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作者：葛宜兵安徽医科大学

学位级别：硕士

第一部分噬菌体展示HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库的构建目的用噬菌体展示的方法构建Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选。方法采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR... 详细信息

第一部分噬菌体展示HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库的构建目的用噬菌体展示的方法构建Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选。方法采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61（51N/55N）,克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库。结果成功构建噬菌体展示Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库,结果显示文库的库容量为5.0×10～6,滴度为2.65×10 TU/ml,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论所建文库达到进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。第二部分HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库的亲和筛选目的通过不同HIV-1 Tat免疫血清及抗体对HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库进行亲和筛选,以期获得抗原性保留、生物学活性降低新型免疫原的代表性序列。方法用兔抗PET32-Tat38-61抗体、兔抗PET32-Tat38-101抗体及兔抗PET32 - Tat（38-101）血清同时对HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库进行5轮筛选,每种筛选分别随机挑取10个第3、4和5轮的阳性克隆进行序列分析。结果筛选过程中,空载体5S比例及反向插入序列比例呈现出逐渐减少并稳定的趋势,显示了筛选的有效性。阳性筛选克隆的序列分析显示,筛选获得了多个在2种抗体和1种血清筛选后文库中均出现的共同序列及在各自筛选文库中出现的重复序列,阳性序列出现了一些特征性的51位和55位氨基酸的关联51P-55L（4次重复）和51Q-51L（3次重复）。结论我们通过有效的筛选,筛选出一些特征性的代表性氨基酸序列,为后续研究Tat分子中碱性区重要抗原的特性及基于该抗原的Tat治疗性疫苗的研发提供了一新的可行途径。第三部分HIV-1 Tat38-61（51N/55N）突变体蛋白的构建表达目的构建HIV-1 Tat38-61（51N/55N）突变体融合蛋白,检测其免疫原性,并比较突变体蛋白和天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE蛋白生物活性的差异。方法我们挑选出三个经过亲和筛选出来的代表性序列, Tat38-61-F3-16（51L/55T）、Tat38-101-F4-16（51H/55R）、Tat38-101血清-F3-11（51S/55P）,根据大肠杆菌偏好密码子优化后的HIV-1型株Tat DNA序列设计引物,我们首先对全长Tat1-101的51和55位氨基酸进行定点突变,再以此为模板PCR扩增Tat38-61编码序列,结果顺利地获得了51和55位氨基酸定点突变的Tat38-61编码序列,T/A克隆法将其克隆到pMD18-T载体进行测序。将测序正确的Tat38-61克隆至原核表达载体pET32a,构建其原核表达质粒pET32a-Tat38-61。将表达质粒转入*** BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,并用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白。结果PCR方法扩增出72bp的Tat38-61基因片段;限制性酶切分析及序列测定表明重组表达质粒pET32a-Tat38-61的构建完全正确,SDS-PAGE显示在大肠杆菌中表达出相对分子质量为21300D（道尔顿）的PET32a-Tat38-61突变体融合蛋白。并通过ELISA实验与天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE成功竞争抑制。结论Tat38-61表位是Tat的主要表位,在对抗天然Tat中38-61抗体的抑制最好的分别是天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。三种突变体蛋白对天然Tat中38-61抗体均有抑制作用,但抑制作用均弱于天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。

关键词：噬菌体展示 HIV-1 Tat 碱性区亲和筛选随机突变

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小腿深静脉血栓的超声诊断方法及其声像图特点

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影像视觉 2016年第7期17卷 22-23页

作者：葛宜兵武警安徽总队医院特检科

目的:探究小腿深静脉血栓患者的超声声像图特点及超声检查的诊断价值。方法:对2015年5月:对-2016年5月本院收治的96例患者116条下肢疑有小腿深静脉血栓患者进行彩色多普勒超声检查,观察超声检查对小腿深静脉血栓的检出情况及声像图特点... 详细信息

目的:探究小腿深静脉血栓患者的超声声像图特点及超声检查的诊断价值。方法:对2015年5月:对-2016年5月本院收治的96例患者116条下肢疑有小腿深静脉血栓患者进行彩色多普勒超声检查,观察超声检查对小腿深静脉血栓的检出情况及声像图特点。结果:所有患者经静脉造影、D-二聚体检查及随访结果确诊,超声检测结果确诊62例75条下肢为小腿深静脉血栓,其中有12条伴浅静脉血栓,3例伴有淋巴水肿,2条为肌见深静脉血栓伴淋巴水肿。24例患者26条下肢为淋巴水肿,10例患者15条下肢为肌间血肿。小腿深静脉血栓主要受累部位为比目鱼肌静脉、腓肠肌静脉,多为单支深静脉血栓。超声图像显示小腿深静脉内官腔有低回声,管腔直径增宽,超声探头加压后管腔不能被压扁,血流信号、彩色信号均无充盈信号。结论:彩色多普勒超声对小腿深静脉血栓的检出率高,可以准确判定血栓的位置、性质,动态观测血栓情况,对相似疾病进行鉴别。

关键词：超声诊断小腿深静脉血栓声像图特点

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超声检查在急性阑尾炎诊断中的应用价值分析

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临床医药文献电子杂志 2017年第65期4卷 12803-12803页

作者：葛宜兵唐莉武警安徽省总队医院特检科

目的为分析超声检查在急性阑尾炎诊断中应用价值,方法对某年度实际急性阑尾炎临床患者信息进行收集和整理。采用随机抽查方式统计超声检查和病理对比研究200例急性阑尾炎病患诊断精准率。结果详细描述175例急性阑尾炎声像图变化,其精准... 详细信息

目的为分析超声检查在急性阑尾炎诊断中应用价值,方法对某年度实际急性阑尾炎临床患者信息进行收集和整理。采用随机抽查方式统计超声检查和病理对比研究200例急性阑尾炎病患诊断精准率。结果详细描述175例急性阑尾炎声像图变化,其精准率为百分之八十九。结论广泛应用高频率超声检查、不断强化超声检查临床医生专业水平,是确保病因检查高效准确的重要途径。近年来,超声检查成为急性阑尾炎首选检查手段。

关键词：超声检查急性阑尾炎诊断应用价值

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超声实时弹性成像技术在甲状腺结节鉴别诊断研究

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影像研究与医学应用 2017年第9期1卷 70-71页

作者：葛宜兵吴洁武警安徽省总队医院特检科安徽宿州234000

目的:研究超生实时弹性成像技术在甲状腺结节鉴别诊断时的使用价值。方法:选用一年内来,我院诊治的20位患有甲状腺结节的患者来做受检者。在手术前先后对病灶点做常规超生与超生实时弹性成像检查,来鉴别甲状腺结节的良恶性。我们把超生... 详细信息

目的:研究超生实时弹性成像技术在甲状腺结节鉴别诊断时的使用价值。方法:选用一年内来,我院诊治的20位患有甲状腺结节的患者来做受检者。在手术前先后对病灶点做常规超生与超生实时弹性成像检查,来鉴别甲状腺结节的良恶性。我们把超生实时弹性的成像图,依据他的弹性情况分成0~4级(其中0~2级是良性结节,3~4级是恶性结节),并辨别它和病理诊断结果的区别。结果:经过病理诊断的结果来看,患有良性甲状腺结节的患者26位,而恶性甲状腺结节有9位。超声实时弹性成像诊断的灵敏度能达到百分之百、精准度则会达到百分之94,明显会高于普通的超声检查,其中差异具有统计学意义。结论:超声实时弹性成像能体现出甲状腺结节的相对硬度情况,为甲状腺结节的鉴别提供了很大的诊断价值。并且他的诊断效果高于普通的超生检查,可以在临床上广泛使用。

关键词：超声实时弹性成像甲状腺结节的鉴别鉴别诊断

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人类免疫缺陷病毒1型Tat蛋白N末端缺失突变体融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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病毒学报 2011年第6期27卷 580-586页

作者：张华群廖文婷陈秋莉葛宜兵杨界章萍萍祁培培刘超何婷王锦红潘卫曹洁第二军医大学微生物学教研室上海市医学生物防护重点实验室上海200433 安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大... 详细信息

本研究采用PCR方法从人类免疫缺陷病毒1型(Human immunodeficiency virus 1,HIV-1)HXB2株tat基因中扩增编码Tat蛋白N末端1-21位氨基酸缺失的突变体Tat22-101基因片段,构建其原核表达质粒pET32a-Tat22-101,经双酶切及测序验证后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达及Ni^(2+)-NTA柱亲和层析纯化。纯化后的突变体融合蛋白PET32a-Tat22-101经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,其相对分子质量约为26.9kD。该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经ELISA检测结果表明,pET32a-Tat22-101融合蛋白不仅较好地保留其免疫原性,而且能诱导产生高滴度的针对Tat N末端区之外的Tat其他功能区表位的抗体,为进一步研究Tat生物学功能和研制新型HIV Tat疫苗奠定试验基础。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 Tat蛋白缺失突变原核表达免疫原性

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分析甲状腺功能亢进性心脏病患者心脏彩超的表现及临床特点

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中西医结合心血管病电子杂志 2015年第15期 133-134页

作者：葛宜兵葛明敏郑玉翠范明贞陈光武警安徽总队医院

目的分析甲状腺功能亢进性心脏病患者心脏彩超的表现及临床特点。方法选取本院2014年1月;015年2月收治的甲状腺功能亢进性心脏病患者60例,采用心脏彩超诊断,分析患者各临床表现及特点。结果 60例患者中心脏彩超表现为左心室壁增厚或室... 详细信息

目的分析甲状腺功能亢进性心脏病患者心脏彩超的表现及临床特点。方法选取本院2014年1月;015年2月收治的甲状腺功能亢进性心脏病患者60例,采用心脏彩超诊断,分析患者各临床表现及特点。结果 60例患者中心脏彩超表现为左心室壁增厚或室间隔壁13例,肺动脉压力增高11例,心腔扩大13例,瓣膜关闭不全6例,心脏收缩功能减弱7例,心脏阶段性运行障碍10例;临床特点为:胸闷1例,心绞痛2例,心力衰竭13例,心悸23例,心室颤动11例,心律失常10例。结论针对甲状腺功能亢进性心脏病患者,采用心脏彩超进行分析其具体临床特点,及时进行治疗,能够缓解病情,改善临床症状,值得推广使用。

关键词：甲状腺功能亢进性心脏病彩超检查临床特点

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保障移动互联网安全推动完善安全标准体系

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世界电信 2014年第8期27卷 68-71页

作者：安青邦韩佳琳葛宜兵戈志勇工信部电信研究院信息通信安全研究所

移动互联网和智能终端的快速发展促使各种应用软件不断涌现,让人们的生产生活越来越便捷高效。但同时也应该看到,各种应用软件良莠不齐,一旦存在问题的应用软件借助软件商店快速传播,后果将很严重。因此,必须对其加以管制,并建立相关的... 详细信息

移动互联网和智能终端的快速发展促使各种应用软件不断涌现,让人们的生产生活越来越便捷高效。但同时也应该看到,各种应用软件良莠不齐,一旦存在问题的应用软件借助软件商店快速传播,后果将很严重。因此,必须对其加以管制,并建立相关的安全标准。

关键词：安全标准体系移动互联网互联网安全应用软件保障智能终端

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Android应用不可忽视的安全问题

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现代电信科技 2014年第10期44卷 43-46页

作者：王海龙韩佳琳葛宜兵戈志勇工业和信息化部电信研究院信息通信安全研究所北京100191

移动互联网的普及和大量新应用的推出,在带给人们方便的同时也带了的很多的安全问题。文章主要针对基于Android系统的应用出现的安全漏洞和Android系统自身存在的安全问题进行了介绍和分析,并提出了应对这些安全问题的建议和应对措施。

关键词： Android 应用安全

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企业需积极应对社交网络带来的安全威胁

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世界电信 2014年第8期27卷 64-67页

作者：葛宜兵王海龙安青邦戈志勇工信部电信研究院信息通信安全研究所

近年来，互联网飞速发展，社交网络逐渐改变了人们的生活方式，而企业与个人之间的交际也更加频繁，但隐藏在社交网络中的安全隐患将会给企业造成巨大的损失。未来，企业应当采取相应的措施来保证信息安全，降低其在网络环境中的安全风险。

关键词：网络环境企业安全威胁社交生活方式安全隐患信息安全安全风险

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应变式弹性成像和剪切波弹性成像联合BI-RADS 对乳腺肿块性质的判断价值

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中华全科医学 2024年第3期22卷 473-477页

作者：严立妹葛宜兵吴正升武警安徽总队医院特检科安徽合肥230001 合肥市第二人民医院特检科安徽合肥230012

目的探讨应变式弹性成像和剪切波弹性成像技术分别联合乳腺超声影像报告和数据系统(BI-RADS)对乳腺肿块性质良恶性的诊断价值。方法回顾性分析2021年4月—2023年3月合肥市第二人民医院收治的105例乳腺肿块患者(共105个病灶)的临床病... 详细信息

目的探讨应变式弹性成像和剪切波弹性成像技术分别联合乳腺超声影像报告和数据系统(BI-RADS)对乳腺肿块性质良恶性的诊断价值。方法回顾性分析2021年4月—2023年3月合肥市第二人民医院收治的105例乳腺肿块患者(共105个病灶)的临床病理资料,术前接受常规超声检查、应变式弹性成像和剪切波弹性成像检查。以病理结果为金标准将病灶分为良性组(64例)和恶性组(41例),比较2组弹性应变率比值(SR)、剪切波最大弹性模量值(Emax),绘制ROC曲线评估BI-RADS、SR、Emax及联合诊断恶性乳腺肿块的效能。结果 105例乳腺肿块患者经病理检查显示,共41例(39.05%)恶性肿块,64例(60.95%)良性肿块。BI-RADS分类结果显示,2类10例,3类16例,4a类21例,4b类19例,4c类18例,5类21例。以4b分类及以上诊断为恶性,BI-RADS分类诊断恶性乳腺肿块的灵敏度为92.68%,特异度为68.75%。恶性组SR、Emax值均高于良性组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,SR、Emax诊断恶性乳腺肿块的AUC分别为0.739、0.784,最佳截断值分别为4.17%、98.21 kPa;SR+Emax联合诊断的AUC为0.861,灵敏度为70.73%,特异度为92.19%,约登指数为0.629,联合诊断效能高于单项诊断(P<0.05)。ROC曲线分析显示,SR+BI-RADS、Emax+BI-RADS、SR+Emax+BI-RADS诊断恶性乳腺肿块的AUC分别为0.826、0.830、0.892,SR+Emax+BI-RADS诊断效能高于SR+BI-RADS、Emax+BI-RADS、BI-RADS(P<0.05)。结论 SR+Emax+BI-RADS联合诊断能明显提高乳腺癌的诊断效能,提高了BI-RADS分类诊断的特异度。

关键词：应变式弹性成像剪切波弹性成像乳腺超声影像报告和数据系统乳腺肿块诊断

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