检索结果-南通市图书馆

中草药 2020年第8期51卷 2035-2045页

作者：刘伟葛广波王永丽黄恺陈佳美王长虹刘平上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所肝肾病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203 上海中医药大学中药研究所上海201203

目的旨在开展国家卫生健康委员会和国家中医药管理局推荐治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的协定通用处方清肺排毒汤的主要化学成分及小鼠组织分布研究,为其药效物质研究提供参考依据。方法采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对清肺排毒汤的主要... 详细信息

目的旨在开展国家卫生健康委员会和国家中医药管理局推荐治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的协定通用处方清肺排毒汤的主要化学成分及小鼠组织分布研究,为其药效物质研究提供参考依据。方法采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对清肺排毒汤的主要化学成分进行分析,色谱分离采用Acquity UPLC?BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱,体积流量0.3mL/min。基于化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,实现复方主要化学成分的快速、精准识别。在此基础上,对小鼠ig清肺排毒汤后血及组织中的移行成分进行了鉴定,并建立了同步测定麻黄碱、伪麻黄碱、苦杏仁苷、野黑樱苷、甘草苷、金丝桃苷、橙皮苷、黄芩苷、次野鸢尾黄素的定量分析方法,对小鼠ig清肺排毒汤后上述9种入血成分的组织分布进行研究。结果从清肺排毒汤中共鉴定出39种化学成分,ig给药后,在小鼠血清、心、肝、脾、肺、肾中分别鉴定出12、9、9、8、10、10种化学成分。发现9种化学成分可快速吸收并分布到多个组织,在0.5 h时血清及各组织中除黄芩苷之外的8种化学成分的含量均达到峰值,黄芩苷含量峰值出现在2 h或4 h。重点关注的肺组织中0.5 h时各成分的暴露量依次为麻黄碱(2759.11±784.39)ng/g>野黑樱苷(1819.7±427.28)ng/g>伪麻黄碱(880.60±287.97)ng/g>苦杏仁苷(304.43±234.70)ng/g>橙皮苷(78.33±38.38)ng/g>次野鸢尾黄素(8.62±4.66)ng/g>黄芩苷(8.53±1.91)ng/g>金丝桃苷(7.72±1.63)ng/g>甘草苷(7.68±5.19)ng/g;2h时成分含量为麻黄碱(776.61±148.40)ng/g>野黑樱苷(325.20±104.17)ng/g>伪麻黄碱(212.21±44.63)ng/g>黄芩苷(71.72±23.96)ng/g>苦杏仁苷(46.39±36.45)ng/g>橙皮苷(13.39±10.99)ng/g>金丝桃苷(3.11±0.75)ng/g>甘草苷(2.86±0.46)ng/g;4 h时各成分质量分数为麻黄碱(327.61±212.59)ng/g>野黑樱苷(173.77±58.21)ng/g>伪麻黄碱(84.68±59.04)ng/g>黄芩苷(49.33±17.06)ng/g>苦杏仁苷(1.26±0.26)ng/g。结论研究建立的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS方法可实现清肺排毒汤中多种化学成分的快速、准确分析,并明确了ig给药后清肺排毒汤主要成分在小鼠的组织分布情况,为后续清肺排毒汤的药效物质基础研究及进一步的临床应用提供了药动学信息和指导。

关键词： UHPLC-Q-Orbitrap HRMS 清肺排毒汤组织分布麻黄碱野黑樱苷伪麻黄碱苦杏仁苷

基于nano LC-Q-Exactive-MS/MS技术分析阿胶中的蛋白多肽类物质

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中国中药杂志 2021年第24期46卷 6422-6434页

作者：褚夏燕孙梦茹贾贵华王延涛顾建军刘海滨葛广波上海中医药大学交叉科学研究院上海201203 国家胶类中药工程技术研究中心东阿阿胶股份有限公司山东聊城252201 吉林大学药学院吉林长春130021

基于鸟枪法(shotgun)蛋白质组学分析技术对东阿阿胶成品中的蛋白多肽类物质进行系统分析。采用高pH反相色谱预分离的方法对酶解后的阿胶蛋白多肽类物质进行分级;采用Thermo Scientific EASY column预柱(100μm×2 cm,5μm,C_(18))及Ther... 详细信息

基于鸟枪法(shotgun)蛋白质组学分析技术对东阿阿胶成品中的蛋白多肽类物质进行系统分析。采用高pH反相色谱预分离的方法对酶解后的阿胶蛋白多肽类物质进行分级;采用Thermo Scientific EASY column预柱(100μm×2 cm,5μm,C_(18))及Thermo Scientific EASY column分析柱(75μm×100 mm,3μm,C_(18))为固定相对酶解后的阿胶蛋白多肽类物质进行有效的分离,以0.1%甲酸乙腈水溶液(乙腈为84%)-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱;借助nano LC-Q-Exactive-MS/MS分析技术在正离子模式下采集阿胶多肽组的质谱数据。通过MaxQuant软件结合马属蛋白数据库、质谱数据分析及参考相关文献,从成品东阿阿胶中共分离鉴定出2291个马属肽段,同时首次从阿胶成品中发现了255个含有美拉德修饰(AML、CML、CEL)的马属肽段;并借助数据库搜寻对上述肽段的蛋白归属进行对比分析,发现所检出的肽段源于678个马属蛋白。该研究借助nano LC-Q-Exactive-MS/MS分析技术和鸟枪法蛋白质组鉴定法实现了阿胶成品中的蛋白多肽类物质快速、准确分析,为深入了解阿胶的化学物质组和效应物质提供了新的线索和关键信息。

关键词：阿胶蛋白多肽类美拉德修饰多肽高pH反相分级 shotgun蛋白组分析

红景天苷干预前后高原红细胞增多症大鼠红细胞膜的蛋白质组学研究

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中国中药杂志 2020年第19期45卷 4719-4724页

作者：贾守宁张庆光马春花李欣王双玺陈文娟窦萱葛广波青海省中医院青海西宁810000 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203

研究红景天苷对高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)大鼠红细胞膜的蛋白质组学影响,基于蛋白质组学分析结果探讨红景天苷改善HAPC的机制。首先建立HPAC大鼠模型,16只大鼠造模成功后随机分为HAPC模型组和红景天苷100 mg·... 详细信息

研究红景天苷对高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)大鼠红细胞膜的蛋白质组学影响,基于蛋白质组学分析结果探讨红景天苷改善HAPC的机制。首先建立HPAC大鼠模型,16只大鼠造模成功后随机分为HAPC模型组和红景天苷100 mg·kg^-1组,每组8只。HAPC模型组灌胃生理盐水,红景天苷组大鼠灌胃给予100 mg·kg^-1的红景天苷,每日1次,连续灌胃40 d后股动脉采血,提取红细胞膜总蛋白,采用双向电泳将总蛋白进行分离;对红景天苷干预前后红细胞膜总蛋白双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定具有明显差异的蛋白质,最后利用生物信息学分析生物学功能。结果显示,应用双向电泳法建立了HAPC分辨率较高且重复性较好的大鼠红细胞膜蛋白表达图谱。红景天苷干预红细胞膜双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)图谱中18个蛋白点发生明显变化,其中13个表达上调,5个表达下调;并借助质谱分析成功鉴定了其中8个差异性蛋白。进一步生物信息分析发现这些差异性蛋白参与了氧化应激、氧化还原、过氧化物酶体途径等生物过程,且主要与过氧化物酶体途径和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路有关。因此,红景天苷可使HAPC大鼠红细胞膜蛋白表达发生较为明显的改变,借助蛋白质组学技术鉴定了其中8个差异蛋白,发现这些差异性蛋白参与氧化应激、氧化还原、过氧化物酶体途径等生物过程。

关键词：红景天苷高原红细胞增多症红细胞膜蛋白质组学

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荧光检测人羧酸酯酶的研究进展

分析试验室 2019年第5期38卷 627-631页

作者：张同艳王文爽钱恒玉尹志刚葛广波郑州轻工业学院材料与化学工程学院郑州450000 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203

羧酸酯酶是丝氨酸酯酶大家族的一员,它们主要是对脂类物质起水解作用,其活性直接与许多的疾病相关,人体中主要存在人羧酸酯酶1和人羧酸酯酶2。因此,在检测酶活性方面受到了广大研究者的青睐。传统的检测方法过程繁琐,费时费力,设备昂贵... 详细信息

羧酸酯酶是丝氨酸酯酶大家族的一员,它们主要是对脂类物质起水解作用,其活性直接与许多的疾病相关,人体中主要存在人羧酸酯酶1和人羧酸酯酶2。因此,在检测酶活性方面受到了广大研究者的青睐。传统的检测方法过程繁琐,费时费力,设备昂贵,检测不出酶的活性。近年来荧光探针技术成为测量生物样本中人羧酸酯酶1、人羧酸酯酶2真实活性的实用、敏感、高选择性、高精确度的检测方法。本文主要针对近年来用于检测酶活性的荧光探针进行总结。

关键词：人羧酸酯酶1 人羧酸酯酶2 荧光探针研究进展

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肝损伤血清标志物研究进展

实用肝脏病杂志 2017年第2期20卷 252-256页

作者：雷玮王丹丹葛广波孙杰大连医科大学附属第二医院辽宁省大连市116023 中国科学院大连物理化学研究所

肝损伤的临床表现和病理变化较为复杂。准确而可靠的生物学标志物对肝损伤的预防、诊断和治疗都有很大的帮助。目前临床上,肝损伤的诊断主要依赖于各种血清学指标,不同类型的肝损伤血清指标都有相应的异常变化。本文结合国内外肝损伤领... 详细信息

肝损伤的临床表现和病理变化较为复杂。准确而可靠的生物学标志物对肝损伤的预防、诊断和治疗都有很大的帮助。目前临床上,肝损伤的诊断主要依赖于各种血清学指标,不同类型的肝损伤血清指标都有相应的异常变化。本文结合国内外肝损伤领域的新近研究进展,对一些传统的酶学标志物,如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、胆红素、白蛋白、透明质酸等大分子物质以及新型的酶学、分子生物学和病理生理学标志物予以介绍。

关键词：肝损伤血清标志物进展

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仿制药质量和疗效一致性评价工作建议

世界科学技术-中医药现代化 2016年第5期18卷 731-734页

作者：宁静葛广波吴敬敬杨凌中国科学院大连化学物理研究所大连116023

目前,中国医药产业正处于蓬勃发展期,国家在此时推行仿制药质量一致性评价对提升中国制药行业整体水平,保障公众用药安全等具有重大意义。本建议针对当前中国制药行业在药品质量一致性评价中面临的困惑,结合国外药品评价相关制度和经验... 详细信息

目前,中国医药产业正处于蓬勃发展期,国家在此时推行仿制药质量一致性评价对提升中国制药行业整体水平,保障公众用药安全等具有重大意义。本建议针对当前中国制药行业在药品质量一致性评价中面临的困惑,结合国外药品评价相关制度和经验,从药品分类及其申报原则、药品终点评价指标及其科学内涵、仿制药生物等效性评价相关原则等方面进行了细致剖析,并归纳总结了药品质量一致性和优劣性的评价原则及注意事项。此外,作者还针对中国制药行业的现状和存在的一些具体问题,提出了仿制药质量和疗效一致性评价的一些具体工作建议。

关键词：仿制药新药申报一致性评价终点指标生物等效性

UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HR-MS分析荆银颗粒的化学成分及其组织分布特征

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中国中药杂志 2020年第22期45卷 5537-5554页

作者：王永丽张聪聪张凤黄坚王丹丹赵咏芳刘伟葛广波徐建光上海中医药大学中药研究所上海201203 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203 上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所肝肾病证教育部重点实验室上海市中医临床重点实验室上海201203 上海上药杏灵科技药业股份有限公司上海201703

该研究借助UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HR-MS技术解析了荆银颗粒的化学成分及大鼠灌胃后其主要成分的组织分布特征。采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。通过化合物的一级... 详细信息

该研究借助UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HR-MS技术解析了荆银颗粒的化学成分及大鼠灌胃后其主要成分的组织分布特征。采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以甲醇-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。通过化合物的一级、二级质谱信息,结合对照品比对确认,从荆银颗粒中共鉴定出106种化学成分,包括24种有机酸类、47种黄酮类、10种环烯醚萜类、21种皂苷类及4种其他类化合物。大鼠灌胃荆银颗粒后,分别从血清、心、肝、脾、肺、肾、脑、脂肪、睾丸中检测到48,30,25,23,45,34,39,26,19种原型成分。在此基础上,建立了可同时定量分析绿原酸、獐牙菜苦苷、咖啡酸、獐牙菜苷、甘草苷、升麻素苷、牛蒡子苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、牛蒡子苷元的LC-MS分析方法,并完成上述9种成分在血清、肝、肺中的含量测定。研究发现,大鼠灌胃荆银颗粒后,上述9种原型成分可快速吸收入血并分布到肝和肺组织中,除牛蒡子苷元外,其余8种化学成分在血清和肺组织中的暴露在1 h达到峰值。其中给药1 h后,肺组织中各成分的暴露量依次为獐牙菜苦苷[(75 191.0±3 483.21) ng·g-1]>牛蒡子苷[(2 716.5±36.06) ng·g-1]>5-O-甲基维斯阿米醇苷[(585.1±0.71) ng·g-1]>牛蒡子苷元[(437.45±3.18) ng·g-1]>绿原酸[(308.1±5.66) ng·g-1]>升麻素苷[(211.35±2.19) ng·g-1]>獐牙菜苷[(184.3±9.05) ng·g-1]>咖啡酸[(175.95±2.05) ng·g-1]>甘草苷[(174.78±153.34) ng·g-1]。该研究借助UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HR-MS技术实现了荆银颗粒化学成分的快速、准确分析,并揭示了荆银颗粒大鼠灌胃给药后主要成分的组织分布特征,为后续荆银颗粒的药效物质基础研究及进一步的临床应用提供了药代学信息和指导。

关键词： UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HR-MS 荆银颗粒化学成分有机酸黄酮皂苷环烯醚萜组织分布

细胞色素P4501A1亚型特异性双光子荧光探针及其生物学应用

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细胞色素P4501A1亚型特异性双光子荧光探针及其生物学应用

中国化学会第30届学术年会

作者：戴子茹葛广波冯磊金强崔京南杨凌中国科学院大连化学物理研究所大连理工大学精细化工国家重点实验室

CYP1A1是重要的I相代谢酶,主要在人肝外组织中表达,例如人肺、皮肤、小肠中表达。CYP1A1参与多种环境毒素和内源性底物的代谢,并在多种前致癌物被激活成具有遗传毒性中间体或最终致癌物的过程中起到了重要作用,例如在一定程度上激活咖... 详细信息

CYP1A1是重要的I相代谢酶,主要在人肝外组织中表达,例如人肺、皮肤、小肠中表达。CYP1A1参与多种环境毒素和内源性底物的代谢,并在多种前致癌物被激活成具有遗传毒性中间体或最终致癌物的过程中起到了重要作用,例如在一定程度上激活咖啡因诱使肝硬化的发生。除此之外,CYP1A1的分布存在很大的个体差异,CYP1A1酶的表达受遗传、年龄、疾病、性别、环境和共服药物等多种因素的影响。因此,开展CYP1A1酶活的个体差异研究对于临床个性化安全用药有着重要意义。我们从CYP1A1的活性空腔结构及其偏好底物结构特征入手,以1,8-萘酰亚胺荧光分子为母体,通过预留代谢位点氯乙氧基(发生脱氯乙基化反应)并预留若干化学易修饰基团(提高底物与酶的选择性和灵敏度)的策略,设计合成了一种高选择性双光子比率型CYP1A1荧光探针分子。该分子与其去氯乙基化产物显示了不同的光学属性,NBCeN及其产物NBHN的最大激发波长分别为372和450 nm,最大发射波长分布为452和562 nm,显示该探针分子反应前后有较大的斯托克斯位移(110 nm),且其定量检测下限为0.025 nmol/mL。体外人肝微粒体(HLM)CYP代谢孵育体系中检测到仅有一个去氯乙基化代谢产物生成。NBCeN在人肝微粒体(HLM),人肺微粒体(HLuM)和CYP1A1单酶体系中动力学参数K分别为1.79±0.09,0.36±0.03和0.84±0.07μM,相似的K值提示NBCeN在HLM和HLuM去氯乙基化中CYP1A1起了主要作用。同时体外化学抑制实验显示CYP1A1的特异性抑制剂白藜芦醇可强烈抑制NBCeN在HLM的CYP代谢孵育体系中的反应。利用该荧光探针反应,定量测定了12例个体人肝微粒体中的CYP1A1酶的活性,且12例个体人肝微粒体中NBCeN的去氯乙基化速率和乙氧基试卤灵(广泛使用的CYP1A1探针底物)的去乙基化速率高度相关,相关系数为0.99,该结果表明该荧光探针分子具有良好的选择性。此外,该双光子荧光探针还可以用于CYP1A1抑制剂和诱导剂的筛选。而且首次实现了活细胞与活组织层面的CYP1A1酶活性的比率型双光子荧光成像。该探针不仅适用于单酶、细胞及组织中CYP1A1酶活的实时定量检测,还可用于新药研发早期筛选、组织成像及体外诊断等生物医药相关领域。

关键词：双光子比率型荧光细胞色素P450 1A1 特异性检测生物成像

来源： cnki会议评论

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人羧酸酯酶2抑制剂药效团模型的构建及应用

中国中药杂志 2021年第3期46卷 638-644页

作者：张景芳李彦程夏桂阳宋云清王玲燕林鹏程葛广波林生中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 上海中医药大学交叉科学研究院上海201203 青海民族大学药学院青海西宁810007

该文通过收集文献中已报道的人羧酸酯酶2(human carboxylesterase 2,hCE2)小分子抑制剂,选择其中活性较强的化合物作为训练集,利用HipHop方法建立hCE2抑制剂的三维药效团模型。结果表明最优药效团具有2个疏水中心、1个氢键受体和1个芳... 详细信息

该文通过收集文献中已报道的人羧酸酯酶2(human carboxylesterase 2,hCE2)小分子抑制剂,选择其中活性较强的化合物作为训练集,利用HipHop方法建立hCE2抑制剂的三维药效团模型。结果表明最优药效团具有2个疏水中心、1个氢键受体和1个芳环中心。利用测试集对其进行验证,准确率达95%以上。在此基础上,将该预测模型用于hCE2天然抑制剂的虚拟筛选,从赤芍化学成分中发现了5个hCE2的天然抑制剂,并对其hCE2抑制能力进行了实验验证。结果显示5个赤芍化学成分(CS-1,CS-2,CS-3,CS-6和CS-8)对hCE2的IC50分别5.04,5.21,5.95,6.64,7.94μmol·L-1,提示该研究构建的药效团模型具有较好的预测能力,有助于发现新型的hCE2抑制剂。

关键词：药效团模型人羧酸酯酶2 hCE2抑制剂赤芍