组)。***组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技... 详细信息

目的研究新生期肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞、Foxp3^+Tregs和Th17的影响。方法清洁级新生Balb/c鼠(7日龄)随机分为对照组(mock组)及肺炎链球菌肺炎组(***组)。***组给予鼻腔滴注肺炎链球菌,对照组给予鼻腔滴注等量PBS。流式细胞技术检测肺炎链球菌感染后第2、5、7和14天肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、DCs表面共刺激分子CD40/CD80/CD86及Foxp3^+Tregs和IL-17^+CD4^+T细胞的表达水平。结果新生期肺炎链球菌肺炎后肺组织DCs表面CD40、CD86表达增强(P0.05,r=0.015)。结论新生期肺炎链球菌肺炎抑制肺部CD103^+DCs和Foxp3^+Tregs发育,促进CD11b^+DCs及Th17表达,影响固有免疫及适应性免疫应答,可能同后续慢性气道炎症及哮喘形成相关。

关键词：新生期肺炎链球菌肺炎树突状细胞 Foxp3+Tregs

肺炎链球菌肺炎对肺部树突状细胞及CD4^+T细胞的影响

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免疫学杂志 2016年第4期32卷 288-293页

作者：刘茹田琴琴张光莉邹心周干陈明孟庆清董世访罗征秀儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室儿童发育重大疾病国际科技合作基地 400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸科

目的探讨肺炎链球菌肺炎对Balb/c小鼠肺部树突状细胞及CD4^+T细胞的影响。方法 6~8周Balb/c小鼠随机分为对照组及肺炎链球菌感染组,流式细胞术检测肺炎链球菌感染后2 d、5 d肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、p DCs及CD4^+T细胞亚类水平... 详细信息

目的探讨肺炎链球菌肺炎对Balb/c小鼠肺部树突状细胞及CD4^+T细胞的影响。方法 6~8周Balb/c小鼠随机分为对照组及肺炎链球菌感染组,流式细胞术检测肺炎链球菌感染后2 d、5 d肺组织中CD103^+DCs、CD11b^+DCs、p DCs及CD4^+T细胞亚类水平。结果肺炎链球菌肺炎致肺组织CD103^+DCs及p DCs水平显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而肺组织CD11b^+DCs水平显著低于对照组。肺炎链球菌肺炎促进肺组织IL-17A^+CD4^+T细胞和Foxp3^+Tregs表达,与对照组比较,感染后2 d、5 d差异均有统计学意义(P<0.05),随着感染控制,Foxp3^+Tregs表达水平回降,感染后5 d Foxp3^+Tregs水平显著低于感染后2 d水平(7.3%±0.41%vs 9.38%±1.34%,P<0.01)。肺炎链球菌肺炎对肺部Th2表达水平无显著影响,感染后5 d IFN-γ^+CD4^+T细胞水平显著升高,与对照组、感染后2 d组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肺炎链球菌肺炎促进肺组织CD103^+DCs、p DCs表达,诱导CD4^+Th17、Tregs细胞分化发育。

关键词：肺炎链球菌感染树突状细胞 CD4+T细胞

TNF-α通过死亡受体途径促进IFN-γ诱导NIT-1细胞凋亡

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中国免疫学杂志 2014年第11期30卷 1448-1451页

作者：董世访李桂清江伟凡杨菲曹朝晖许桂莲第三军医大学基础部免疫学教研室重庆400038

目的:探讨TNF-α和IFN-γ对小鼠胰岛β细胞株NIT-1细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:用MTT法检测TNF-α和IFN-γ单独或联合作用对NIT-1细胞活力的影响,倒置显微镜观察NIT-1细胞形态变化,Hoechst 33258荧光染色后激光共聚焦显微... 详细信息

目的:探讨TNF-α和IFN-γ对小鼠胰岛β细胞株NIT-1细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:用MTT法检测TNF-α和IFN-γ单独或联合作用对NIT-1细胞活力的影响,倒置显微镜观察NIT-1细胞形态变化,Hoechst 33258荧光染色后激光共聚焦显微镜观察细胞核形态的变化,Western blot技术检测凋亡相关蛋白Caspase-8,-3和PARP的活化。结果:TNF-α联合IFN-γ处理明显抑制了NIT-1细胞的活力,诱导了细胞的凋亡,促进了凋亡蛋白Caspase-8,-3和PARP的活性。结论:TNF-α通过细胞凋亡的死亡受体途径信号传递促进了IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡。

关键词： TNF-α IFN-γ 胰岛β细胞 T1DM

不同年龄小鼠骨来源间充质干细胞衰老相关特性与成骨分化能力的比较研究

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陆军军医大学学报 2024年第13期46卷 1512-1522页

作者：李媛钟海英董世访黄璐刘潇淇廖雨滋易勤赵丽杨珂李娅莎重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆400014

目的探索不同年龄组小鼠骨来源的间充质干细胞(bone derived mesenchymal stem cells,BMSCs)衰老相关的生物学特性及骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导成骨分化能力的改变。方法将8只C57BL/6J小鼠分为青年组(4周... 详细信息

目的探索不同年龄组小鼠骨来源的间充质干细胞(bone derived mesenchymal stem cells,BMSCs)衰老相关的生物学特性及骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导成骨分化能力的改变。方法将8只C57BL/6J小鼠分为青年组(4周龄,体质量约为10~15 g,n=4)和老年组(12月龄,体质量约为20 g~25 g,n=4),每组雌雄各半。分别从2组小鼠的整骨中提取间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),通过流式细胞术鉴定2组BMSCs的表面标志物,通过β-半乳糖苷酶染色比较2组BMSCs的衰老程度,通过MTT和EdU掺入实验比较2组BMSCs的增殖及自我更新能力。通过Western blot分析2组BMSCs中周期蛋白CyclinD1、P21的表达情况。采用ALP染色和茜素红S染色及RT-qPCR评估2组BMSCs的体外成骨分化能力,使用RNA-seq分析比较2组BMSCs经BMP2诱导后的差异基因表达,并用流式分析验证测序结果。结果流式细胞术分析结果显示,分离培养的小鼠BMSCs符合间充质干细胞判定标准。β-半乳糖苷酶染色结果显示,老年组BMSCs的衰老水平显著高于青年组(P<0.05)。而MTT和EdU掺入实验结果表明,老年组BMSCs的细胞活力和增殖能力显著低于青年组(P<0.05)。Western blot结果显示,与青年组比较,老年组BMSCs的细胞周期蛋白CyclinD1表达水平较低,而细胞周期阻抑因子P21蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。ALP染色和茜素红S染色及RT-qPCR检测结果显示,BMP2诱导后青年组BMSCs的成骨分化能力显著高于老年组(P<0.05)。RNA-seq结果显示,BMP2诱导后,整合素αV重组蛋白(cluster of differentiation 51,CD51)在青年组和老年组中的表达趋势相反。而流式细胞术分析结果显示,青年组CD51^(+)细胞在CD45^(-)细胞中占比明显高于老年组(P<0.01)。结论老年组BMSCs中CD51^(+)细胞在CD45^(-)细胞中占比下降与CD51^(+)细胞对BMP2的成骨诱导响应性下降密切相关。

关键词：骨来源间充质干细胞骨形态发生蛋白2 成骨分化衰老整合素αV重组蛋白