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大鼠前列腺平滑肌细胞的培养及其电压依赖性钙通道的表达

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大鼠前列腺平滑肌细胞的培养及其电压依赖性钙通道的表达

作者：葛魏巍安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:建立有效的大鼠前列腺平滑肌细胞的原代培养方法;探讨电压依赖型T-型及L-型钙通道基因和蛋白在Sprague– Dawley(SD)大鼠前列腺平滑肌细胞(SD rat prostate smooth muscle cells, SPSMCs)中的表达,以进一步研究其在前列腺疾病中的... 详细信息

目的:建立有效的大鼠前列腺平滑肌细胞的原代培养方法;探讨电压依赖型T-型及L-型钙通道基因和蛋白在Sprague– Dawley(SD)大鼠前列腺平滑肌细胞(SD rat prostate smooth muscle cells, SPSMCs)中的表达,以进一步研究其在前列腺疾病中的作用。方法:无菌取出大鼠前列腺背外侧组织,剪碎后贴块培养于DMEM培养基,并用免疫组化对培养细胞的进行鉴定。用第2代细胞进行实验。采用逆转录聚合酶链式反应(reverse, transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)技术观察SPSMCs中钙离子通道不同亚基a1C、a1D、a1G、a1H mRNA的表达(以GAPDH为内参照);结果:组织块接种后一般2d即有圆形小细胞爬出,3天贴壁,应用倒置相差显微镜观察,前列腺平滑肌细胞未汇合之前多呈梭形和多边形,内有1个细胞核,可向细胞密度低的方向伸出一至数个足突,细胞汇合后部分区域细胞束状排列,呈典型“谷峰”状,细胞以平滑肌肌动蛋白为抗体,经免疫细胞化学染色显示前列腺平滑肌细胞胞质呈棕黄色,纯度近100%;RT-PCR结果显示,可见L型钙通道a1C、a1D及T型钙通道a1G的表达,未见a1H的表达。结论:贴块法培养前列腺平滑肌细胞,避免了酶消化法对平滑肌细胞的损伤,也大大简化了实验步骤,降低了实验成本。结合自然纯化法和差速贴壁法可获得高纯度的平滑肌细胞,具有一定推广价值。电压依赖型L-型钙通与T-型钙通道存在于原代培养的SPSMCs中,它们的变化可能改变前列腺平滑肌的收缩活性并可能引起前列腺的病理性改变。

关键词：前列腺平滑肌钙通道 RT-PCR SD 大鼠细胞培养

外周血SP-D、SP-A、IL-1β对创伤性肠破裂患者术后急性肺损伤的预测及病情评估价值

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中国普通外科杂志 2021年第10期30卷 1203-1211页

作者：王琪高明葛魏巍孙远松安徽医科大学第二附属医院急诊外科安徽合肥230601

背景与目的:创伤性肠破裂(TE)患者术后常可能伴发急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS),危及生命,因此,选择合适的早期预测及病情严重程度评估指标具有重要意义。本研究探讨外周血肺表面活性蛋白D(SP-D)、肺表面活性蛋白A(SP-A)、... 详细信息

背景与目的:创伤性肠破裂(TE)患者术后常可能伴发急性肺损伤(ALI)/急性呼吸窘迫综合征(ARDS),危及生命,因此,选择合适的早期预测及病情严重程度评估指标具有重要意义。本研究探讨外周血肺表面活性蛋白D(SP-D)、肺表面活性蛋白A(SP-A)、白细胞介素1β(IL-1β)动态监测对TE术后伴发ALI/ARDS的早期预测及病情评估价值。方法:回顾性分析2019年8月—2020年12月收治的78例TE患者的临床资料,其中52例术后未发生肺损伤组(对照组),15例术后发生ALI(ALI组),11例术后发生ARDS(ARDS组),分析三组患者的临床指标与外周血SP-D、SP-A、IL-1β水平的动态变化。通过受试者工作曲线(ROC)及相关性分析评判各观察指标对TE术后伴发ALI/ARDS的早期预测价值及病情严重程度评估效能。结果:各组患者年龄、性别、BMI、致伤因素、损伤部位、手术方式、手术时长及术中出血量差异无统计学意义(均P>0.05),而机械通气时长、降钙素原(PCT)水平、肺损伤预测评分(LIPS)及肺损伤评分(LIS)在对照组、ALI组、ARDS组依次增加,而氧合指数在对照组、ALI组、ARDS组依次降低,差异均有统计学意义(均P0.05),其余差异均有统计学意义(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SP-D、SP-A、IL-1β水平早期预测ALI/ARDS的曲线下面积(0.800、0.919、0.755/0.902、0.931、0.957)均高于PCT(0.739/0.721)及LIPS评分(0.851/0.788),三者联合进行平行试验可提高预测ALI/ARDS的灵敏度至0.997/0.988,三者联合进行系列试验可提高预测ALI/ARDS的特异度至0.999/0.997。相关性分析提示,SP-D、SP-A、IL-1β三项指标与氧合指数均呈明显负相关(r=-0.504、-0.657、-0.717,均P<0.01)、与LIS评分呈明显正相关(r=0.471、0.654、0.634,均P<0.01)。结论:血清SP-D、SP-A、IL-1β检测对预测TE术后患者伴发ALI/ARDS及严重程度评估均具有一定价值,且三者联合应用预测和评估效能更高。

关键词：腹部损伤肠破裂急性肺损伤呼吸窘迫综合征肺表面活性物质相关蛋白质D 肺表面活性物质相关蛋白质A 白细胞介素1β

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挖掘学生潜能提升作文素养

语文教学与研究（下半月） 2019年第4期 56-57页

作者：葛魏巍安徽省合肥市螺岗小学

习作教学是语文教学的重要组成部分质疑,它和阅读教学、听说教学以及语文基础知识教学共同组成了现代语文教育的有机整体,在整个语文教育系统中占据着非常重要的地位, 发挥着很大的作用. 习作教学不仅培养学生的语言表达技能,还要培养...

习作教学是语文教学的重要组成部分质疑,它和阅读教学、听说教学以及语文基础知识教学共同组成了现代语文教育的有机整体,在整个语文教育系统中占据着非常重要的地位, 发挥着很大的作用. 习作教学不仅培养学生的语言表达技能,还要培养学生的认知能力、分析能力、决策能力. 所以,习作活动是学生多方面素养和能力的综合表现,这些素养和能力的提高,也是人的整体素质和综合实力的提高,由此可见,习作教学已经成为了一种素质教育,小学的写话、习作教学是语文教学中的主要一环,作为一种教学的渠道,有利于对学生进行思想方面的教育和情感方面的熏陶. 那么,怎样对学生进行写作教学能力的培养呢? 本文从创造性思维的培养、写作兴趣的培养和写作教学模式的训练三方面进行了分析.

关键词：

来源：评论

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挖掘学生潜能提升作文素养

语文教学与研究 2019年第8期 56-57页

作者：葛魏巍安徽省合肥市螺岗小学

习作教学是语文教学的重要组成部分质疑,它和阅读教学、听说教学以及语文基础知识教学共同组成了现代语文教育的有机整体,在整个语文教育系统中占据着非常重要的地位,发挥着很大的作用。习作教学不仅培养学生的语言表达技能,还要培养学... 详细信息

习作教学是语文教学的重要组成部分质疑,它和阅读教学、听说教学以及语文基础知识教学共同组成了现代语文教育的有机整体,在整个语文教育系统中占据着非常重要的地位,发挥着很大的作用。习作教学不仅培养学生的语言表达技能,还要培养学生的认知能力、分析能力、决策能力。

关键词：学生潜能作文素养挖掘语文教学现代语文教育基础知识教学语言表达技能习作教学

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高脂血症性急性胰腺炎仓鼠胰腺微循环观察

中华急诊医学杂志 2017年第11期26卷 1274-1278页

作者：王文强项和平王伟李贺高明葛魏巍安徽医科大学第二附属医院急诊外科合肥230601

目的建造高脂血症性急性胰腺炎实验动物模型，观察高脂血症对急性胰腺炎的胰腺微循环影响。方法取健康仓鼠30只随机（随机数字法）分为2 组：血脂正常组（20只）、高脂血症组（10只），分别予以普通和高脂饲料喂养，4周后由血脂正常组筛... 详细信息

目的建造高脂血症性急性胰腺炎实验动物模型，观察高脂血症对急性胰腺炎的胰腺微循环影响。方法取健康仓鼠30只随机（随机数字法）分为2 组：血脂正常组（20只）、高脂血症组（10只），分别予以普通和高脂饲料喂养，4周后由血脂正常组筛出10只血脂正常且肝胆胰无病变者，随机（随机数字法）均分为正常对照组（C 组）和急性胰腺炎组（AP 组），由高脂血症组筛出5只血甘油三酯升高3倍以上且肝胆胰无病变者，作为高脂血症性急性胰腺炎组（HLAP 组）。按照Schmidt 法制作动物模型, C组仅适当翻动十二指肠与胰腺并进行穿刺操作， HLAP 组和AP 组行微量输液泵匀速、逆行向仓鼠的胆胰管内泵入3.5%牛磺胆酸钠，6 h后于下腔静脉泵入吖啶橙（2 mL/kg），注射完毕后以激光共聚焦显微镜荧光成像系统动态观察活体动物模型胰腺微循环，检测胰腺微循环血管平均直径（microvaseular diameter, MVD）、功能性毛细血管密度（funetional capillary density, FCD）及测量微循环血流速度（microvessel flow velocity, MFV）、白细胞黏附。三组均取胰腺组织制成病理切片，进行胰腺病理评分。结果与AP组、C组比较，HLAP 组胰腺微循环功能指标MVD（μm）、FCD（个/mm^2）、MFV（μm/s）显著降低（MVD：HLAP组2.40±0.26和AP组5.54±0.43、C组7.56±0.42；FCD：HLAP组4.20±0.84和AP组7.56±1.14、C组11.40±1.14；MFV：HLAP组58.80±9.63和AP组131.00±12.94、C组224.40±15.63；均 P〈0.05）,白细胞黏附（个/mm^2）明显增加（HLAP组343.60±13.86和AP组114.00±8.03、C组18.80±2.28,P〈0.05），胰腺病理评分升高（HLAP组10.00±1.59和AP组6.60±1.14、C组1.00±0.71，P〈0.05）。结论高脂血症可加重急性胰腺炎实验动物的微循环系统损伤，促进微循环障碍。

关键词：胰腺炎高脂血症仓鼠动物模型胰腺微循环

早期积极液体复苏在轻症急性胰腺炎中的应用价值

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中华急诊医学杂志 2019年第6期28卷 794-797页

作者：李贺高明葛魏巍尹纯林孙远松王召华闵安安徽医科大学第二附属医院急诊外科合肥230601

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是多种原因引起胰酶激活,导致胰腺损伤,伴有或不伴有局部或全身并发症的一种急性炎症反应,总体病死率5%~10%[1]。近年来AP发病有上升趋势,是消化疾病者住院治疗的首要病因[2]。目前对于急性胰腺炎治... 详细信息

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是多种原因引起胰酶激活,导致胰腺损伤,伴有或不伴有局部或全身并发症的一种急性炎症反应,总体病死率5%~10%[1]。近年来AP发病有上升趋势,是消化疾病者住院治疗的首要病因[2]。目前对于急性胰腺炎治疗能明确改善预后的仅有液体治疗和肠内营养[3]。因MSAP和SAP具有较高的死亡率,故较多的研究主要集中在MSAP和SAP,而对于MAP研究较少。早期积极的液体复苏被证明在MSAP和SAP治疗中有着积极的作用,但液体复苏在MAP有何应用价值有待进一步研究。本文将对积极液体复苏在MAP治疗中的作用报道如下。

关键词：急性胰腺炎液体复苏早期住院治疗轻症急性炎症反应全身并发症 SAP

超声引导下经皮穿刺置管引流在重症急性胰腺炎治疗中的应用

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安徽医科大学学报 2013年第10期48卷 1262-1263页

作者：李贺项和平王伟高明程俊葛魏巍汪亨通付锐安徽医科大学第二附属医院急诊外科合肥230601

对28例重症急性胰腺炎患者行超声引导下经皮穿刺置管引流,并对疗效进行评价。结果显示28例患者中,经治疗后治愈23例(82.1%),有效4例(14.3%)。表明超声引导下经皮穿刺置管引流创伤小,疗效较为显著,且便于操作,可部分避免传统的外科手术治... 详细信息

对28例重症急性胰腺炎患者行超声引导下经皮穿刺置管引流,并对疗效进行评价。结果显示28例患者中,经治疗后治愈23例(82.1%),有效4例(14.3%)。表明超声引导下经皮穿刺置管引流创伤小,疗效较为显著,且便于操作,可部分避免传统的外科手术治疗,值得临床推广应用。

关键词：胰腺炎经皮穿刺超声引流术

高级模拟人结合团队模拟教学在急诊医学临床教学中的应用研究

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九江学院学报（自然科学版） 2020年第3期35卷 7-9页

作者：葛魏巍李贺安徽医科大学第二附属医院急诊外科安徽合肥230601

基于中国急诊和临床学相关专业充分运用的模拟人教学模式,文章对模拟人教学产生的影响进行深入研讨,并以此来优化教学质量。将60名本校临床医学专业学生随机分为两组。对照组继续使用传统的教学模式也就是课堂教学,试验组选择新型模拟... 详细信息

基于中国急诊和临床学相关专业充分运用的模拟人教学模式,文章对模拟人教学产生的影响进行深入研讨,并以此来优化教学质量。将60名本校临床医学专业学生随机分为两组。对照组继续使用传统的教学模式也就是课堂教学,试验组选择新型模拟人的教学模式。试验后,对参与的学生发放了问卷调查。对两组的结论及反馈进行归纳,得出以下几点:一是激发学生的学习兴趣,二是提升学生的逻辑思维能力,三是解决问题能力,四是提升对基础知识的理解和应用。对教学模式的满意度评价,试验组明显高于对照组,两者差异具有统计学意义。

关键词：模拟人教学急诊医学

多芯片联合筛选小肠克罗恩病相关致病基因及诊断效能分析

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现代消化及介入诊疗 2022年第5期27卷 620-623页

作者：郑娴娴葛魏巍合肥市第一人民医院南区滨湖医院检验科 230032 安徽医科大学第四附属医院急诊科

目的联合多个芯片筛选小肠克罗恩病相关致病基因,并分析其诊断效能,以便从分子水平探索疾病的调控机制。方法通过GEO数据库检索并下载相关芯片数据集。利用GEO在线分析工具筛选差异表达的miRNA、R语言筛选差异表达的mRNA,构建miRNA-mRN... 详细信息

目的联合多个芯片筛选小肠克罗恩病相关致病基因,并分析其诊断效能,以便从分子水平探索疾病的调控机制。方法通过GEO数据库检索并下载相关芯片数据集。利用GEO在线分析工具筛选差异表达的miRNA、R语言筛选差异表达的mRNA,构建miRNA-mRNA调控网络。差异表达的mRNA通过R语言进行GO富集和KEGG通路富集分析,运用String数据库构建蛋白互作网络(PPI)、Cytoscape软件筛选关键基因,应用ROC曲线进行诊断效能分析。结果GSE102127数据集中共筛选出15个差异表达的miRNA,GSE20881、GSE75214、GSE102133数据集融合后筛选出273个差异mRNA,构建38个miRNA-mRNA调控关系对。差异mRNA GO富集在白细胞迁移、中性粒细胞迁移等生物过程;KEGG富集注释表明差异基因主要参与IL-17、肿瘤坏死因子等信号通路。Cytoscape软件的cytoHubba模块下基于“Degree”、“MCC”、“Betweenness”算法筛选排名前10的关键基因,取交集后得到IL-6、IL-1β、MMP9及ICAM14个关键基因。ROC曲线分析发现仅MMP9可用于诊断小肠克罗恩病,其P值为0.025,AUC为0.361,敏感性100%,特异性31%。结论多芯片联合成功筛选出小肠克罗恩病致病基因,并构建了miRNA-mRNA调控网络,致病基因尚无法作为小肠克罗恩病早期诊断的分子标志物。

关键词：小肠克罗恩病多芯片联合致病基因 miRNA-mRNA