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用于细胞球状体培养的准球形底微孔阵列的快速加工方法

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分析化学 2023年第8期51卷 1292-1301页

作者：张郭远吴蕾彭熙尧葛玉卿刘婷徐铁刚赵建龙中国科学院上海微系统与信息技术研究所传感技术联合国家重点实验室中国科学院大学材料科学与光电技术学院

与传统的二维单层细胞相比，细胞球状体的功能更类似于体内细胞，因此在药物筛选和生理病理学研究中受到广泛关注。在低吸附准球形微孔阵列上培养细胞球状体可以实现尺寸可控和形态一致，并具有易于实现高通量的优点。然而，目前制造准... 详细信息

与传统的二维单层细胞相比，细胞球状体的功能更类似于体内细胞，因此在药物筛选和生理病理学研究中受到广泛关注。在低吸附准球形微孔阵列上培养细胞球状体可以实现尺寸可控和形态一致，并具有易于实现高通量的优点。然而，目前制造准球形微孔阵列的工艺通常比较复杂，而且微孔较浅，导致细胞球状体容易从微孔中滑出。针对这些问题，本研究提出一种基于3D打印和压印法的聚二甲基硅氧烷（PDMS）微孔阵列制备方法。此方法具有操作简单且成本低等优点，制备出的微孔阵列的直径和间距约为600μm，并具有准球形底部和高约1000μm的侧壁。由扫描电镜图可见微孔的准球形底面表面光滑，微孔底部形状的片内一致性约为10%，片间一致性约为5%。对压印过程的研究表明，通过调整微孔间距、薄膜厚度和压印时间等工艺参数可获得更高密度或者更高均一度的阵列。荧光微珠模拟细胞接种实验和流场仿真结果表明，此微孔阵列能够有效减少细胞或细胞球状体从孔中滑出的概率。将此器件应用于细胞球状体的培养，效果良好。本研究提出的制作方法为细胞球状体培养提供了有力工具，在细胞球状体制备和高通量药物筛选等领域具有潜在的应用前景。

关键词：准球形底微孔阵列细胞球状体 3D打印微加工微流控

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肝脏疾病的体外细胞模型研究进展

生物医学工程学杂志 2021年第1期38卷 178-184页

作者：刘婷葛玉卿袁敏熊巧(综述) 赵建龙(审校) 上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093 中国科学院上海微系统与信息技术研究所传感技术联合国家重点实验室上海200050 海军军医大学附属长海医院泌尿外科上海200433

不健康的饮食、作息和滥用药物会引起多种肝脏疾病,包括脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等,严重影响人体健康。构筑体外细胞模型在研究肝病及其药物开发中具有重要意义。目前,国内外研究者已经开发出多种体外肝脏疾病模型。本文概... 详细信息

不健康的饮食、作息和滥用药物会引起多种肝脏疾病,包括脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝癌等,严重影响人体健康。构筑体外细胞模型在研究肝病及其药物开发中具有重要意义。目前,国内外研究者已经开发出多种体外肝脏疾病模型。本文概括了体外肝脏病理模型构建的常用策略,并从原料、方法、指标等方面介绍了四种典型肝病相关的体外细胞模型,期望可为肝病模型相关研究人员提供参考。

关键词：肝脏疾病体外模型微环境肝功能标志蛋白

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大豆磷脂酰胆碱的提取纯化研究

大豆磷脂酰胆碱的提取纯化研究

作者：葛玉卿中南大学

学位级别：硕士

磷脂酰胆碱(PC),是一种磷脂,具有特殊的理化性质和生理功效,广泛应用于食品、医药、化妆品等领域,尤其在作医药乳化剂和脂质体制备方面具有广阔的前景。目前国内所需求的高纯卵磷脂主要依赖进口。而我国大豆资源丰富,利用制油工业的附产... 详细信息

磷脂酰胆碱(PC),是一种磷脂,具有特殊的理化性质和生理功效,广泛应用于食品、医药、化妆品等领域,尤其在作医药乳化剂和脂质体制备方面具有广阔的前景。目前国内所需求的高纯卵磷脂主要依赖进口。而我国大豆资源丰富,利用制油工业的附产物-大豆磷脂制备高纯PC,成本低廉,附加值高,是大豆磷脂深加工的发展方向。为了制备高纯度磷脂酰胆碱,本文以浓缩大豆粗磷脂为原料,采用丙酮和超临界CO萃取两种方法脱油,得到粉末磷脂,并比较了其质量。在萃取压力30MPa,萃取温度50℃,萃取时间2h,流量30L/h的条件下,用超临界CO萃取使丙酮不溶物(即粗磷脂的含量)由65.3%提高到98.3%,其PC的含量为20.6%;在丙酮用量200ml、萃取时间15min、萃取温度40℃用丙酮脱油使丙酮不溶物的含量达到97.6%,其PC的含量为20.1%。用乙醇提取富集PC,考察了乙醇浓度、固液比、温度、时间、抽提次数对PC含量和提取率的影响;并用4正交表进行条件优化,结果表明:影响PC含量和提取率的主要因素是温度和乙醇浓度,最佳条件为乙醇浓度95%,固液比1:20,提取时间30min,温度35℃,抽提次数2次,PC含量提高到45.1%,提取率达62.0%,得到初步的富集。通过柱层析进一步纯化,采用中性氧化铝作吸附剂,对洗脱剂、洗脱方式、加样量和流量进行了研究;经过研究摸索,确定加样量(样品质量/吸附剂质量)为2.5%,流速3ml/min,以酸性氯仿-甲醇混合体系进行梯度洗脱,收集含有单一PC的馏分,经浓缩干燥,最终得到微黄色的卵磷脂产品。通过薄层层析和红外光谱鉴定分析,纯度为95.1%,其收率为86.6%。

关键词：大豆磷脂磷脂酰胆碱超临界萃取柱层析提取纯化

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溶剂法精制磷脂酰胆碱的研究

中国油脂 2004年第11期29卷 38-41页

作者：柳建设葛玉卿中南大学资源加工与生物工程学院长沙市410083

为了提高磷脂产品中磷脂酰胆碱 (PC)的含量 ,研究了以浓缩大豆磷脂为原料 ,采用丙酮和乙醇作溶剂 ,制备高含量磷脂酰胆碱。用丙酮脱油时 ,在料溶比为 15∶2 0 0、提取时间 15min、提取温度 4 0℃的最佳脱油工艺条件下 ,得到丙酮不溶物... 详细信息

为了提高磷脂产品中磷脂酰胆碱 (PC)的含量 ,研究了以浓缩大豆磷脂为原料 ,采用丙酮和乙醇作溶剂 ,制备高含量磷脂酰胆碱。用丙酮脱油时 ,在料溶比为 15∶2 0 0、提取时间 15min、提取温度 4 0℃的最佳脱油工艺条件下 ,得到丙酮不溶物含量为 97.6 %的中间产物———粉末磷脂。用乙醇提取富集其中的磷脂酰胆碱 ,通过单因子试验 ,研究了粉末磷脂与溶剂的比例、乙醇浓度、提取温度、时间和次数对PC含量和提取率的影响。试验结果表明 ,在乙醇浓度 95 % ,固液比 1∶2 0 ,提取时间 30min ,温度 35℃ ,抽提次数 2次的条件下 ,PC含量和提取率均较优。在最佳试验条件下 ,PC含量可提高到 4 5 .1% ,提取率为 6 2 .0 %。

关键词：粉末磷脂制磷磷脂酰胆碱丙酮溶剂法精制浓缩大豆磷脂含量乙醇浓度乙醇提取

精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析及细胞成像研究

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 987-990页

作者：刘群葛玉卿李芳秋张士新顾宁王中秋卢光明南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002 东南大学生物科学与医学工程学院江苏南京210096 南京军区南京总医院医学影像科江苏南京210002

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒,以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断。方法:在偶联剂EDC/NHS作用下,将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合,制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs)。透射电镜观察颗粒的... 详细信息

目的:制备精子蛋白17(Sp17)抗体免疫磁性纳米颗粒,以期用于卵巢癌的磁共振成像靶向诊断。方法:在偶联剂EDC/NHS作用下,将壳聚糖修饰磁性氧化铁纳米颗粒与抗人Sp17抗体结合,制备抗Sp17抗体免疫磁性纳米颗粒(IMNPs)。透射电镜观察颗粒的形貌特征,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳评价抗体与磁性颗粒的结合效果,ELISA检测免疫磁性颗粒的免疫活性。将IMNPs与转染人Sp17的卵巢癌HO-8910细胞共孵育,进行体外磁共振成像检测。结果:成功实现了抗体与磁性纳米颗粒的偶联,并且IMNPs保持良好的抗体活性。磁共振显示该颗粒成功靶向Sp17阳性的细胞,没有发生明显的非特异吸附。结论:该免疫磁性纳米颗粒特异性良好,可进一步用作卵巢癌的靶向治疗研究。

关键词：精子蛋白17抗体免疫磁性颗粒活性分析磁共振成像

壳聚糖修饰氧化铁磁性纳米颗粒的制备和性能研究

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功能材料与器件学报 2012年第2期18卷 147-152页

作者：葛玉卿张宇顾宁中国科学院上海微系统与信息技术研究所传感技术国家重点实验室上海200050 东南大学生物科学与医学工程学院生物电子学国家重点实验室江苏省生物材料与器件实验室南京210009

通过共沉淀法制备氧化铁磁性纳米颗粒,用壳聚糖对其表面进行修饰得到样品(CS@MNPs);表征其形貌结构、尺寸、表面基团、表面电荷、磁学性质和在不同介质中的稳定性等。实验结果表明,CS@MNPs具有典型的立方反尖晶石晶体结构;粒径为16.5nm... 详细信息

通过共沉淀法制备氧化铁磁性纳米颗粒,用壳聚糖对其表面进行修饰得到样品(CS@MNPs);表征其形貌结构、尺寸、表面基团、表面电荷、磁学性质和在不同介质中的稳定性等。实验结果表明,CS@MNPs具有典型的立方反尖晶石晶体结构;粒径为16.5nm;在生理(pH值7.4)条件下拥有较高的正电荷(10mV);呈现超顺磁性,对驰豫时间T1、T2,尤其是T2*具有很强的响应;在双蒸馏水和含10%新生牛血清的RPMI 1640培养液中具有良好的稳定性,具有作为磁共振造影剂的潜力。

关键词：氧化铁磁性纳米颗粒壳聚糖表面修饰磁共振造影剂

磁性氧化铁纳米颗粒与脂质体介导EGFP基因转染内皮祖细胞的比较研究

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中国医学影像技术 2008年第5期24卷 754-758页

作者：聂芳滕皋军张宇葛玉卿东南大学附属中大医院放射科＆分子影像与功能影像实验室东南大学生物科学与医学工程系江苏南京210009

目的评价精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(nano-Fe2O3-arginine)及脂质体作为基因载体在针对外周血来源的内皮祖细胞转染中的可行性,并对两者的转染效率进行比较。方法将nano-Fe2O3-arginine及LipofectamineTM2000作为基因载体连接... 详细信息

目的评价精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒(nano-Fe2O3-arginine)及脂质体作为基因载体在针对外周血来源的内皮祖细胞转染中的可行性,并对两者的转染效率进行比较。方法将nano-Fe2O3-arginine及LipofectamineTM2000作为基因载体连接绿色荧光蛋白pcDNA3.1(+)/EGFP质粒在体外转染兔外周血来源的内皮祖细胞,荧光显微镜观察转染结果并计算转染效率;转染后48h采用MTT比色法测定这两种载体对内皮祖细胞增殖和功能的影响以了解其细胞毒性。结果LipofectamineTM2000作为基因载体将报告基因转染至兔外周血内皮祖细胞内并成功表达,用荧光显微镜可观察到发绿色荧光的细胞,转染效率达38.3%;而nano-Fe2O3-arginine转染组在荧光显微镜仅能观察到少量绿色荧光细胞,转染效率不到5%;两种载体对内皮祖细胞的增殖活性未见明显影响。结论脂质体作为载体转染内皮祖细胞的效率明显高于精氨酸包裹的超顺磁性氧化铁纳米颗粒,脂质体可较为有效安全地转染基因至内皮祖细胞,从而为内皮祖细胞联合基因治疗疾病奠定了基础。

关键词：超顺磁性氧化铁脂质体内皮祖细胞基因载体绿色荧光蛋白

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三种细胞共培养微流控芯片的设计和制作

生物工程学报 2017年第2期33卷 294-300页

作者：王帅超葛玉卿吴蕾郭慧杨仕平金庆辉上海师范大学生命与环境科学学院上海200234 中国科学院上海微系统与信息技术研究所传感技术联合国家重点实验室上海200050

设计一种具有"微坝"和"微缝"结构的微流控芯片,能够物理隔离不同细胞,而且培养基中小分子营养物质可以自由流通。实验结果表明在芯片上可以共培养人肺腺癌细胞(A549)、人胚肺成纤维细胞(HLF-1)和人内皮细胞(HUVECs)三种细胞,在72 h培养... 详细信息

设计一种具有"微坝"和"微缝"结构的微流控芯片,能够物理隔离不同细胞,而且培养基中小分子营养物质可以自由流通。实验结果表明在芯片上可以共培养人肺腺癌细胞(A549)、人胚肺成纤维细胞(HLF-1)和人内皮细胞(HUVECs)三种细胞,在72 h培养后三种细胞生长状态良好,具有细胞图形化的特点和功能,为下一步开展多种细胞相互作用等相关研究提供重要的技术平台。

关键词：细胞共培养微流控芯片微坝和微缝结构

比较两种方法修饰的免疫磁性纳米探针在小鼠体内肿瘤磁共振成像中的作用

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中国医学影像技术 2010年第8期26卷 1413-1416页

作者：张士新李芳秋葛玉卿马明张帆南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002 东南大学生物科学与医学工程学院江苏南京210096 南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所医学影像科江苏南京210002

目的评价两种免疫磁性纳米探针(Anti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp17-CS@MNPs)对小鼠体内肿瘤MRI的靶向效果。方法分别将硅烷和壳聚糖修饰的磁性纳米粒与抗Sp17单克隆抗体交联,形成两种免疫磁性纳米探针(An-ti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp1... 详细信息

目的评价两种免疫磁性纳米探针(Anti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp17-CS@MNPs)对小鼠体内肿瘤MRI的靶向效果。方法分别将硅烷和壳聚糖修饰的磁性纳米粒与抗Sp17单克隆抗体交联,形成两种免疫磁性纳米探针(An-ti-Sp17-Silane@MNPs和Anti-Sp17-CS@MNPs),对荷瘤裸鼠注射后进行MR扫描,并解剖实验鼠,取器官组织(肺、肝和肿瘤)进行普鲁士蓝染色,观察铁粒子聚集情况。结果两种探针注射2 h后,肿瘤感兴趣区均可见T2信号明显降低,Anti-Sp17-CS@MNPs组降低更为显著。组织学检查见Anti-Sp17-Silane@MNPs注射组在肺、肝均有明显铁粒子聚集,而Anti-Sp17-CS@MNPs注射组各个器官组织铁粒子非特异聚集明显减少。结论 MRI中,对于小鼠体内肿瘤,Anti-Sp17-CS@MNPs探针比Anti-Sp17-Silane@MNPs特异性更好。

关键词：免疫磁性纳米粒子表面修饰磁共振成像