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作者：葛建雅南京农业大学

学位级别：硕士

禽类骨骼肌纤维数量在胚胎期已决定,出壳后由于蛋白质沉积,肌肉质量的获得体现在肌纤维直径的増粗和长度的增加上,胚胎期骨骼肌生长发育对成体的产肉潜能影响巨大。骨骼肌的生长发育在不同的品种间有明显差异,目前关于鸭骨骼肌在品种间... 详细信息

禽类骨骼肌纤维数量在胚胎期已决定,出壳后由于蛋白质沉积,肌肉质量的获得体现在肌纤维直径的増粗和长度的增加上,胚胎期骨骼肌生长发育对成体的产肉潜能影响巨大。骨骼肌的生长发育在不同的品种间有明显差异,目前关于鸭骨骼肌在品种间差异的研究较少。本文主要对北京鸭、连城白鸭和杂交F5资源群体骨骼肌发育差异进行分析。本研究以北京鸭、连城白鸭和F5资源群体(北京鸭♂×连城白鸭♀杂交第5个世代)胸肌和腿肌为研究对象,通过HE染色比较胚胎期(E14、E21、E28)和7周龄鸭骨骼肌肌纤维的差异,初步明确不同品种鸭骨骼肌的发育规律及品种特性;然后,检测影响骨骼肌发育相关基因的表达水平;最后,再通过DNA dot blot分析5hm C水平变化情况以及检测甲基化调控基因(Dnmts家族和Tets家族)的表达量,探究DNA甲基化水平变化对骨骼肌发育的影响。以下是本研究的主要结果:1.三个品种鸭骨骼肌重量指标分析在胚胎期,北京鸭的胸肌和腿肌均显著重于连城白鸭和F5资源群体,F5资源群体介于两者之间。胚胎期,腿肌率随胚龄的增加而降低,胸肌组织快速发育至E21,之后发育缓慢,表明E21是胸肌肌纤维增殖、融合得拐点;在成体时,胸肌重大于腿肌重。7W北京鸭的胸肌率显著高于F5资源群体的胸肌率,F5资源群体的腿肌率显著高于北京鸭。这些结果表明胚胎期腿肌发育较早,且腿肌重于胸肌;成体鸭胸肌获得肌肉重量的能力显著比腿肌强,此时蛋白质在胸肌重大量沉积。2.不同品种鸭骨骼肌发育表型指标分析通过HE染色观察北京鸭、连城白鸭和F5资源群体骨骼肌在胚胎期生长发育关键时间点的表型特征。结果发现,在E14时,北京鸭胸肌细胞核密度显著高于连城白鸭;连城白鸭腿肌细胞核密度在E21显著低于北京鸭和F5资源群体;在E28显著高于北京鸭和F5资源群体。7W成年鸭的骨骼肌肌纤维特性在品种间表现出显著差异。北京鸭肌肉组织的肌纤维横截面积(Cross-sectional area,CSA)和肌纤维直径(Muscle fiber diameter,MFD)比F5资源群体的高,北京鸭的肌纤维密度(Number of muscle fibers per unit area,MFN)低于F5资源群体,且在不同时期表现出品种间的显著差异,结果表明,胚胎期决定肌纤维数量,成体的肌肉产量的增加主要依靠肌纤维直径的増粗和长度的增加起决定作用,且由于地方品种种质资源的差异,不同时期肌纤维特性在品种间表现出显著差异。3.不同品种鸭肌肉发育相关基因表达分析通过q RT-PCT检测MRFs家族、Pax7和My HCⅡ在三个品种鸭胸肌、腿肌发育不同时期的表达水平。结果发现,Mrf4和Myo G基因在鸭胚胸肌组织发育至E21时均有较高的表达水平,表明E21是胸肌发育的转折点。Pax7的表达模式在三个品种鸭中差异较大,揭示Pax7表达水平的高低在肌肉发育上存在品种间的差异。Myo D基因m RNA在鸭胚胎期胸肌、腿肌中均有表达,表达量变化趋势在胸肌中先升高后降低,在腿肌中无统一趋势,推测与品种不同有关,且在胚胎期和7周龄腿肌组织中有较高表达水平。7W北京鸭和F5资源群体肌肉组织中各基因m RNA的表达模式均有差异。成肌发育相关基因在胚胎期和成体骨骼肌组织中的表达量在品种间均呈现显著差异,表明品种间骨骼肌发育差异在胚胎期已有体现。4.不同品种鸭骨骼肌组织中DNA甲基化水平的差异通过DNA dot blot分析北京鸭、连城白鸭和F5资源群体胸肌、腿肌组织5hm C水平变化情况以及检测Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因的m RNA表达量,分析在不同品种鸭骨骼肌发育过程中,DNA甲基化水平变化差异。结果显示,在E14时,北京鸭胸肌组织中Tet1、Tet2和Tet3基因m RNA表达量和5hm C表达水平均显著高于连城白鸭和F5资源群体,表明北京鸭胸肌在E14时去甲基化程度显著高于连城白和F5资源群体。在E21时,三个品种鸭的胸肌、腿肌组织中全基因组5hm C均有较高表达水平,表明E21是鸭骨骼肌进行全基因组去甲基化的重要时期。Tet2基因在胚胎发育后期(E21-E28)和7周龄F5资源群体骨骼肌组织中均有较高表达水平。Dnmt1、Dnmt3a、Tet1和Tet3在7周龄北京鸭肌肉组织中的表达水平比F5资源群体高。Dnmt3b和Tet2基因在F5资源群体胸肌中m RNA的表达水平显著高于北京鸭(P<0.05)。这些结果表明,DNA甲基化和去甲基化在不同品种间的表达水平存在差异,这种差异会导致不同品种鸭之间的肌肉发育差异。

关键词：北京鸭连城白鸭骨骼肌肌纤维特性生肌调节因子甲基化

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北京鸭、连城白鸭及其杂交F_(5)资源群体骨骼肌发育差异的研究

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南京农业大学学报 2022年第6期45卷 1235-1245页

作者：李东锋葛建雅王浩彬何宗亮金通于敏莉南京农业大学动物科技学院江苏南京210095 南京市畜牧家禽科学研究所江苏南京210036 南京农业大学淮安研究院江苏淮安223005

[目的]本研究以北京鸭、连城白鸭和杂交F_(5)资源群体(北京鸭♂×连城白鸭♀杂交第5个世代)胸肌和腿肌为研究对象,分析不同品种鸭骨骼肌的发育规律及品种差异,探究基因组DNA甲基化水平变化对骨骼肌发育的影响。[方法]通过HE染色,比较胚... 详细信息

[目的]本研究以北京鸭、连城白鸭和杂交F_(5)资源群体(北京鸭♂×连城白鸭♀杂交第5个世代)胸肌和腿肌为研究对象,分析不同品种鸭骨骼肌的发育规律及品种差异,探究基因组DNA甲基化水平变化对骨骼肌发育的影响。[方法]通过HE染色,比较胚胎期骨骼肌生长发育关键时间点(E14、E21、E28)和上市日龄(7周龄,7W)鸭骨骼肌肌纤维的表型特征;分析成肌发育和DNA甲基化调控相关基因的表达差异;DNA dot blot检测骨骼肌中5-羟甲基胞嘧啶(5hmC)水平。[结果]在胚胎期,北京鸭的胸肌重和腿肌重均显著高于连城白鸭和F_(5)资源群体。HE染色结果显示,胚胎期北京鸭肌细胞核密度最高(P<0.05);7W北京鸭肌肉组织的肌纤维横截面积和肌纤维直径显著高于F_(5)资源群体,而肌纤维密度显著低于F_(5)资源群体。在胚胎期,成肌发育相关基因在F_(5)资源群体胸肌中表达水平较高,而腿肌中则偏低;7W时,F_(5)资源群体肌肉组织中Myf5、Mrf4、MyoG和MyHC的表达水平均显著高于北京鸭(P<0.05)。在E21时,3个品种鸭的胸肌、腿肌组织中全基因组5hmC水平最高,表明处于去甲基化的高峰期。Tet2基因在胚胎期和7周龄F_(5)资源群体骨骼肌中均有较高表达水平;Dnmt1、Dnmt3a、Tet1和Tet3在7周龄北京鸭肌肉组织中的表达水平较高(P<0.05)。[结论]胚胎期肌纤维特性在品种间表现出显著差异,并影响成体肌肉形成。基因组DNA甲基化水平的差异影响肌肉发育相关基因的表达,导致不同品种鸭之间的肌肉发育差异。

关键词：鸭骨骼肌肌纤维特性生肌调节因子甲基化

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体外两步酶解消化法评定4种饲料粉碎粒度与粗蛋白消化率的关系

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饲料研究 2017年第22期40卷 34-38页

作者：周根来殷洁鑫葛建雅封丽梅马敏谭德金江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300

试验旨在建立体外胃蛋白酶-胰蛋白酶两步酶解消化法,并用来测定不同蛋白原料不同粉碎粒度下的粗蛋白消化率。试验在前人研究基础上,采用不同浓度的胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解大豆粕并测定蛋白消化率,确定体外两步酶解消化法的最适条件。用... 详细信息

试验旨在建立体外胃蛋白酶-胰蛋白酶两步酶解消化法,并用来测定不同蛋白原料不同粉碎粒度下的粗蛋白消化率。试验在前人研究基础上,采用不同浓度的胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解大豆粕并测定蛋白消化率,确定体外两步酶解消化法的最适条件。用建立的消化方法分别测定4种原料(大豆粕、棉籽粕、菜籽粕和玉米酒精糟)5种粉碎粒度(12/20、20/40、40/60、60/80和80/100目)的粗蛋白消化率。试验结果表明:粒度60/80目的大豆粕的粗蛋白消化率最高,可达82.08%,比12/20、20/40和40/60目分别提高39.14%、14.27%和4.28%(P<0.05);80/100目的棉籽粕的粗蛋白消化率最高,可达58.50%,比12/20、20/40、40/60和60/80目分别提高21.72%、18.95%、11.66%和6.02%(P<0.05);菜籽粕和玉米酒精糟在粒度80/100目时粗蛋白消化率最高,分别是粒度12/20目同种原料消化率的1.46和2.04倍(P<0.05);大豆粕、菜籽粕和玉米酒精糟3种饲料原料的粗蛋白消化率与粉碎粒度的相关性为显著性相关(P<0.01),棉籽粕的相关性不显著(P=0.063)。综上可得,随着粉碎粒度的增大,4种原料的体外粗蛋白消化率显著提高,但粉碎至一定程度后提高不明显,而且除棉籽粕外呈显著线性负相关(P<0.01);不同原料获得最高体外粗蛋白消化率的粉碎粒度要求也不一致。

关键词：粉碎粒度蛋白质消化率体外胃蛋白酶胰蛋白酶

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药物非临床毒性试验周围神经系统组织病理学评估研究进展

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药物评价研究 2022年第8期45卷 1500-1505页

作者：李慧葛建雅闫振龙钱庄胡文元钟小群胡静陈晓俊李一昊彭瑞楠王娅缪成贤邵薇张亚群吕建军益诺思生物技术南通有限公司江苏南通226133

药物非临床毒性试验周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)组织病理学评估分为4种情况:未知或预期无神经毒性的一般毒性试验、可能有躯体神经毒性的一般毒性试验、可能有自主神经病的一般毒性试验以及预期有神经毒性作用的专门... 详细信息

药物非临床毒性试验周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)组织病理学评估分为4种情况:未知或预期无神经毒性的一般毒性试验、可能有躯体神经毒性的一般毒性试验、可能有自主神经病的一般毒性试验以及预期有神经毒性作用的专门神经毒性试验。美国毒性病理学会(Society of Toxicologic Pathology,STP)推荐最佳实践建议的目的是确保在药物非临床一般毒性试验和专门神经毒性试验的4种情况下,对PNS组织进行一致性、高效率取材、处理和评估。综述了PNS解剖的基本结构、PNS毒性试验情况分类及取材建议、PNS毒性试验不同情况下最佳实践建议、PNS神经病理学评估分析策略以及评估结果的记录,以期为我国药物非临床毒性试验中周围神经系统组织病理学评估提供一定参考。

关键词：药物非临床评价毒性试验周围神经系统组织病理学美国毒性病理学会

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药物非临床安全性评价毒性病理学评价及病理学数据分析要点

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药物评价研究 2022年第8期45卷 1472-1479页

作者：陈晓俊郑少秋闫振龙钱庄胡文元钟小群胡静李一昊彭瑞楠王娅李慧葛建雅缪成贤邵薇张亚群吕建军益诺思生物技术南通有限公司江苏南通226133 江西中医药大学江西南昌330103 长三角药物高等研究院长三角药学高等工程学院江苏南通226133

毒性病理学是一门综合了病理学和毒理学两门学科的交叉学科,主要研究有毒物质的潜在作用。准确诊断病变和报告组织病理学检查结果将继续在药物非临床安全性评价中发挥关键作用。此外,毒性病理学评价必须结合其他相关数据进行,例如临床... 详细信息

毒性病理学是一门综合了病理学和毒理学两门学科的交叉学科,主要研究有毒物质的潜在作用。准确诊断病变和报告组织病理学检查结果将继续在药物非临床安全性评价中发挥关键作用。此外,毒性病理学评价必须结合其他相关数据进行,例如临床观察、体质量变化、临床病理学结果、以及代谢和药动学数据。简要介绍了组织病理学检查的基本要素、组织病理学的特点、组织病理学诊断注意事项、病理学数据分析和报告病理学结果的要点,以期为中国药物非临床安全性评价毒性病理学组织病理学检查及病理学数据分析提供一定参考。

关键词：药物非临床安全性评价组织病理学有毒物质数据分析病理学数据

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非临床毒理学研究使用全切片图像进行组织病理学评价和同行评议的研究进展

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药物评价研究 2022年第8期45卷 1493-1499页

作者：葛建雅李慧闫振龙钱庄胡文元钟小群胡静陈晓俊李一昊彭瑞楠王娅缪成贤邵薇张亚群吕建军益诺思生物技术南通有限公司江苏南通226133

经过验证遵从良好实验室规范(GLP)并适合目的的全切片图像(WSI)系统,不仅可用于GLP条件下非临床毒理学研究的数字组织病理学评价和同行评议,而且可提高全球化数字组织病理学评价和同行评议的灵活性,并可提供数字化图像数据用于今后人工... 详细信息

经过验证遵从良好实验室规范(GLP)并适合目的的全切片图像(WSI)系统,不仅可用于GLP条件下非临床毒理学研究的数字组织病理学评价和同行评议,而且可提高全球化数字组织病理学评价和同行评议的灵活性,并可提供数字化图像数据用于今后人工智能和机器学习图像分析。简要介绍了美国食品和药品监督管理局和经济合作与发展组织关于在GLP条件下非临床毒理学研究中使用WSI或数字组织病理学的指导原则,硬件和软件的验证,合同研究组织验证WSI数据的采集和传输,委托方验证WSI数据的下载和查看,以及使用经过验证的WSI系统对大鼠吸入毒理学试验所开展的数字组织病理学评价和同行评议,以期为中国药物非临床毒理学研究使用WSI进行组织病理学评价和同行评议提供一定参考,加快与国际先进国家接轨的进程。

关键词：非临床毒理学研究全切片图像数字组织病理学同行评议

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毒性试验组织病理学结果有害作用判断概述

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药物评价研究 2022年第8期45卷 1480-1486页

作者：缪成贤张亚群闫振龙钱庄胡文元钟小群胡静陈晓俊李一昊彭瑞楠王娅李慧葛建雅邵薇吕建军李华益诺思生物技术南通有限公司江苏南通226133

药物非临床安全性评价毒性试验有害作用的判断非常重要,因其可为保护临床试验暴露于新化学实体或药物的受试者提供重要信息。毒性试验组织病理学检查可提供受试物毒性作用的形态学数据,帮助分析和确定有害作用和非有害作用及其剂量水平... 详细信息

药物非临床安全性评价毒性试验有害作用的判断非常重要,因其可为保护临床试验暴露于新化学实体或药物的受试者提供重要信息。毒性试验组织病理学检查可提供受试物毒性作用的形态学数据,帮助分析和确定有害作用和非有害作用及其剂量水平。参照美国毒性病理学会(STP)和欧洲毒性病理学会(ESTP)的推荐最佳实践或建议及其他相关文献,对有害作用的定义、区分有害作用与非有害作用的要素、有害作用数据沟通和使用来评估人类潜在风险等建议等进行简要概述分析,以期为我国非临床药物安全性评价毒性试验中有害作用判定提供参考。

关键词：药物安全性评价毒性试验组织病理学有害作用美国毒性病理学会欧洲毒性病理学会

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超微结构病理学在药物非临床安全性评价毒理学研究中的应用现状和关注点

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药物评价研究 2022年第8期45卷 1487-1492页

作者：王娅郑少秋钱庄闫振龙胡文元钟小群胡静李一昊陈晓俊彭瑞楠李慧葛建雅缪成贤邵薇张亚群吕建军益诺思生物技术南通有限公司江苏南通226133 江西中医药大学江西南昌330103 长三角药物高等研究院长三角药学高等工程学院江苏南通226133

超微结构病理学是药物非临床毒理学研究中毒性病理学评估的重要辅助工具。简要介绍了超微结构病理学在药物非临床安全性评价毒理学研究中的应用现状和关注点,并举例说明了透射电子显微镜等超微结构病理学技术在药物非临床安全性评价中... 详细信息

超微结构病理学是药物非临床毒理学研究中毒性病理学评估的重要辅助工具。简要介绍了超微结构病理学在药物非临床安全性评价毒理学研究中的应用现状和关注点,并举例说明了透射电子显微镜等超微结构病理学技术在药物非临床安全性评价中的应用。目前,超微结构病理学技术在药物非临床毒理研究中虽然使用率不高,却是非临床毒理学研究中毒性病理学评估的重要辅助工具,可用于对光学显微镜检查结果的进一步研究,以作为早期药物发现和非临床安全性评价毒理学研究的有益补充。在使用超微结构病理学技术进行药物非临床毒理学研究时,应关注其使用的必要性、良好实验室规范(GLP)依从性、专业性、科学性和使用局限性等方面。

关键词：超微结构病理学毒性病理学透射电子显微镜非临床毒理学研究药物安全性评价

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干细胞来源细胞治疗产品非临床安全性评价概述

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中国新药杂志 2023年第6期32卷 583-588页

作者：闫振龙滕伊洋张亚群钱庄李言川胡文元钟小群胡静陈晓俊李一昊彭瑞楠王娅李慧葛建雅缪成贤吕建军大平东子益诺思生物技术南通有限公司南通226133 上海益诺思生物技术股份有限公司上海200043 中国医药工业研究总院上海201203

随着细胞治疗产品研发的快速发展,新的干细胞治疗产品不断被开发,但帮助设计非临床安全性评价研究的相关指导性文件相对不足。干细胞治疗产品不仅来源不同,产品安全性因素也不同,存在异位组织形成、不可控生物分布、免疫原性和成瘤性等... 详细信息

随着细胞治疗产品研发的快速发展,新的干细胞治疗产品不断被开发,但帮助设计非临床安全性评价研究的相关指导性文件相对不足。干细胞治疗产品不仅来源不同,产品安全性因素也不同,存在异位组织形成、不可控生物分布、免疫原性和成瘤性等潜在风险。不同的干细胞治疗产品给非临床安全性研究带来极大挑战。本文简要概述干细胞的种类及干细胞来源细胞治疗产品非临床安全性评价一般原则,重点关注干细胞来源细胞治疗产品非临床安全性评价中动物选择、试验设计和成瘤性研究等方面,以期为我国干细胞来源细胞治疗产品的非临床安全性评价提供参考。

关键词：干细胞细胞治疗产品非临床安全性评价

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毒性病理学中人工智能和机器学习的应用研究进展

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中国新药杂志 2023年第6期32卷 598-604页

作者：李一昊滕伊洋张亚群钱庄胡文元钟小群胡静陈晓俊闫振龙彭瑞楠王娅李慧葛建雅缪成贤邵薇吕建军大平东子益诺思生物技术南通有限公司南通226133 上海益诺思生物技术股份有限公司上海200043 中国医药工业研究总院上海201203

毒性病理学是促进动物和人类健康发展最有价值的学科之一,药物非临床安全性评价毒性研究中对石蜡包埋、苏木精和伊红染色切片的组织病理学检查是毒性病理学评价的金标准。数字毒性病理学、人工智能(artificial intelligence,AI)尤其是... 详细信息

毒性病理学是促进动物和人类健康发展最有价值的学科之一,药物非临床安全性评价毒性研究中对石蜡包埋、苏木精和伊红染色切片的组织病理学检查是毒性病理学评价的金标准。数字毒性病理学、人工智能(artificial intelligence,AI)尤其是机器学习(machine learning,ML)是全球颠覆性、快速发展的技术领域,其对组织病理学领域的影响正在迅速显现。组织病理学检查种类繁多算法的发展和应用,表明人工智能病理学平台可深度影响将来数字毒性病理学、精准医疗和个性化医疗。然而,与所有其他革命性的技术相同,人工智能病理学平台在实施和应用过程中存在诸多挑战。本文综述了人工智能和机器学习的发展、人工智能在毒性病理学中的应用、机器学习在数字毒性病理学中的应用以及人工智能对数字毒性病理学的影响,以期为我国毒性病理学中人工智能和机器学习的应用提供一定参考。

关键词：毒性病理学人工智能机器学习深度学习人工神经网络

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