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高糖对原代培养人血管内皮细胞TGF-β基因表达和分泌LN及C-IV的影响

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基础医学与临床 2004年第4期24卷 428-431页

作者：钟世军欧钢卫葛正龙遵义医学院生物化学教研室遵义563003

本研究旨在探讨体外培养条件下高糖状态对人血管内皮细胞的影响。以原代培养人脐带静脉内皮细胞为材料 ,采用RT PCR技术观察高糖状态下原代培养血管内皮细胞转化生长因子 β(TGF β)基因表达水平 ,用放射免疫分析法观察高糖作用下的血... 详细信息

本研究旨在探讨体外培养条件下高糖状态对人血管内皮细胞的影响。以原代培养人脐带静脉内皮细胞为材料 ,采用RT PCR技术观察高糖状态下原代培养血管内皮细胞转化生长因子 β(TGF β)基因表达水平 ,用放射免疫分析法观察高糖作用下的血管内皮细胞分泌基底膜蛋白成分IV型胶原蛋白 (IV C)及层粘连蛋白 (LN)的情况。在16 6 7mmol LD 葡萄糖浓度作用 6、12和 2 4h ,血管内皮细胞TGF β基因表达分别增高了 0 38、1 2 2和 1 4 3倍 ,而血管内皮细胞分泌IV C的量无变化 ;在 16 6 7mmol L糖浓度下培养 2 4h血管内皮细胞分泌LN的量下降了 5 5 6 0 %。结果显示在较短时间内糖浓度升高可引起血管内皮细胞TGF β基因表达增强 ,而对血管内皮细胞分泌LN起抑制作用 ,对IV C的分泌无明显影响。在微血管病变早期 ,高糖可能通过血管内皮细胞TGF β基因高表达而起主要作用。

关键词：血管内皮细胞 TGF-β 高糖分泌 LN IV-C 原代培养糖浓度基因表达水平粘连蛋白

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人白细胞介素-12的纯化及鉴定

安徽农业科学 2009年第14期37卷 6353-6355页

作者：黄进罗果葛正龙遵义医学院珠海校区生物工程系广东珠海519041 遵义医学院中心实验室贵州遵义563000 遵义医学院生物化学教研室贵州遵义563000

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸... 详细信息

[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。

关键词：人白细胞介素-12 纯化转基因马铃薯

转基因马铃薯中纯化人白介素-12的生物学活性分析

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安徽农业科学 2010年第3期38卷 1173-1176页

作者：罗果黄进葛正龙遵义医学院中心实验室贵州遵义563003 遵义医学院珠海校区生物工程系广东珠海519041 遵义医学院生物化学教研室贵州遵义563003

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度... 详细信息

分析了转基因马铃薯中纯化人白介素-12(hIL-12)的生物学活性。结果表明,hIL-12纯化品在体外能刺激植物凝集素(PHA)活化的外周血单个核细胞(PBMC)增殖;hIL-12纯化品对人肝癌细胞HepG2.2.15的生长具有抑制作用,且其抑制效果随hIL-12浓度的升高而增强;hIL-12纯化品在体外对乙肝病毒DNA的复制和表面抗原、e抗原的分泌产生抑制作用。

关键词：转基因马铃薯人白介素-12 生物活性

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阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用

生物技术通报 2013年第2期29卷 172-176页

作者：周鹤峰邵敏李长福葛正龙遵义医学院珠海校区生物工程系珠海519041 遵义医学院生物化学教研室遵义563003

制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊... 详细信息

制备阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,ES)胶体金快速检测试纸并对其性能进行评价。通过柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记抗阪崎肠杆菌特异性的单克隆抗体,采用双抗夹心法,将标记的胶体金复合物喷涂于试纸的结合垫,另一单抗和二抗(羊抗鼠IgG抗体)分别包被在硝酸纤维素膜的检测线(T)和控制线(C)上,制备出检测阪崎肠杆菌胶体金试纸条,进行敏感性、特异性、稳定性、重复性试验,借助于简单的增菌过程,在6 h内即可检测出样品中阪崎肠杆菌的含量,灵敏度达到1×104CFU/mL,与常见的食源性致病菌无交叉反应。结果显示该试纸具有简单、灵敏、特异、稳定、快速等优点,可用于ES的检测。

关键词：阪崎肠杆菌单克隆抗体胶体金快速检测

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专业认证标准下临床医学课程设置研究与实践

重庆医学 2014年第16期43卷 2095-2097页

作者：覃晓龙葛正龙李春鸣遵义医学院教务处贵州遵义563003

“中国医学教育质量保证体系研究课题组”研究制定的《本科医学教育标准-临床医学专业（试行）》（以下简称《标准》）于2009年9月经教育部、原卫生部批准公布，是医学教育专业认证的标准和指南。本标准是以五年制本科临床医学专业教育... 详细信息

“中国医学教育质量保证体系研究课题组”研究制定的《本科医学教育标准-临床医学专业（试行）》（以下简称《标准》）于2009年9月经教育部、原卫生部批准公布，是医学教育专业认证的标准和指南。本标准是以五年制本科临床医学专业教育为适用对象，对教育教学全过程和毕业生素质提出了最基本要求。教育部要求2020年要完成高等学校临床医学专业首轮认证工作，建立起具有中国特色与国际医学教育实质等效的医学专业认证制度。这就要求各个学校之间按自身实际情况不同因地制宜，制订出符合本校特色的教育教学计划和课程支撑体系，在最基本要求达到的基础上，彰显特色，达到或超越专业认证标准。

关键词：临床医学专业认证标准课程设置医学教育标准五年制本科质量保证体系医学专业教育国际医学教育

c—myc反义寡核苷酸对大鼠半乳糖性白内障形成的影响

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中华眼科杂志 2008年第4期44卷 361-364页

作者：林宏华葛正龙范芳曾小平安徽省立儿童医院儿内科合肥市230051 遵义医学院生物化学教研室遵义医学院附属医院眼科

白内障是眼科常见病，是主要的致盲性眼病之一。国内外学者正在积极探索治疗白内障的有效方法。随着分子生物学技术的快速发展，白内障的基因治疗已经进入人们的研究范围。癌基因的异常表达与晶状体上皮细胞（1ens epithelial cell，LE... 详细信息

白内障是眼科常见病，是主要的致盲性眼病之一。国内外学者正在积极探索治疗白内障的有效方法。随着分子生物学技术的快速发展，白内障的基因治疗已经进入人们的研究范围。癌基因的异常表达与晶状体上皮细胞（1ens epithelial cell，LEC）的增殖分化密切相关，而LEC的增殖分化是白内障发生发展的病理基础。许多研究结果表明，

关键词：白内障形成反义寡核苷酸半乳糖性 myc 分子生物学技术晶状体上皮细胞大鼠基因治疗

Gstm3在何首乌苷延缓SH-SY5Y细胞衰老中的作用

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遵义医科大学学报 2022年第3期45卷 296-303页

作者：吴德静范芳陈佳瑜葛正龙遵义医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州遵义563099

目的初步探讨Gstm3在何首乌苷延缓SH-SY5Y细胞衰老中的作用及可能机制。方法从针对Gstm3基因的4组含不同shRNA序列的干扰载体中筛选沉默效率最高的一组,作为Gstm3沉默组(shGstm3-P/D),同时设空白对照组(NC-P/D,未转染)及阴性对照组(shNC... 详细信息

目的初步探讨Gstm3在何首乌苷延缓SH-SY5Y细胞衰老中的作用及可能机制。方法从针对Gstm3基因的4组含不同shRNA序列的干扰载体中筛选沉默效率最高的一组,作为Gstm3沉默组(shGstm3-P/D),同时设空白对照组(NC-P/D,未转染)及阴性对照组(shNC-P/D,转染无意义的阴性对照病毒载体shRNA序列),对照组(NC组,SH-SY5Y细胞)、D-Gal处理组(D-Gal组,SH-SY5Y细胞用D-Gal处理)、何首乌苷和D-Gal共同处理组(P/D组,SH-SY5Y细胞用何首乌苷和D-Gal共同处理);采用qPCR检测SH-SY5Y细胞中Gstm3 mRNA水平,细胞端粒长短,CCK8法检测细胞活力;Western blotting检测转染后各组细胞Gstm3、Bax、Bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测转染后各组细胞凋亡率。结果qPCR和WB检测结果显示,与NC组和shNC组比较shGstm3-P/D组SH-SY5Y细胞中Gstm3 mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.01);与NC组比较,D-Gal组端粒长度明显缩短,细胞活力下降;与D-Gal组比较,P/D组端粒长度明显增加,细胞活力升高;而与P/D组比较,shGstm3-P/D组端粒长度明显缩短,细胞活力明显下降(P<0.05);与NC-P/D组和shNC-P/D组比较,shGstm3-P/D组Bcl-2蛋白水平降低、Bax蛋白水平增加(P<0.05),且细胞凋亡率分别增加11.22%和9.07%(P<0.001)。结论Gstm3通过调控细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及细胞凋亡率参与何首乌苷延缓SH-SY5Y细胞衰老。

关键词：何首乌何首乌苷 Gstm3 衰老凋亡

基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶

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生物技术通报 2013年第12期29卷 141-145页

作者：邵敏李长福葛正龙周鹤峰遵义医学院珠海校区生物工程系珠海519041 遵义医学院生物化学教研室遵义563003

利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突... 详细信息

利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突变体文库,通过刚果红平板染色法进行高通量筛选,最终获得两株突变酶,其最适作用温度比野生酶都提高了15℃,最适pH与野生酶基本相同,野生酶酶活力为84.2 U/mL,突变酶酶活力分别为247.3 U/mL和125.1 U/mL,是野生酶酶活的2.9倍和1.5倍。试验获得了具有耐高温高酶活的β-葡聚糖酶,为β-葡聚糖酶的工业化应用奠定基础。

关键词：枯草芽孢杆菌 β-葡聚糖酶易错PCR 定向进化

丹参对大鼠胃粘膜内SOD、LPO巯基物质及胃粘液分泌的影响

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中国中西医结合杂志 1997年第S1期17卷 136-138,291页

作者：庹必光晏永慧欧刚卫葛正龙赵逵贵州省遵义医学院贵州563003

为了探讨丹参保护胃粘膜作用的机制,通过建立大鼠消炎痛胃粘膜损伤模型,观察了丹参对胃粘膜内超氧化物歧化酶、脂质过氧化物、巯基物质及胃粘液分泌的影响。结果表明,丹参能明显增加胃粘膜内超氧化物歧化酶的活性,增加巯基含量,降低脂... 详细信息

为了探讨丹参保护胃粘膜作用的机制,通过建立大鼠消炎痛胃粘膜损伤模型,观察了丹参对胃粘膜内超氧化物歧化酶、脂质过氧化物、巯基物质及胃粘液分泌的影响。结果表明,丹参能明显增加胃粘膜内超氧化物歧化酶的活性,增加巯基含量,降低脂质过氧化物含量,增加胃粘液的分泌。提示清除氧自由基和促进胃粘液分泌可能是丹参保护胃粘膜作用的机制之一。

关键词：丹参氧自由基胃粘液