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NPTⅡ蛋白质在转基因水稻中的表达特征研究

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生物化学与生物物理进展 2015年第3期42卷 268-276页

作者：兰金苹武鹏程郭美岑史佳楠韦汉福荣瑞娟郝育杰杨烁白影影李莉云吴琳刘斯奇尹长城刘国振河北农业大学生命科学学院保定071001 北京华大蛋白质研发中心有限公司北京101318 中国科学院北京基因组研究所北京100101

nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗... 详细信息

nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等.结果表明,该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质,NPTⅡ的表达符合显性遗传规律,根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定,对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息.定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰.在Ca MV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高,而在分蘖期、孕穗期较低,NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达,只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低.此外,NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中.综上所述,本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征.

关键词：转基因水稻 CaMV-35S启动子 NPTⅡ蛋白质免疫印迹技术

转基因水稻中HPT蛋白质的检测及表达特征研究

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中国生物工程杂志 2015年第6期35卷 61-67页

作者：杨烁郝育杰兰金苹韦汉福魏健荣瑞娟武鹏程刘国振尹长城李莉云河北农业大学生命科学学院保定071001 北京华大蛋白质研发中心有限公司北京101318

hpt是转基因植物中最常用的筛选标记基因之一,建立了HPT蛋白质免疫印迹检测技术、了解其在转基因植物中的表达特征具有重要的理论意义和应用价值。在大肠杆菌中进行了HPT蛋白质的重组表达,利用纯化的HPT蛋白质制备了其特异性的单克隆抗... 详细信息

hpt是转基因植物中最常用的筛选标记基因之一,建立了HPT蛋白质免疫印迹检测技术、了解其在转基因植物中的表达特征具有重要的理论意义和应用价值。在大肠杆菌中进行了HPT蛋白质的重组表达,利用纯化的HPT蛋白质制备了其特异性的单克隆抗体,采用免疫印迹学方法对转基因水稻4021中HPT蛋白质的表达情况进行了检测,该方法可检测出单粒稻米的10%(约1.5mg)所含的HPT蛋白质。定量分析发现水稻苗期HPT蛋白质含量约占鲜重的0.01‰。对Ca MV35S启动子驱动下的转基因水稻中HPT蛋白质的表达谱进行分析,发现其在苗期和成株期的叶片中表达量较高,在灌浆期的种子中呈现不断增加的趋势,而在茎、分蘖节、茎节、叶鞘、叶枕和根等组织中表达量较低。建立了完整的利用免疫印迹方法检测HPT蛋白质的技术,同时系统分析了HPT蛋白质在转基因水稻中的表达谱。

关键词：转基因水稻 HPT蛋白质免疫印迹技术筛选标记基因

肾功能血清学检验对糖尿病肾病早期诊断的效果及临床价值研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第5期 66-68页

作者：李坤张婷婷荣瑞娟赵维丽张培石家庄市第二医院河北石家庄050000

对早期糖尿病肾病患者进行诊断时,采用肾功能血清学检验,分析该措施的临床意义。方法对照组为同一时间的健康体检者,研究组为2021年12月至2022年10月内我院收治的患者,且所有患者均患有糖尿病肾病,两组分别为40例、40例,对两组人员均... 详细信息

对早期糖尿病肾病患者进行诊断时,采用肾功能血清学检验,分析该措施的临床意义。方法对照组为同一时间的健康体检者,研究组为2021年12月至2022年10月内我院收治的患者,且所有患者均患有糖尿病肾病,两组分别为40例、40例,对两组人员均采用肾功能血清学检验,分析两组诊断结果的差异性。结果研究组患者的相关指标水平(BUN、Scr、mALB)与对照组受检者相比更高(p<0.05);且不同严重程度的糖尿病肾病患者的各项检查指标差异明显,(p<0.05)。结论对糖尿肾病患者进行早期诊断时应用肾功能血清学检验,具有较高的临床意义。

关键词：肾功能血清学检验糖尿病肾病早期诊断临床价值

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糖尿病肾病早期诊断应用生化检验的临床价值

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第5期 61-63页

作者：李坤张婷婷荣瑞娟赵维丽张培石家庄市第二医院河北石家庄050000

分析在早期糖尿病肾病诊断中,使用生化检验的有效性。方法本次研究主要是选择早期糖尿病肾病患者以及健康人员参与实验,每组30名,实验时间为2021年1月-2022年5月,分别为试验组、健康组,检验方法均为生化检验,将两组实验人员的C反应蛋... 详细信息

分析在早期糖尿病肾病诊断中,使用生化检验的有效性。方法本次研究主要是选择早期糖尿病肾病患者以及健康人员参与实验,每组30名,实验时间为2021年1月-2022年5月,分别为试验组、健康组,检验方法均为生化检验,将两组实验人员的C反应蛋白、血清胱抑素C、糖化血红蛋白、游离脂肪酸、血同型半胱氨酸、血尿酸、尿蛋白进行对比检验。结果结果显示,生化指标各项指标对比结果显示,健康人群和糖尿病肾病对比有明显的差异性(P<0.05)。结论生化指标在糖尿病肾病早期的诊断工作中,能够给出明确的诊断,为治疗提供帮助。

关键词：生化指标糖尿病肾病早期诊断效果 C反应蛋白

尿蛋白和尿微量白蛋白在糖尿病肾病检验中的准确性分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第5期 52-54页

作者：李坤赵维丽张培张婷婷荣瑞娟石家庄市第二医院河北石家庄050000

目的是应用在糖尿病肾病的临床检查尿蛋白和尿微量白蛋白的价值。以在2020年7月至2022年7月期间在我院接受治疗的30名糖尿病肾病患者为对象进行研究,并命名了实验组。同时,以同一时期在我院完成体检的30人为对象,命名对照组。组间比较... 详细信息

目的是应用在糖尿病肾病的临床检查尿蛋白和尿微量白蛋白的价值。以在2020年7月至2022年7月期间在我院接受治疗的30名糖尿病肾病患者为对象进行研究,并命名了实验组。同时,以同一时期在我院完成体检的30人为对象,命名对照组。组间比较数据显示,尿蛋白及尿微量白蛋白指标与对照组相比有明显差异,P < 0.05。结论糖尿病肾病的诊断,参考尿蛋白和尿微量白蛋白,可以提高诊断的精度。

关键词：尿蛋白尿微量白蛋白糖尿病肾病诊断效果

转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的检测及其表达特征研究

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核农学报 2017年第1期31卷 44-50页

作者：柴帅杰武鹏程荣瑞娟郝育杰史佳楠郭亚璐丁国涛韩宇宁赵志静魏健尹长城刘国振河北农业大学生命科学学院河北保定071001 北京华大蛋白质研发中心有限公司北京101318

为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术... 详细信息

为了建立转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的免疫学检测方法,并了解其在水稻生长过程中的表达特征,本研究在大肠杆菌中表达了CP4-EPSPS蛋白质,纯化后以其为免疫原免疫小鼠,经筛选获得了可识别CP4-EPSPS的单克隆抗体。建立了用免疫印记技术检测转基因水稻中CP4-EPSPS蛋白质的方法,该方法可以从单粒稻米的0.63%材料中检测到CP4-EPSPS信号。对水稻不同发育时期代表性组织的检测结果表明,CP4-EPSPS蛋白质呈组成型表达,在花药、穗轴、颖壳及不同时期的叶片中的表达量较高,但在分蘖期基部茎节、叶鞘及成熟期种子胚中的表达量稍低。本研究建立的免疫学方法在转基因水稻检测中具有潜在的应用价值。

关键词：水稻转基因 CP4-EPSPS 除草剂免疫印迹

转基因水稻中GUS蛋白质的检测及其表达特征

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中国农业科学 2014年第14期47卷 2715-2722页

作者：牛东东郝育杰荣瑞娟韦汉福兰金苹史佳楠魏健李雪姣杨烁奚文辉武鹏程刘丽娟吴琳刘斯奇尹长城刘国振河北农业大学生命科学学院北京华大蛋白质研发中心有限公司中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室

【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入... 详细信息

【目的】建立转基因水稻中GUS蛋白质的免疫学检测方法,并了解花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中的表达特征。【方法】以细菌基因组DNA为模板,PCR扩增GUS基因后克隆到表达载体pET30a中,测序验证的重组子转入大肠杆菌表达菌BL21中,IPTG诱导获得重组表达的GUS蛋白质,用HIS-tag beads纯化后作为免疫原免疫小鼠制备GUS蛋白质特异的抗体,通过免疫印迹分析筛选高特异性的单克隆抗体,用Broadford法对重组的GUS蛋白质进行定量,对不同浓度的GUS蛋白质进行免疫印迹分析,绘制检测GUS蛋白质的标准曲线,通过与标准曲线的比较对水稻叶片中GUS蛋白质进行定量分析。提取不同时期、不同部位的水稻总蛋白质,包括苗期的地上部、地下部,分蘖期的茎、茎节、叶鞘、叶枕、叶片上部、叶片中部和叶片下部,孕穗期的茎、穗轴、叶鞘、叶枕、叶片、幼穗(长度分别为1、2、10和20 cm),开花期的茎、穗轴、叶鞘、叶片、穗子,成熟期的茎、叶片、授粉后不同时期的种子(分别为授粉后10、20、30和40 d)、乳熟期的胚、胚乳和颖壳、成熟种子的全种子、胚、胚乳和颖壳以及不同时期的叶片和根部材料等。SDS-PAGE分离后用抗体检测其GUS蛋白质的丰度。【结果】筛选获得了高特异性的抗GUS单克隆抗体(编号为#27),用该抗体检测转基因水稻中及重组的GUS蛋白质均呈现特异条带,没有可见的背景信号,用本研究建立的免疫印迹方法对重组GUS蛋白质的检测下限约为4 ng,可检出转基因水稻单粒大米2.5%样品中(约0.6 mg)的GUS蛋白质。在不同时期的转基因水稻叶片中GUS蛋白质的表达丰度基本稳定,而在水稻根部的GUS丰度随生长急剧减少,5叶期根中的表达量不到3叶期的三分之一,到6叶期检测不到GUS蛋白质。在水稻苗期叶片中,GUS蛋白质约占鲜重的0.02‰。另外,除分蘖期以后的根部之外,GUS蛋白质几乎在所有的水稻组织部位中呈组成型表达,只是不同组织中的表达量略有差异,如在孕穗期和开花期的茎及颖壳中的表达量较低。【结论】建立了具有应用价值的对转基因水稻中GUS蛋白质丰度检测的免疫印记方法。该方法特异性高、样品用量少、不依赖于GUS蛋白质的酶活性、测定结果易于在不同实验室间比较。证明了35S启动子驱动的GUS蛋白质在转基因水稻中基本呈组成型表达。

关键词：水稻转基因植物 CaMV 35S启动子 GUS蛋白质免疫印迹

湖南省娄底市城市居民绿色电力支付意愿影响因素研究

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现代商贸工业 2025年第1期 22-24页

作者：肖智娟李云荣大理大学经济与管理学院云南大理671003

使用清洁能源是减少环境污染的有效途径。绿色电力是指利用特定的发电设备,将风能、太阳能等可再生能源转化成电能。本文以湖南省娄底市城市居民为实践调研对象,研究该地区城市居民绿色电力支付意愿的影响因素。运用计量模型法,研究结... 详细信息

使用清洁能源是减少环境污染的有效途径。绿色电力是指利用特定的发电设备,将风能、太阳能等可再生能源转化成电能。本文以湖南省娄底市城市居民为实践调研对象,研究该地区城市居民绿色电力支付意愿的影响因素。运用计量模型法,研究结论表明一系列社会经济因素会影响居民的绿色电力接受意愿和支付意愿。受教育程度越高、收入越高、认为空气质量会影响身体健康,以及认为绿色电力具有环境友好优点的居民,越愿意接受绿色电力,并越愿意为绿色电力支付更高的额外费用。基于此,本研究提出一系列建议对策以供参考。

关键词：环境保护绿色电力支付意愿

2129例流感样住院患者呼吸道13项病原体检测结果分析

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重庆医学 2022年第15期51卷 2556-2560页

作者：郑盼盼李楠荣瑞娟张子凤张菁孙一婵赵维丽李洋刘赞朝石家庄市第二医院河北省糖尿病基础医学研究重点实验室 050051 石家庄市第二医院石家庄市糖尿病精准诊疗技术创新中心 050051

目的探讨流感样住院患者13项呼吸道病毒和非经典微生物的流行特征及致病情况,以指导临床精准防治。方法收集2019年12月至2020年12月该院2129例流感样住院患者的鼻咽拭子样本,提取病毒核酸,采用GeXP遗传分析平台联合多重反转录-PCR(mRT-P... 详细信息

目的探讨流感样住院患者13项呼吸道病毒和非经典微生物的流行特征及致病情况,以指导临床精准防治。方法收集2019年12月至2020年12月该院2129例流感样住院患者的鼻咽拭子样本,提取病毒核酸,采用GeXP遗传分析平台联合多重反转录-PCR(mRT-PCR)技术同时检测13种呼吸道病毒和非经典微生物。采用SPSS21.0软件对数据进行统计分析。结果2129例流感样住院患者进行13项呼吸道病毒和非经典微生物检测的阳性检出率为47.35%(1008/2129)。其中甲型流感病毒(InfA)阳性率最高[16.39%(349/2129)];其次为季节性流感病毒H3N2(H3)阳性率8.13%(173/2129)和人鼻病毒(HRV)阳性率7.42%(158/2129)。两种及两种以上病原体混合感染患者264例,阳性检出率为12.40%(264/2129)。960例女性患者阳性检出率为53.85%(517/960),1169例男性患者阳性检出率为42.00%(491/1169)。其中女性InfA、H3阳性检出率及病原体总阳性检出率均明显高于男性(P<0.01)。各个年龄组均有病毒检出阳性患者,但3岁以下儿童、60岁及以上老人是病毒的易感人群,且多种病毒易感。检测结果显示,呼吸道病原体阳性检出率存在季节分布差异。结论住院患者急性呼吸道感染的主要病原体是InfA、H3和HRV,且感染存在性别、年龄和季节差异。

关键词：住院患者呼吸道病毒非经典微生物 GeXP遗传分析平台流行特征

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