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小管福寿螺Cu2+抗性相关基因筛选及其抗性机制初探

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小管福寿螺Cu2+抗性相关基因筛选及其抗性机制初探

作者：茅光耀中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

目的:小管福寿螺(Pomaceacanaliculata是一种典型的入侵性食草生物,更是一种重要热带病传播相关媒介生物。其在广州管圆线虫病的发生和传播过程中起到了非常重要的作用,对我国居民健康构成了巨大的威胁。目前,我国小管福寿螺的防制效果... 详细信息

目的:小管福寿螺(Pomaceacanaliculata是一种典型的入侵性食草生物,更是一种重要热带病传播相关媒介生物。其在广州管圆线虫病的发生和传播过程中起到了非常重要的作用,对我国居民健康构成了巨大的威胁。目前,我国小管福寿螺的防制效果不太理想。该物种易于入侵、难于防制的重要原因之一是其极强的环境适应能力。开展对小管福寿螺的环境适应性机制的研究,有助于深入了解该重要热带病传播相关入侵媒介生物的生物学特性,对于制定和完善我国今后的小管福寿螺防制策略具有重要意义。野外调查显示,小管福寿螺对重金属污染严重水体适应性较强。相比于Fe,Cd等重金属,重金属Cu在电镀冶金、机械制造、消毒剂及农药生产等诸多方面有着更为广泛的应用,更易进入水体造成污染,水体中的Cu主要以CLu形式存在,其生物毒性显著,污染情况日益严峻。研究表明,小管福寿螺的Cu耐受能力显著高于其他淡水螺群。但是对小管福寿螺Ca适应性较强这一现象的研究,目前仅限于小管福寿螺自身趋避行为和病理生理学变化,相关功能基因的研究尚未见有涉及。因此,本研究着眼于筛选出一批小管福寿螺Cu抗性相关功能基因,为深入研究小管福寿螺Cu胁迫适应的分子机制提供有价值的候选基因。此外,本研究对候选基因中的金属硫蛋白基因(PcMT)和谷胱甘肽硫转移酶基因(PcGST1和PcGST2)的基本特征、与其他物种同源基因的遗传进化关系、组织表达本底水平、Cu胁迫前后表达量变化情况和Cu抗性功能进行分析,并构建原核表达载体,获得纯化的PcMT和PcGST2蛋白,初步探索小管福寿螺可能的Cu耐受机制。方法:①在Cu胁迫下小管福寿螺血液转录组测序获得的结果基础上,筛选出一批Cu抗性相关功能基因,对这些基因的可靠性通过实时荧光定量PCR方法验证。②选择其中的PcMT、PcGST1和PcGST2基因开展进一步研究,通过PCR方法扩增基因编码区,利用生物学信息学方法分析基因基本特征,利用MEGA 7.0软件构建进化树分析与其他物种同源基因的遗传进化关系,利用实时荧光定量PCR方法分析组织(肝脏、肾脏、鳃、血液和肠)基因的本底表达水平和Cu(50、100、150 μg/L)胁迫下(0、1、7、14d)组织中(肝脏、肾脏、鳃)基因的表达量变化情况。③选择pET28a为表达载体,构建pET28a-PcMT和pET28a-PcGST2质粒,利用IPTG诱导PcMT和PcGST2蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用Ni-NDA亲和层析法纯化PcMT和PcGST2蛋白。分析OD600值变化,比较含pET28a-PcMT和pET28a-PcGST2质粒的转化菌株与含pET28a空载体的非转化菌株在Cu胁迫下生长情况,初步验证PcMT和PcGST2基因Cu抗性功能。结果:小管福寿螺体内金属硫蛋白、热休克蛋白、谷胱甘肽硫转移酶、复肌球蛋白和天冬氨酸氧化酶等17个基因的差异表达与Cu胁迫存在一定的相关性。②研究的PcMT基因编码区全长272bp,共编码87个氨基酸,不含芳香族氨基酸和组氨酸,其末端序列CQCGKGCTGADSCKCDRKCSCK与软体动物MT特征保守序列CXCXXXCTGXXXCXCXXXCXCK完全一致,属于软体动物金属硫蛋白家族2:亚家族mog:腹足纲金属硫蛋白。PcMT蛋白含有较高的Cys残基(22个,25.3%)和较多的巯基金属簇的特征保守结构Cys-X(1-3)-Cys(17个),可能具有很强的金属结合能力,经氨基酸序列对比,PcMT与同属另一种福寿螺Pomacea bridgesi的金属硫蛋白同源性最高,为93%。③以未经Cu胁迫的小管福寿螺肝脏组织样本第一次实验获得的结果为对照1.0±0.0,发现PcMT基因的表达具有组织差异性,在小管福寿螺各组织中的表达量分别为:鳃2.4±0.4>肝1.0±0.1>肠0.9±0.1>肾脏0.7±0.1>血液0.5±0.09。④小管福寿螺PcT基因对环境中Cu敏感,以未经Cu胁迫的小管福寿螺对应组织样本第一次实验结果作为对照1.0±0.0,50μg/L即可诱导该基因在肝脏、鳃和肾组织中表达,且诱导表达的效果与胁迫时间呈较好的正相关,14d时基因表达量分别为2.03±0.3,3.4±0.4,2.8±0.6。100μg/LCu胁迫下,小管福寿螺肝脏组织中PcMT基因表达量与胁迫时长呈正相关,14d时基因表达量为2.3±0.3。而在肾组织和鳃组织中,表达量与胁迫时间呈现倒U型的特征,峰值均出现在第7d,分别为5.2±0.6和8.5±1.1。150 μ g/L Cu2t胁迫下,小管福寿螺肝脏、鳃和肾组织中PcMT基因的表达量与胁迫时间均呈现倒U型的特征,肝脏组织峰值出现在第7d,为3.3±0.8,鳃和肾组织峰值出现在第1d,分别为7.001±0.4、9.1±0.8。⑤研究的

关键词：小管福寿螺 Cu2+抗性相关基因金属硫蛋白谷胱甘肽硫转移酶表达特征分析

Cu2+胁迫对福寿螺金属硫蛋白基因mRNA表达的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第3期37卷 375-378页

作者：茅光耀郭云海张仪肖宁中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室

探讨不同浓度Cu2+胁迫对福寿螺肝胰腺组织金属硫蛋白(metallothionein, MT)基因表达的影响,取15只福寿螺,在100μg/L Cu^2+离子胁迫后的0、 1、 7、 14、 21 d,各取3只福寿螺,分离肝脏,提取RNA,反转录为c DNA,实时荧光定量PCR检测福寿... 详细信息

探讨不同浓度Cu2+胁迫对福寿螺肝胰腺组织金属硫蛋白(metallothionein, MT)基因表达的影响,取15只福寿螺,在100μg/L Cu^2+离子胁迫后的0、 1、 7、 14、 21 d,各取3只福寿螺,分离肝脏,提取RNA,反转录为c DNA,实时荧光定量PCR检测福寿螺金属硫蛋白基因(Pc MT) mRNA的相对表达水平。以cDNA为模板, PCR扩增Pc MT基因完整编码序列,连接至pET28a质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中,挑取阳性克隆进行鉴定与测序。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物。结果显示, Cu2+胁迫0~14 d,福寿螺肝脏中Pc MT基因mRNA的表达量持续上升,峰值为2.1±0.2, 21 d时下降为1.1±0.1。PCR扩增Pc MT基因,获得长度约300 bp的片段,构建的pET28a-Pc MT质粒经PCR、双酶切和测序鉴定,均与预期大小一致。SDS-PAGE结果显示, Pc MT蛋白的相对分子质量(Mr)约为17 000。

关键词：福寿螺 Cu2+胁迫金属硫蛋白基因表达分析

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浙江省杭州市入侵生物福寿螺种群遗传学研究

中国血吸虫病防治杂志 2020年第1期32卷 23-27页

作者：黄芸岳志远茅光耀郭云海张仪中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、国家热带病研究中心、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的对浙江省杭州市西湖区入侵生物福寿螺的分布现状及遗传标记进行分析,了解该地区福寿螺的扩散趋势。方法2017年在杭州市西湖区各种水体(如湖泊、河流、湿地)及沿岸陆地选择5个采样点,现场采集福寿螺标本,对采集的标本进行形态学鉴定... 详细信息

目的对浙江省杭州市西湖区入侵生物福寿螺的分布现状及遗传标记进行分析,了解该地区福寿螺的扩散趋势。方法2017年在杭州市西湖区各种水体(如湖泊、河流、湿地)及沿岸陆地选择5个采样点,现场采集福寿螺标本,对采集的标本进行形态学鉴定。同时取成螺足部肌肉组织提取总DNA进行COI基因扩增,并进行单倍型多样性、核酸多样性分析。此外,对GenBank中的福寿螺单倍型及本研究获得的单倍型进行系统进化树分析,以了解其近缘福寿螺。结果在杭州市西湖区池塘、河流、湿地等生境均发现福寿螺。根据形态特征,采集的标本初步鉴定为福寿螺。从上述福寿螺DNA样本中共获得16条序列,属于3个单倍型,分别为Hap1、Hap2、Hap3。单倍型中Hap1、Hap3频率较高,Hap2频率相对较低。以上表明本次采集的标本包括小管福寿螺和斑点福寿螺两种。Hap1与来自阿根廷及中国广东省和香港特别行政区的小管福寿螺具有较近的亲缘关系,Hap2与来自阿根廷、日本、中国广东省广州市的小管福寿螺具有较近的亲缘关系,Hap3与来自阿根廷、巴西的斑点福寿螺具有较近的亲缘关系。结论杭州市西湖区存在小管福寿螺和斑点福寿螺。斑点福寿螺扩散至西湖区可能是由多次引入导致或随水流扩散蔓延而致。

关键词：小管福寿螺斑点福寿螺 COI基因入侵生物种群遗传学杭州市

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福寿螺生态适应性相关基因研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2018年第6期36卷 666-672页

作者：茅光耀郭云海张仪肖宁中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

福寿螺是国际自然保护联盟(IUCN)公布的全球100种恶性外来物种之一,严重破坏入侵地农作物生产和水生生态系统稳定,并可作为广州管圆线虫中间宿主传播疾病。福寿螺生态适应性强,在入侵地缺少天敌,一旦定殖形成稳定种群后防制十分困难。... 详细信息

福寿螺是国际自然保护联盟(IUCN)公布的全球100种恶性外来物种之一,严重破坏入侵地农作物生产和水生生态系统稳定,并可作为广州管圆线虫中间宿主传播疾病。福寿螺生态适应性强,在入侵地缺少天敌,一旦定殖形成稳定种群后防制十分困难。研究福寿螺生态适应性机制对科学防制福寿螺具有重要意义。与其他螺群相比,福寿螺功能基因的研究尚未得到足够的关注,关于其生态适应性分子机制的研究相对较少。本文综述了国内外关于福寿螺生态适应性机制相关功能基因的研究进展,包括热休克蛋白、海藻糖合成酶、多功能纤维素酶、蛋白质神经毒素2、细胞色素P450酶系等基因。这些研究结果部分揭示了福寿螺在温度、食物、捕食者、灭螺药物等环境条件影响下自身的适应性变化趋势,但更多内在调节机制尚有待深入研究。

关键词：福寿螺生态适应性基因分子机制

福寿螺感染广州管圆线虫后G型溶菌酶基因差异表达分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第3期37卷 326-331页

作者：岳志远张仪郭云海秦志强黄芸张伟茅光耀中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025 淄川区疾病预防控制中心淄博255100

目的分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征。方法根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物, PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、 signalP 4.1、 TMHMM2.0、Smart、 MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析... 详细信息

目的分析感染广州管圆线虫后福寿螺G型溶菌酶基因的组织表达特征。方法根据福寿螺G型溶菌酶基因序列,设计特异性引物, PCR扩增后进行测序,利用在线软件ExPASy、 signalP 4.1、 TMHMM2.0、Smart、 MEGA7对其序列的基本生物学信息进行分析,并构建系统进化树。取含有广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的大鼠粪便喂食福寿螺,感染后24 h统一饲养,分别于感染后1、 10、 20、 30 d各取3~5只福寿螺采集肝胰腺、肾脏、肠道、头足和鳃组织,未感染的福寿螺为阴性对照组。提取各个感染时期福寿螺各组织总RNA,逆转录为cDNA,荧光定量PCR分析福寿螺G型溶菌酶mRNA的组织表达特征,设定对照组福寿螺各组织的G型溶菌酶m RNA的相对表达量为1.0±0.0。结果PCR扩增福寿螺G型溶菌酶基因片段,长度约为800 bp。测序结果显示,为一段828 bp的完整开放读码框,编码275个氨基酸。生物信息学分析结果显示, G型溶菌酶基因编码产物为稳定的疏水性蛋白,在1~19位存在1个信号肽,主要在细胞外包括细胞壁发挥作用,在18~85位氨基酸处存在1个SH3b结构域。系统进化树分析显示,福寿螺G型溶菌酶与尖膀胱螺的亲缘关系最近,序列一致性达79%;其次与海湾扇贝等其他软体动物较近,并聚类在一个大的分支上。荧光定量PCR结果显示,对照组雌性成年螺肝胰腺组织中, G型溶菌酶mRNA的拷贝数为2 238±158,高于雄性的685±27 (P <0.05)。福寿螺感染广州管圆线虫后,肝胰腺、肾脏、肠道、鳃和头足部的G型溶菌酶基因相对表达量,与对照组相比均有不同程度的下降(P <0.01)。感染后1、 10、 20、 30 d鳃中G型溶菌酶mRNA的相对表达量分别为0.002±0.002、 0.012±0.050、 0.001±0.000、 0.004±0.003,均低于对照组(P <0.01);肾脏组织中10 d和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);肝胰腺组织中1、 10和20 d的相对表达量低于对照组(P <0.05);感染后1、 10、 20、 30 d肠道组织中的相对表达量分别为0.280±0.040、 0.070±0.030、 0.039±0.002、 0.120±0.050,均低于对照组(P <0.05),头足部组织中的相对表达量分别为0.280±0.150、 0.150±0.008、 0.031±0.011、 0.120±0.030,均低于对照组(P <0.05)。结论福寿螺感染广州管圆线虫后, G型溶菌酶基因在鳃、肠、头足组织中各个感染时期表达均下调,肝胰腺组织中感染后1、 10、 20 d表达下调,肾脏组织中感染后10 d、 20 d表达下调。

关键词：福寿螺广州管圆线虫 G型溶菌酶

重组酶介导的多重核酸等温扩增法鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫技术的建立与应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第3期38卷 310-316页

作者：周鸿让茅光耀王晓玲陈木新余晴王莹艾琳肖宁中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA)。方法以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法。分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00... 详细信息

目的建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA)。方法以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法。分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及10^5、10^4、10^3、10^2、10个拷贝/μl的pMD19-T(Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性。采用优化后的m RAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证m RAA方法的可靠性和实用性。结果建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp。mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl。mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性。mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致。结论建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好。

关键词：细粒棘球绦虫G1 多房棘球绦虫重组酶介导的核酸等温扩增多重扩增

1951-2016年中缅边境保山市疟疾发病时间序列阶段性分析

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中国病原生物学杂志 2019年第9期14卷 1034-1037页

作者：段磊郑金鑫茅光耀王多全官亚宜肖宁中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心国家级热带病国际联合研究中心国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室

目的分析云南省保山市疟疾发病在时间上的阶段性变化特征,为开展消除疟疾及消除后的监测提供参考。方法通过文献检索,收集云南省保山市1951-2016年疟疾年发病例数及发病率数据。建立以干预措施及时间为影响变量的时间序列结构性模型,分... 详细信息

目的分析云南省保山市疟疾发病在时间上的阶段性变化特征,为开展消除疟疾及消除后的监测提供参考。方法通过文献检索,收集云南省保山市1951-2016年疟疾年发病例数及发病率数据。建立以干预措施及时间为影响变量的时间序列结构性模型,分析不同参数条件下疟疾发病率时间序列的结构特征。利用当地预防和控制措施的实施作为趋势变量,结合时间序列结构方法,分析66年来收集的疟疾数据变化的多个结构阶段。结果保山市疟疾疫情在时间上的变化是不平稳的,单位根检验拒绝平稳性零假设(P=0.0003<0.05)。保山市疟疾疫情在历史上曾出现7个阶段性的变化,以干预措施为回归变量的时间序列结构性模型较好地拟合了云南保山疟疾发病率在时间上的变化,分别为1951-1952年、1952-1959年、1959-1968年、1968-1975年、1975-1986年、1986-2009年及2009-2016年。从结构模型来看,有三个上升期:1951-1952年、1975-1986年和1986-2009年,但整体发病率呈下降趋势。结论采用干预措施为回归变量的时间序列结构性模型较好地拟合了云南保山疟疾发病率在时间上的变化规律,预测效果好,可为进一步制定预防输入和再传播措施提供参考。

关键词：疟疾发病率时间序列结构模型边境

Cu^(2+)胁迫下福寿螺谷胱甘肽S转移酶基因表达分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第2期37卷 213-217,231页

作者：茅光耀周鸿让黄芸岳志远段磊许秋利郭云海党志胜张仪肖宁中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心世界卫生组织热带病合作中心科技部国家级热带病国际联合研究中心卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室上海200025

目的分析Cu^(2+)胁迫前后福寿螺谷胱甘肽S转移酶(PcGST)基因的表达规律,探讨福寿螺适应Cu^(2+)的相关机制。方法 80只福寿螺随机分为4组,每组20只福寿螺, Cu^(2+)胁迫浓度分别为0、 50、 100、 150μg/L。分别于Cu^(2+)胁迫后的0、 1、 ... 详细信息

目的分析Cu^(2+)胁迫前后福寿螺谷胱甘肽S转移酶(PcGST)基因的表达规律,探讨福寿螺适应Cu^(2+)的相关机制。方法 80只福寿螺随机分为4组,每组20只福寿螺, Cu^(2+)胁迫浓度分别为0、 50、 100、 150μg/L。分别于Cu^(2+)胁迫后的0、 1、 7、 14 d,各组随机取3只福寿螺,分离其肝脏、鳃、肾脏组织,分别提取组织中的RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测Cu^(2+)胁迫前后PcGST m RNA的相对表达量。基于Cu^(2+)胁迫下的福寿螺基因转录组筛选获得PcGST基因,构建pET-28a-PcGST重组质粒,转化至大肠埃希菌(E. coil) BL21 (DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。将转化菌株(含PcGST基因的E. coil)和非转化菌株(未转化的E. coil)等量分成6份,随机取3份作为Cu^(2+)胁迫组(含0.2 mmol/L的CuSO4),另3份作为对照组(不含CuSO4), 20℃、 150 r/min摇床培养。每隔1 h测定一次菌液吸光度(A600)值,连续测定6 h。采用t检验比较转化菌株和非转化菌株对Cu^(2+)的耐受能力。结果设定无Cu^(2+)胁迫下的福寿螺组织中PcGST mRNA的相对表达量为1.0±0.0。肝脏组织中, 50μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为4.9±0.5; 100μg/L、 150μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7 d出现,分别为13.0±3.0和12.2±2.2。鳃组织中,50μg/L、 100μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7 d出现,分别为5.3±0.7和23.3±16.5; 150μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量也呈现先上升后下降的趋势,峰值于1 d出现,为9.8±3.3。肾脏组织中, 50μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量随时间变化不显著; 100μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST m RNA的相对表达量前期随时间变化不显著,于14 d出现显著增加,为3.9±1.0; 150μg/L Cu^(2+)胁迫下, PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为18.0±0.8。PcGST基因PCR扩增产物约为600 bp。SDS-PAGE结果显示, PcGST蛋白的相对分子质量(Mr)约为26 370。LB液体培养基中,转化菌株与非转化菌株的生长曲线接近,最大A600值分别为1.5±0.0和1.4±0.0,差异无统计学意义(P> 0.05);含0.2 mmol/L CuSO4的LB液体培养基中,转化菌株的生长曲线优于非转化菌株,最大A600值分别为1.5±0.1和1.0±0.0,差异有统计学意义(P <0.05)。结论Cu^(2+)胁迫能促进福寿螺体内PcGST基因的表达。

关键词：福寿螺 Cu^2+胁迫谷胱甘肽S转移酶基因表达分析

急诊危重症合并快速心律失常患者中使用胺碘酮治疗的临床价值分析

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第4期 31-33页

作者：周建国陆秀盼解一鸣茅光耀泰州市人民医院江苏泰州225300

分析急诊将胺碘酮用于治疗危重症合并快速心律失常患者的效果。方法从急诊2021年3月-2022年3月的危重症合并快速心律失常患者中随机抽取68例,双盲法均分为A组(西地兰)和B组(胺碘酮),对比两组效果。结果 B组治疗有效率、不良反应发生... 详细信息

分析急诊将胺碘酮用于治疗危重症合并快速心律失常患者的效果。方法从急诊2021年3月-2022年3月的危重症合并快速心律失常患者中随机抽取68例,双盲法均分为A组(西地兰)和B组(胺碘酮),对比两组效果。结果 B组治疗有效率、不良反应发生率、治疗后心功能、心理和生理应激指标优于A组(P<0.05)。结论急诊危重症合并快速心律失常患者使用胺碘酮效果理想。

关键词：急诊危重症合并快速心律失常胺碘酮心功能指标应激反应指标