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三种酵母菌木糖醇脱氢酶基因克隆鉴定和编码蛋白质性质差异研究

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三种酵母菌木糖醇脱氢酶基因克隆鉴定和编码蛋白质性质差异研究

作者：周玚四川农业大学

学位级别：硕士

目前发酵木质纤维素生产燃料乙醇最优良的菌株为酿酒酵母,天然酿酒酵母(Saccharomyces cerevisaae)存在不能发酵木糖生产乙醇的缺陷,但能够发酵木酮糖,所以必须对酿酒酵母进行基因工程改造:向酿酒酵母中引入酵母菌的木糖代谢途径,将木... 详细信息

目前发酵木质纤维素生产燃料乙醇最优良的菌株为酿酒酵母,天然酿酒酵母(Saccharomyces cerevisaae)存在不能发酵木糖生产乙醇的缺陷,但能够发酵木酮糖,所以必须对酿酒酵母进行基因工程改造:向酿酒酵母中引入酵母菌的木糖代谢途径,将木糖转化为木酮糖从而代谢木糖。但这种代谢方式往往表现出木糖醇的积累和乙醇产量不理想的问题,而高效表达木糖醇脱氢酶基因(XYL2)是提高木糖发酵菌株效率的一个必要条件。因此,本论文选取实验室已经分离鉴定出三种代谢木糖效果较高的酵母菌株,即库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii/Issatchenkia orientalis)德尔布有孢圆酵母(Torulaspora delbreckiI)和季也蒙毕赤酵母(Meyerozyma guilliermondii),扩增出其编码木糖醇脱氢酶的基因,构建出能够利用木糖醇的酿酒酵母重组菌株,对木糖醇脱氢酶基因表达的蛋白酶性质进行研究,并以本实验室分离得到的热带假丝酵母SHC-3(Candida tropicalis)和已有报道的树干毕赤酵母CBS6054(Pichia stipitis)作为对照。目的是筛选出活性好、能够耐受发酵环境中高温和酸性的木糖醇脱氢酶。该研究获得了以下结果:(1)本实验将三种未有报道的木糖醇脱氢酶基因与pYES2/NT-B质粒连接构建出重组质粒导入酿酒酵母工程菌INVscl中表达木糖醇脱氢酶,并将基因片段进行测序分析。结果表明:这三种实验重组菌株和两种对比重组菌株都能够成功表达木糖醇脱氢酶,并且具有代谢木糖醇的能力;通过蛋白序列比对发现五种酶都属于中链脱氢酶家族(MDR),同时在目的蛋白氨基酸序列中有一个相似的锌离子结合区域和辅酶结合区域具有一定的保守性,而其他区域具有较大的差异,也具有明显的特异性。(2)本实验将三种木糖醇脱氢酶基因与荧光蛋白质粒导入酿酒酵母菌株中,诱导绿色荧光蛋白表达并观察其表达的部位,并与已知的两种木糖醇脱氢酶进行比较。结果表明:本实验研究的三种木糖醇脱氢酶基因的表达位置与热带假丝酵母和树干毕赤酵母的木糖醇脱氢酶均在细胞浆内,细胞核内和细胞壁均不能看见荧光反应,说明实验使用的五种木糖醇脱氢酶都属于胞浆蛋白。(3)对三种木糖醇脱氢酶进行各种性质的研究,以树干毕赤酵母和热带假丝酵母为对照,同时补充一些深入研究的酶活性质。结果表明:五种木糖醇脱氢酶均对辅酶NAD+有严格的依赖,在加入EDTA时酶活性受到很大的抑制,这验证了蛋白的锌离子和辅酶结合结构。其中库德毕赤酵母的木糖醇脱氢酶比活力最高为14.66U/mg,德尔布有孢圆酵母的木糖醇脱氢酶比活力最低为10.71 U/mg,且五种酶均在低温和低pH下能够较长时间保持较高的活性。不同来源的木糖醇脱氢酶其酶学性质存在比较明显的差异,德尔布有孢圆酵母的木糖醇脱氢酶在pH8.5和温度35℃时酶活性最好,Km值为20.96 mM,最大反应速率最高,Mg2+能够促进其活性,Ca2+对其有明显的抑制效果;季也蒙毕赤酵母的木糖醇脱氢酶在pH8.0和温度35℃时其活性最好,Km值为18.83 mM,在加入低浓度β-巯基乙醇时有较明显的促进作用;对木糖醇利用效率最好的是库德毕赤酵母的木糖醇脱氢酶,Km值为10.38 mM,在五种酶中亲和力最高,催化效果最佳(Kcat/Km,86.82mM-1min-1),在pH8.0和温度45℃条件下活性最佳,Mg2+能够明显的促进其酶活性,对其他木糖醇脱氢酶抑制明显的Ni2+对其基本没有影响,在Na+存在的条件下会对酶活性有很明显的促进作用,最高在300mM浓度时可达到171%,并且对于K+有高度的耐受性,该木糖醇脱氢酶能够高度耐受盐离子,但其在加入β-巯基乙醇时受到明显的活性抑制;树干毕赤酵母的木糖醇脱氢酶最适温度明显低于其他酶为35℃,不利于高温发酵使用,Km值为30.58 mM,亲和力最低;热带假丝酵母的木糖醇脱氢酶最适温度为50℃,明显高于其他酶,适用于在高温发酵,Km值为19.27 mM,亲和力仅次于库德毕赤酵母,酶活性受Cu2+的抑制作用比其他木糖醇脱氢酶弱,Mg2+能够较大的促进其酶活性,在加入β-巯基乙醇时有少量的促进作用。本论文研究成功构建了三种可以代谢木糖醇的重组酵母菌株,并研究分析了其蛋白性质。本论文研究取得的成果使我们对酿酒酵母代谢木糖的相关机制有了更深入的认识,对不同木糖醇脱氢酶的蛋白性质研究为今后构建出能够高效发酵木糖的酿酒酵母及后续深入研究奠定基础,对实现木质纤维素燃料乙醇的高效生产具有重要的科学及实践意义。

关键词：酵母菌木糖醇脱氢酶 XYL2 酶学性质

常规超声及超声造影评估肝移植供肝质量的临床价值

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器官移植 2021年第3期12卷 257-261页

作者：金洁玚任杰中山大学附属第三医院超声科广州510630

目前等待肝移植的终末期肝病患者众多,快速、简便、无创、准确地评估供肝质量,对改善肝移植受者的预后和生存质量具有重要意义。临床上尚没有统一的供肝质量评估标准,大多采用综合评估的方法,包括供者的临床指标、实验室检查、影像学检... 详细信息

目前等待肝移植的终末期肝病患者众多,快速、简便、无创、准确地评估供肝质量,对改善肝移植受者的预后和生存质量具有重要意义。临床上尚没有统一的供肝质量评估标准,大多采用综合评估的方法,包括供者的临床指标、实验室检查、影像学检查以及病理学检查等。常规超声及超声造影可在肝移植术前评估供肝质量及预测肝移植术后并发症的发生情况,在肝移植中具有较好的应用前景。本文总结了常规超声及超声造影在评估供肝血管变异、供肝实质微循环灌注、供肝脂肪变性程度、供肝纤维化程度、供肝体积与质量等方面的基本方法和研究进展,为临床供肝质量评估提供更多的方法与思路。

关键词：超声超声造影肝移植脂肪变性纤维化血管变异微循环灌注胆道并发症动脉并发症

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基于复杂网络理论的微博信息传播实证分析

图书情报工作 2012年第8期56卷 42-46页

作者：田占伟隋玚哈尔滨工业大学管理学院哈尔滨150090 黑龙江大学新闻传播学院哈尔滨150030

为研究信息在微博中的传播特征,对新浪微博数据进行实证分析。利用复杂网络理论方法,对构建的微博信息传播网络,进行基于度、路径统计指标的分析,发现该网络具有集群性、小世界、高度中心化等特征。这些特征表明,信息在微博网络中的传... 详细信息

为研究信息在微博中的传播特征,对新浪微博数据进行实证分析。利用复杂网络理论方法,对构建的微博信息传播网络,进行基于度、路径统计指标的分析,发现该网络具有集群性、小世界、高度中心化等特征。这些特征表明,信息在微博网络中的传播效率比其他在线社会网络更高;网络中介数中心点对信息传播效率的贡献显著,但网络并不脆弱;节点在信息传播中的作用差异很大,易于形成意见领袖。按行业属性对网络进行群落划分后,发现各群落在微博中表现出的信息传播特性与在现实社会中相似。

关键词：复杂网络微博信息传播网络结构分析

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舒曼特殊的音乐世界——钢琴曲《蝴蝶》解析

音乐创作 2018年第8期 136-137页

作者：夏瑒郑州师范学院音乐与舞蹈学院

罗伯特·舒曼是德国十九世纪时期的杰出音乐家,其代表性作品《蝴蝶》让人们看到了其在作曲方面的才华,也成就了舒曼的音乐地位。舒曼把自己对音乐的看法融入到《蝴蝶》音乐创造当中,使浪漫主义风格在音乐中更加明显,从而形成了具有个人... 详细信息

罗伯特·舒曼是德国十九世纪时期的杰出音乐家,其代表性作品《蝴蝶》让人们看到了其在作曲方面的才华,也成就了舒曼的音乐地位。舒曼把自己对音乐的看法融入到《蝴蝶》音乐创造当中,使浪漫主义风格在音乐中更加明显,从而形成了具有个人特色的一种套曲模式的钢琴曲。

关键词：舒曼钢琴曲《蝴蝶》音乐世界

基于广义AFT模型的纵向数据与区间删失数据的联合分析

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基于广义AFT模型的纵向数据与区间删失数据的联合分析

作者：易铭瑒长春工业大学

学位级别：硕士

生存分析是统计学中关键的一部分,专注于事件发生时间及其影响因素的研究。实际应用中,常面临数据不完整的问题,尤其是删失数据问题。这些数据大致分为右删失、左删失和区间删失三种类型,区间删失数据仅提供事件发生的时间区间。随着研... 详细信息

生存分析是统计学中关键的一部分,专注于事件发生时间及其影响因素的研究。实际应用中,常面临数据不完整的问题,尤其是删失数据问题。这些数据大致分为右删失、左删失和区间删失三种类型,区间删失数据仅提供事件发生的时间区间。随着研究领域的问题更加复杂,需采用更高级的分析方法,特别是在临床医学研究中,生存数据与纵向数据的结合分析变得至关重要。联合模型应运而生,它整合生存数据模型(如Cox比例风险模型和加速失效时间模型)和纵向模型,通过联合似然同时分析两种数据,有效处理纵向数据的测量误差和时间相关信息。此模型的优势在于能够无偏估计纵向过程与生存过程间的关系,这意味着它能够更准确地揭示这两种数据之间的动态交互,为理解事件的发生时间及其因素提供一个更为全面和精确的视角。本文旨在探索基于区间删失数据的混合效应模型与加速失效时间模型的联合分析方法。本文第一部分将线性混合效应模型与加速失效时间模型相结合,以更精准地分析数据。这种方法的核心在于引入加速因子,它允许更全面地考虑协变量过程对研究结果的影响。为实现这一目标,采用联合分析的策略,并通过潜变量将线性混合效应模型与加速失效时间模型相结合,并运用蒙特卡洛期望最大化(Monte Carlo Expectation Maximization,MCEM)算法来估计模型参数。为验证这一方法的有效性,进行大量的模拟研究。这些模拟实验不仅证实方法的可靠性,而且展示其在应对复杂数据分析时的优越性。进一步地,将这一方法应用于艾滋病的研究中,以此来展示其在实际医学研究中的应用价值。本文第二部分探讨一种结合广义线性混合效应模型和加速失效时间模型的分析方法。这一方法扩展传统线性混合效应模型的应用范围,使其能够适用于更多领域。本部分采取联合分析策略,通过潜变量,将广义线性混合效应模型与加速失效时间模型紧密结合,并利用MCEM算法估计所需的模型参数。为检验该方法的效果,进行大量的模拟实验。这些实验不仅验证方法的稳健性,还展现其在分析复杂数据方面的显著优势。此外,将此方法应用于肝硬化的实验性研究中,可以进一步体现其在医学研究领域中的实际效用和重要价值。

关键词：区间删失数据纵向数据 AFT模型联合模型 MCEM算法

运用成人依恋理论改善情侣亲密关系的探索性研究

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运用成人依恋理论改善情侣亲密关系的探索性研究

作者：骆瑒华东师范大学

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成人依恋是指“个体与当前同伴之间强烈的和长久的情感联系”。自上世纪80年代中期，国外兴起了从依恋角度研究成人亲密关系的研究，并取得了丰富的研究成果;同时，由John Bowlby开创的运用依恋理论的心理咨询模式也被广泛的实践证明“... 详细信息

成人依恋是指“个体与当前同伴之间强烈的和长久的情感联系”。自上世纪80年代中期，国外兴起了从依恋角度研究成人亲密关系的研究，并取得了丰富的研究成果;同时，由John Bowlby开创的运用依恋理论的心理咨询模式也被广泛的实践证明“非常有用”。但国内对成人依恋的研究刚刚起步，在咨询中运用依恋理论的实践尚处在探索阶段，更没有人正式提出从依恋类型的差异去理解与解释不同个体在亲密关系中认知、行为、情感差异的咨询模式。基于此现状，本文将研究成人依恋理论与亲密关系之间的联系，并从依恋类型的特征出发，进行改善情侣亲密关系的心理咨询，为恋爱咨询和婚前辅导提供了新的思路。本文试图实现三个目标：首先，尽可能明晰地介绍成人依恋理论及从成人依恋角度对亲密关系的研究成果;其次，采用经过翻译并修订的亲密关系体验问卷和自编的亲密关系质量问卷了解国内青年情侣依恋类型的状况及各种依恋类型的恋人的亲密关系质量，探索不同依恋类型情侣的亲密关系差异及亲密关系与成人依恋维度的相关性，为制订相应的恋爱心理咨询方案提供参考;最后，结合问卷调查的结果和各依恋类型的特征，选取有代表性的三个案例，对他们进行改善亲密关系的心理咨询，探讨这种从成人依恋类型的特征出发的咨询方式的有效性和价值。调查研究结果表明：(1)在青年情侣中安全依恋的人所占比例最高，迷恋型其次，冷漠型的恋人最少，男女在各个类型中所占的人数比例没有显著差异;(2)不同依恋类型的个体对亲密关系质量的体验与评定有差异;(3)相同依恋类型的男女对亲密关系的质量评定没有显著差异;(4)亲密关系的持久性及亲密性中的了解要素与依恋的回避维度和焦虑维度呈显著负相关。个案研究部分，采用评估解释—认知调整—模式重构的咨询结构对三个案例(恐惧型(男);冷漠型(女)和安全型(男);安全型(女)和迷恋型(男))进行改善亲密关系的咨询。个案的反馈均比较理想。最后，本研究对成人依恋理论在个案咨询中的作用进行探讨，对运用依恋理论进行心理咨询的操作技巧进行说明，提出成人依恋理论在个案咨询中亟需解决的问题，并指出研究的发展方向。综上所述，本研究认为结合成人依恋理论来理解和解释恋人间的问题，并根据类型差异改善恋人亲密关系的咨询方式具有较高的实践价值，值得研究和推广。

关键词：成人依恋青年情侣亲密关系心理咨询个案研究

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中国人口年龄结构对居民消费的影响研究

中国人口年龄结构对居民消费的影响研究

作者：杨瑒山西财经大学

学位级别：硕士

1978年以来,中国经济飞速发展,GDP年平均增长率在10%左右,并且已步入高质量发展阶段。中国作为一个人口基数大、经济发展正处于转型期的发展中国家,能够在短短几十年取得这样大的成就实属不易。但是中国的消费率特别是居民消费率这些年... 详细信息

1978年以来,中国经济飞速发展,GDP年平均增长率在10%左右,并且已步入高质量发展阶段。中国作为一个人口基数大、经济发展正处于转型期的发展中国家,能够在短短几十年取得这样大的成就实属不易。但是中国的消费率特别是居民消费率这些年来一直偏低,消费对经济的拉动总体不足,阻碍了我国经济增长方式的转型进程。在影响居民消费的众多因素中,人口年龄结构对消费是有直接影响的。随着人口年龄结构的不断老化,这一影响将会越来越大,甚至会影响到中国的经济转型和发展。而且随着我国人口自然增长率的不断下降,劳动年龄人口占比呈降低的趋势,劳动力负担逐渐增大,人口老龄化的问题越来越严重。所以,本文在居民消费率偏低和人口老龄化的双重背景下,围绕中国人口年龄结构和居民消费进行研究,重点研究当前国内人口年龄结构变化对居民消费的影响机制,并通过实证分析进行验证,以期为我国经济发展和人口政策的制定提供一定的理论依据和实证参考。本文首先对于国内外关于人口年龄结构与消费的研究文献进行了概括和归类总结,在此基础上,从“少子化”、劳动年龄人口比重、“老龄化”三个方面得出人口年龄结构对居民消费的影响机制,并结合我国实际进行分析。其次,结合各时期人口和经济政策的背景,分析中国人口年龄结构和居民消费的现状及二者的变动关系,并对其特征和变化趋势进行总结,得出中国人口老龄化不断加深及中国消费率偏低的结论。再次,选取居民消费率作为居民消费的代表,在消费模型中纳入人口年龄结构变量,构建较为合理的固定效应模型,并根据模型的实际需求和检验结果对其进行不断调整。从全国分析、区域比较、城乡比较三个方面,得出拟合较高且贴近我国实际情况的结果,并进行客观全面的分析,总结中国人口年龄结构对居民消费影响的规律和特征,相对于其他仅从全国及某个省的角度进行研究的文献来说,有一定程度的创新。最后,总结本文的主要结论,并从政策层面、社会保障及养老、收入和消费层面提出相应的对策建议。通过本文的研究,得出以下结论:(1)中国的人口老龄化问题日趋严重,“少子化”和“老龄化”问题同时存在,低生育率导致劳动力结构不断老化。(2)从全国来看,少儿抚养比、老年抚养比对居民消费率分别存在正向和负向作用,但老年抚养比对其冲击更大,中国人口年龄结构是导致居民消费率偏低的重要原因之一。(3)中国人口年龄结构对居民消费的影响存在明显的区域差异,与全国的表现并不一致,少儿抚养比对四个经济区域的正向影响均显著,其中,对东北影响最大,对西部影响最小;老年抚养比对东部居民消费率有显著负向作用,而对东北地区有显著的正影响,且影响程度明显大于其他区域,但是对中西部地区影响不显著。(4)中国人口年龄结构对城乡居民消费率的影响同全国一致,其中,对城镇的影响明显大于农村。(5)消费习惯对中国的居民消费会有比较大的影响,并且城乡居民消费长期伴随“高增长、高储蓄”现象。

关键词：人口年龄结构居民消费人口抚养比人口老龄化

钢琴组曲《红色娘子军》的艺术特色与演奏诠释

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钢琴组曲《红色娘子军》的艺术特色与演奏诠释

作者：赵玥玚中北大学

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《红色娘子军》钢琴组曲改编于同名芭蕾舞剧,是我国著名作曲家杜鸣心在“文革”时期创作的。音乐主题取材于芭蕾舞剧中最具代表性的七个乐段,分别是《娘子军操练》、《赤卫队员五寸刀舞》、《清华参军》、《军民一家亲》、《快乐的女战... 详细信息

《红色娘子军》钢琴组曲改编于同名芭蕾舞剧,是我国著名作曲家杜鸣心在“文革”时期创作的。音乐主题取材于芭蕾舞剧中最具代表性的七个乐段,分别是《娘子军操练》、《赤卫队员五寸刀舞》、《清华参军》、《军民一家亲》、《快乐的女战士》、《常青就义》和《奋勇前进》。这部作品创造性地将海南民歌的音调素材和钢琴丰富的音乐表现手法相融合,具有较高的艺术价值和历史地位,是对同名舞剧音乐的凝练和升华,塑造的个性鲜明的人物形象和承载的红色精神,极具时代特征和民族特色。本文以梳理杜鸣心的创作历程和芭蕾舞剧的相关资料为基础,以《红色娘子军》的艺术特色为研究重点,以该作品的演奏诠释为研究主体,对该作品进行全面详细的阐述。全文共分为五个部分。绪论部分阐述了本课题的选题目的和意义。第二部分介绍了作品的创作背景。第三部分从时代性、民族性、叙事性等方面总结了作品的艺术特色。第四部分从音色、触键、踏板、节奏、情感等方面对作品的演奏方法进行了详细的阐述。结语部分对以上进行了归纳总结,以期为研究者提供新的参考思路。由于时代的局限,作者运用最朴实、最经典的传统创作技法铸造出时代的强音。这部钢琴改编作品几十年来经久不衰、历久弥新,正是值得我们研究和思考的。

关键词：钢琴组曲《红色娘子军》艺术特色演奏诠释

完善农村土地承包经营权流转制度研究——基于建立城乡一体化的社会保障体系的视角

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完善农村土地承包经营权流转制度研究——基于建立城乡一体化的社...

作者：万玚武汉科技大学

学位级别：硕士

农村社会保障是我国民生问题的重要内容，而与农村社会保障密切相关的就是集体土地。从古至今，农村土地都起着主要的社会保障功能。但是随着时代的变迁、经济的发展，土地的社会保障功能有些地方不断弱化。此外，在土地流转过程中，由... 详细信息

农村社会保障是我国民生问题的重要内容，而与农村社会保障密切相关的就是集体土地。从古至今，农村土地都起着主要的社会保障功能。但是随着时代的变迁、经济的发展，土地的社会保障功能有些地方不断弱化。此外，在土地流转过程中，由于国家、集体及个人之间的利益分配不合理、政府违背农民意愿强制征收土地及土地流转的粗糙性及不透明性产生的土地补偿不到位等问题，致使农村土地流转问题成为我国目前“三农”问题的核心，土地流转问题的解决对于“三农”问题的解决及农村社会保障制度的构建都具有重要的现实意义。本文从城乡一体化社会保障体系建立的角度出发，利用历史分析法及文献分析法，总结我国农村土地制度改革取得的成就，分析存在的问题，剖析农村土地流转与城乡一体化社会保障体系建立的内在关系，研究农村土地流转发展现状、社会保障在农村土地流转中的主要体现、农村土地流转制度对农民社会保障的主要影响等，提出完善土地流转制度的措施，建立城乡一体化的社会保障体系。同时，从区域发展、户籍制度改革、政府腐败等角度探讨完善我国农村土地流转制度需要防范的问题。

关键词：土地承包经营权土地流转社会保障城乡一体化的社保体系