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脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质NR2A及NR2B受体表达变化

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中国药理学与毒理学杂志 2012年第2期26卷 157-162页

作者：杨一萍骆媛王永安范礼斌安徽医科大学生命科学学院医学遗传学教研室安徽合肥230032 军事医学科学院毒物药物研究所军事毒理学研究室北京100850

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位NR2A/2B表达与缺血再灌注损伤的关系。方法建立局灶性大脑中动脉阻塞大鼠模型观察缺血2 h再灌6～96 h的组织病理学改变,实时荧光定量PCR及Western印迹法测定大脑皮质NR2A/2B mRNA及蛋白表达。结果... 详细信息

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位NR2A/2B表达与缺血再灌注损伤的关系。方法建立局灶性大脑中动脉阻塞大鼠模型观察缺血2 h再灌6～96 h的组织病理学改变,实时荧光定量PCR及Western印迹法测定大脑皮质NR2A/2B mRNA及蛋白表达。结果大鼠缺血再灌注后6 h,皮质开始出现明显病理学改变,12 h可见血管内有淤血,24 h梗死区锥体细胞出现严重的核固缩、核溶解,几乎看不到正常神经元,48 h出现大面积角质化,96 h可见炎症细胞浸润。与假手术组相比,再灌组NR2A/2B mRNA于再灌注6 h即开始一直持续明显下降(P<0.01),再灌12和24 hNR2A/2B mRNA比值均为1∶2,偏离正常的1∶1,48 h两者的表达开始上调,至96 h NR2A/2B mRNA比值达到1∶1;再灌24 h后NR2A蛋白表达显著降低(P<0.05);NR2B蛋白于再灌6 h开始明显降低,一直持续到24 h(P<0.01),48 h开始上调,96 h后蛋白表达接近假手术组水平。结论缺血2 h再灌注24 h后神经元损伤最严重,并与NR2A/2B表达改变存在时间一致性和受体亚型选择性。

关键词：受体,N-甲基-D-天冬氨酸脑缺血再灌注损伤大脑皮质

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PC12细胞中持续性氧糖剥夺模型的建立

军事医学 2011年第3期35卷 189-192页

作者：吴艳范礼斌张成岗安徽医科大学生命科学学院生物学教研室合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室医学神经生物学国家重点实验室北京100850

目的在PC12细胞中建立模拟永久性局部脑梗死的持续性氧糖剥夺模型。方法按照常规细胞培养方法,制备PC12细胞不同时间(5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h)持续性氧糖剥夺模型,采用MTT法检测细胞... 详细信息

目的在PC12细胞中建立模拟永久性局部脑梗死的持续性氧糖剥夺模型。方法按照常规细胞培养方法,制备PC12细胞不同时间(5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h和48 h)持续性氧糖剥夺模型,采用MTT法检测细胞的存活率,以评估持续性氧糖剥夺对PC12细胞的损伤作用。继而进行氧、血清和葡萄糖3种因素分别交叉缺失5 min后的损伤效应研究,同样采用MTT法分析细胞的存活率。结果 PC12细胞在持续性氧糖剥夺模型条件下的半数存活时间为10.3 min,进而发现低氧和缺乏血清对细胞存活率影响不大,而培养基中葡萄糖浓度对细胞的存活率影响较大,且呈一定的浓度相关性。结论在建立持续性氧糖剥夺模型的基础上确定了PC12细胞的半数存活时间,并明确了氧、血清和葡萄糖对细胞存活率的影响,为揭示局部脑缺血低氧损伤相关疾病的机制提供了重要参考资料。

关键词：脑梗死 PC12细胞氧糖剥夺模型存活率再灌注损伤葡萄糖

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脊椎骨骨骺蛋白的细胞转染定位

安徽医科大学学报 2004年第2期39卷 127-129页

作者：范礼斌安徽医科大学生物学教研室合肥230032

目的　利用重组的脊椎骨骨骺蛋白 (Sedlin)的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法　用间接免疫荧光的方法观察Sedlin在细胞中的定位。结果　荧光显微镜观察表明Sedlin分布于细胞核和细胞质中 ,极可能是以膜泡的形式存在。结论　... 详细信息

目的　利用重组的脊椎骨骨骺蛋白 (Sedlin)的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法　用间接免疫荧光的方法观察Sedlin在细胞中的定位。结果　荧光显微镜观察表明Sedlin分布于细胞核和细胞质中 ,极可能是以膜泡的形式存在。结论　实验结果为进一步了解Sedlin的功能提供了细胞学基础。

关键词：脊椎骨骨骺蛋白细胞转染定位骨软骨发育不良

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蛇毒磷脂酶A_2的毒理作用

蛇志 1993年第3期5卷 9-11页

作者：范礼斌安徽医科大学生物教研室合肥230032

生物体内含有多种磷脂酶,按水解底物部位的不同,一般可分为五大类,即磷脂酶 A_1、A_2、B、C、D(图一).其中蛇毒中的磷脂酶蛇毒 PLA_2的共同化学特征是(4):①水解磷脂底物 C-2位的酯键;②对胶束聚集的(micellar aggregate)底物水解速度快,

关键词：蛇毒磷脂酶毒理

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氯离子通道蛋白1的细胞转染定位

安徽医科大学学报 2003年第6期38卷 419-421页

作者：范礼斌安徽医科大学生物学教研室合肥230032

目的　利用重组的胞内氯离子通道蛋白CLIC 1蛋白的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法　用免疫荧光的方法观察CLIC 1蛋白在细胞中的定位。结果　荧光显微镜观察表明CLIC 1蛋白虽然在细胞核中分布较为集中 ,在细胞质中也有相当的... 详细信息

目的　利用重组的胞内氯离子通道蛋白CLIC 1蛋白的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法　用免疫荧光的方法观察CLIC 1蛋白在细胞中的定位。结果　荧光显微镜观察表明CLIC 1蛋白虽然在细胞核中分布较为集中 ,在细胞质中也有相当的分布。结论　实验结果为进一步的了解CLIC

关键词：氯离子通道蛋白1 细胞转染定位细胞培养质粒转染

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蛋白质芯片技术

安徽医科大学学报 2003年第2期38卷 83-87页

作者：范礼斌安徽医科大学生物学教研室合肥230032

DNA阵列在每平方厘米的面积上可放置成千上万个探针,通过高通量的杂交系统,一次实验就可获得大量的基因组顺序.它们在单核苷酸多态性和表达谱方面的应用已经改变了药物治疗学的研究,在临床上的应用将对医学和生物学研究产生巨大影响.

关键词：蛋白质芯片 DNA阵列蛋白质阵列类型检测

线粒体在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2012年第4期26卷 577-580页

作者：杨一萍骆媛范礼斌王永安军事医学科学院毒物药物研究所军事毒理与生化药理研究室北京100850 安徽医科大学生命科学院生物学教研室安徽合肥230032

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关键环节之一是细胞能量供应缺乏。线粒体作为细胞的能量供应站,与缺血再灌注损伤机制的多个环节密切相关,其功能障碍造成缺血再灌注对心肌细胞的严重损害的同时又能启动保护机制减轻MIRI。目前对线粒体在MIR... 详细信息

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的关键环节之一是细胞能量供应缺乏。线粒体作为细胞的能量供应站,与缺血再灌注损伤机制的多个环节密切相关,其功能障碍造成缺血再灌注对心肌细胞的严重损害的同时又能启动保护机制减轻MIRI。目前对线粒体在MIRI中所起作用的研究已深入到分子水平,以线粒体上某些分子如线粒体通透性转换孔和敏感性钾通道等为靶点,探索治疗MIRI的新策略成为近来研究的热点。本文就线粒体与MIRI相关的分子机制和以线粒体为治疗靶点的药物研究等方面做一综述。

关键词：线粒体心肌缺血再灌注损伤治疗靶点

RB1-C磷酸化位点突变体与Sedlin的共定位研究

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安徽医科大学学报 2021年第6期56卷 839-844页

作者：潘林鑫徐涛范礼斌钱成安徽医科大学生命科学学院合肥230032 安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学科研实验中心合肥230032

目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PC... 详细信息

目的研究人视网膜母细胞瘤蛋白1羧基端(RB1-C)磷酸化位点突变体的蛋白表达和细胞定位情况及其与迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白(Sedlin)共定位的变化情况。方法设计RB1-C磷酸化位点突变体的引物,以质粒pcDNA3.1-FLAG-RB1-C为模板,利用PCR技术分别扩增出pcDNA3.1-FLAG-RB1-C-S788A、S795A、S807A、T811A、T821A、T826A共6个突变体,并对各位点进行测序。分别将以上突变体单独转染至HEK 293T、COS7细胞中,利用Western blot和免疫荧光(IF)技术观察其蛋白表达和细胞定位情况;分别将以上突变体及Sedlin共同转染至COS7细胞中,利用IF技术观察二者在细胞内的共定位情况,并与野生型RB1-C的结果进行比较分析。结果测序结果显示RB1-C的6个磷酸化位点均突变成功,并能够在真核细胞内正常表达,且与野生型RB1-C的细胞定位基本一致,即主要定位在细胞核内。与野生型RB1-C相比,RB1-C-S788A、S795A、T821A、T826A与Sedlin的共定位未发生改变,即主要共定位在细胞核内;但RB1-C-S807A、T811A与Sedlin的共定位发生了显著变化,除了共定位于细胞核外,在细胞质中也存在共定位现象。结论RB1-C磷酸化位点突变体成功构建并表达,其中S807A、T811A两个磷酸化位点的突变能够显著改变RB1-C与Sedlin在细胞中共定位区域,表明它们是RB1-C和Sedlin结合的关键位点之一,为进一步研究RB1-C和Sedlin的相互作用奠定了基础。

关键词：视网膜母细胞瘤蛋白1 磷酸化迟发性脊椎骨骺发育不良病蛋白共定位

抗凋亡细胞因子治疗急性放射病的实验研究进展

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中华放射医学与防护杂志 2010年第1期30卷 94-96页

作者：赵燕芳王欣茹范礼斌罗庆良安徽医科大学基础医学院合肥230023 第二炮兵总医院检验科军事医学科学院放射与辐射医学研究所

骨髓造血干细胞及各系造血祖细胞因其高度的增殖活性而成为辐射攻击的主要靶细胞，以往人们利用粒细胞集落刺激因子（G—CSF）或粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等刺激残存定向造血干／祖细胞（HSPCs）增殖的造血因子作为急性辐射损... 详细信息

骨髓造血干细胞及各系造血祖细胞因其高度的增殖活性而成为辐射攻击的主要靶细胞，以往人们利用粒细胞集落刺激因子（G—CSF）或粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）等刺激残存定向造血干／祖细胞（HSPCs）增殖的造血因子作为急性辐射损伤（ARI）治疗研究的重点且卓有成效。随着科学的发展和研究的进一步深入，发现照射后造血细胞早期凋亡和坏死是导致体内造血干／祖细胞缺失的关键因素，

关键词：细胞因子治疗急性放射病实验研究粒-巨噬细胞集落刺激因子骨髓造血干细胞造血干/祖细胞抗凋亡粒细胞集落刺激因子