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干细胞基因Lgr5在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

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肿瘤防治研究 2016年第10期43卷 863-869页

作者：吕转李砺锋范智蕊马望王留兴郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052

目的探讨干细胞基因Lgr5在食管鳞癌组织及其成球细胞中的表达意义。方法采用免疫组织化学法(IHC)检测280例食管鳞癌和150例癌旁组织中Lgr5蛋白的表达水平;低黏附培养法培养食管鳞癌细胞KYSE70形成成球细胞,Quantitative real-time PCR(q... 详细信息

目的探讨干细胞基因Lgr5在食管鳞癌组织及其成球细胞中的表达意义。方法采用免疫组织化学法(IHC)检测280例食管鳞癌和150例癌旁组织中Lgr5蛋白的表达水平;低黏附培养法培养食管鳞癌细胞KYSE70形成成球细胞,Quantitative real-time PCR(q RT-PCR)、Western blot法检测干性相关基因SOX2、ALDH1A1、NANOG以及Lgr5在亲代细胞和成球细胞中的表达差异;Transwell实验检测成球细胞的迁移和侵袭能力、q RT-PCR法检测成球细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Vimentin和N-cadherin的表达水平。结果 Lgr5在食管鳞癌组织的表达水平明显高于癌旁正常食管组织(P<0.05),且与淋巴结转移、浸润深度、肿块大小、分化程度、肿瘤分期密切相关(均P<0.05)。与亲代细胞相比,食管鳞癌成球细胞中干性相关基因SOX2、ALDH1A1、NANOG表达水平升高(均P<0.05),Lgr5在食管鳞癌成球细胞中的表达水平也明显升高(P<0.05),并且其迁移和侵袭能力增强(P<0.05),EMT相关标志物Vimentin和N-cadherin的m RNA表达水平升高(均P<0.05)。结论Lgr5可能为食管鳞癌复发、进展、侵袭转移的标志之一,Lgr5高表达的食管鳞癌细胞可能具有干细胞样特性,并且可能为食管鳞癌细胞的一个干性调控基因。

关键词： Lgr5 食管鳞癌肿瘤干细胞 KYSE70 成球细胞

胃肠癌MTHFR基因C677T多态性与5-氟尿嘧啶化疗方案治疗敏感性的相关性Meta分析

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肿瘤 2017年第7期37卷 762-772页

作者：马丙钧薛文华刘凤云范智蕊李砺锋丁显飞周学良赵杰郑州大学第一附属医院药学部河南郑州450052 漯河医专第二附属医院内四科河南漯河462000 郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052

目的 :系统评价胃肠癌组织中亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因C677T位点多态性与含5-氟尿嘧啶化疗方案治疗敏感性的相关性。方法:系统检索PubMed、EBSCO、Web of Science、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国知网、维普以及万方数据库,收集有关MTHFR C677T基因多态性与含5-氟尿嘧啶化疗方案治疗胃肠癌敏感性关系的研究文献,检索时限均从各数据库建库至2016年12月。由2位评价者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料后,采用Rev Man 5.3软件进行Meta分析,并采用STATA 12.0统计学软件进行敏感性分析和发表偏倚评估。结果:共纳入11项研究,共1 267例胃肠癌患者。携带T等位基因的患者对含5-氟尿嘧啶化疗方案的敏感性明显高于携带C等位基因的患者[比值比(odds ratio,OR)=5.31,95%可信区间(confidence interval,CI)为3.23~8.73,P<0.001]。TT基因型患者对化疗方案的敏感性明显高于CC基因型患者(OR=4.87,95%CI为2.18~10.86,P<0.001)。TT+TC基因型患者对化疗方案的敏感性明显高于CC基因型患者(OR=0.52,95%CI为0.33~0.84,P=0.007)。TT基因型患者对化疗方案的敏感性明显高于CC+TC基因型患者(OR=4.39,95%CI为2.07~9.32,P<0.001)。结论:胃肠癌患者的MTHFR C677T基因多态性与含5-氟尿嘧啶化疗方案治疗敏感性明显相关。

关键词：胃肠肿瘤亚甲基四氢叶酸还原酶多态性单核苷酸氟尿嘧啶化疗敏感性

HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2017年第5期43卷 910-917,I0004页

作者：王娇娇范智蕊李砺锋丁显飞周学良赵杰王留兴郑州大学第一附属医院超声科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院生物细胞治疗中心河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052 郑州大学第一附属医院药学部河南郑州450052

目的:构建造血祖细胞激酶1(HPK1)慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDAMB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法:通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系(MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1),将2个细... 详细信息

目的:构建造血祖细胞激酶1(HPK1)慢病毒载体,探讨HPK1过表达对乳腺癌MCF-7和MDAMB-231细胞增殖和凋亡的作用,阐明其可能的机制。方法:通过过表达HPK1的慢病毒感染细胞,获得稳定表达HPK1的细胞系(MCF-7-HPK1和MDA-MB-231-HPK1),将2个细胞系分别分为3组,即空白组、对照组(空载体组)和过表达组;分别采用RT-PCR法和Western blotting法检测乳腺癌细胞中HPK1mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Transwell法分析细胞的迁移能力,Western blotting法检测caspase 3、PTEN、MMP-9、MMP-2、Ki-67和HPK1蛋白表达水平。结果:与空白组和对照组比较,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞过表达组中HPK1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),穿越Matrigel的细胞数明显减少(P<0.05),MCF-7细胞周期阻断在G1期;过表达组细胞中caspase 3、PTEN蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP-9、MMP-2、Ki-67蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:HPK1过表达可抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖及迁移并诱导凋亡,其可能与caspase 3、PTEN蛋白的表达上调及MMP-9、MMP-2和Ki-67蛋白的表达降低有关。

关键词：造血祖细胞激酶1 乳腺癌细胞株细胞增殖细胞凋亡

补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响

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中国实验方剂学杂志 2015年第14期21卷 136-140页

作者：邓晓明范智蕊苗学红李砺锋王淑玲詹向红郑州大学第一附属医院郑州450052 郑州大学基础医学院郑州450001 河南中医学院基础医学院郑州450046

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量... 详细信息

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量组),正常组,顺铂组ip给予相应药物,补肾疏肝方ig给予相应药物,正常组给予等体积的生理盐水,制备大鼠含药血清;分别配制10%含补肾疏肝方低、高剂量、顺铂、低剂量联合顺铂、高剂量联合顺铂,分别与肺癌A549细胞共同培养,CCK8法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响;流式细胞术检测含药血清对A549细胞周期的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测含药血清对相关m RNA表达的影响;流式细胞术检测含药血清对CD133蛋白表达的影响。结果:补肾疏肝方以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与顺铂联合有协同增效作用,24,48,72 h高剂量联合顺铂组的抑制率分别为45.39%,54.76%及59.94%;与正常组比较,补肾疏肝方、联合、顺铂含药血清可促进A549细胞凋亡,随着浓度增加,G2/M期细胞的百分比明显增加,明显下调CD133,SOX-2,OCT-4 m RNA的表达,明显降低CD133蛋白表达量,均具有明显统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾疏肝方可抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,与顺铂联合可下调CD133,SOX-2,OCT-4等干性因子的表达。

关键词：补肾疏肝方肺癌 A549细胞干性因子

EZH2和DLC1在乳腺癌组织和细胞中的表达及相关性

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肿瘤 2017年第8期37卷 856-864,877页

作者：周学良豆萌萌丁显飞李砺锋高新雅张伟杰马志俊范智蕊吕转薛文华赵杰王留兴郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院中西医结合科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科生物治疗中心河南郑州450052 郑州大学第一附属医院药剂科河南郑州450052

目的:研究果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)和肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC1)在乳腺癌组织及细胞中的表达水平,并探讨二者之间的相互关系。方法:首先采用免疫组织化学法检测120例乳腺癌... 详细信息

目的:研究果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)和肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC1)在乳腺癌组织及细胞中的表达水平,并探讨二者之间的相互关系。方法:首先采用免疫组织化学法检测120例乳腺癌组织及63例癌旁正常组织中EZH2和DLC1蛋白的表达情况;随后分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测20例乳腺癌以及癌旁正常组织,以及乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞及正常乳腺上皮细胞HBL100中EZH2和DLC1 mRNA及蛋白的表达水平。通过脂质体法将特异性针对EZH 2基因的siRNA转入MDA-MB231细胞,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测MDA-MB231细胞中EZH2及DLC1 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:免疫组织化学检测结果提示,EZH2蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于其在癌旁正常组织中的阳性表达率(P=0.000),DLC1蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率明显低于其在癌旁正常组织中的阳性表达率(P=0.008)。乳腺癌组织中EZH2和DLC1蛋白的阳性表达率与肿瘤大小及淋巴结转移密切相关(P值均<0.05)。实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测结果显示,EZH2 mRNA和蛋白在乳腺癌组织和乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞中的表达水平均明显高于癌旁正常组织和正常乳腺上皮细胞HBL100(P值均<0.01),而DLC1 mRNA和蛋白的表达水平均明显低于癌旁正常组织和正常乳腺上皮细胞HBL100(P值均<0.01)。沉默MDA-MB231细胞中EZH 2基因表达后,DLC1 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P值均<0.05)。结论:EZH2与DLC1在乳腺癌中的表达呈负相关,抑制EZH2的表达可以恢复DLC1的表达,提示EZH2可能通过抑制DLC1的表达促进肿瘤的发生和发展。

关键词：乳腺肿瘤甲基转移酶类 EZH2基因 DLC1基因

去势小鼠肾虚肺癌模型建立后性激素对肺癌发生的作用机制探讨

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肿瘤 2017年第9期37卷 917-923,952页

作者：豆萌萌王淑玲周学良朱恪岩范智蕊丁显飞李砺锋申培红古兆森郭茂峰闫明邓晓明郑州大学第一附属医院中西医结合科河南郑州450052 郑州大学基础医学院河南郑州450000 郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052 河南省肿瘤医院(郑州大学附属肿瘤医院) 河南郑州450008

目的:探讨雄性去势小鼠和正常小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、性激素及其受体表达的差异,了解性激素对肺癌发生的作用机制。方法 :选用24只8~9周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为去势组和对照组各12只。去势组采用经腹部途径双侧睾丸切除术,对照... 详细信息

目的:探讨雄性去势小鼠和正常小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、性激素及其受体表达的差异,了解性激素对肺癌发生的作用机制。方法 :选用24只8~9周龄C57BL/6雄性小鼠,随机分为去势组和对照组各12只。去势组采用经腹部途径双侧睾丸切除术,对照组进行同一部位双侧睾丸周围脂肪切除的假手术。恢复性饲养2周后,采用腋下皮下接种法建立小鼠Lewis肺癌模型。观察各组小鼠体内肿瘤的生长情况,每5 d测量一次肿瘤大小。接种3周后,称取小鼠体质量并取血清,然后采用脱颈法处死小鼠,分别剖取移植瘤和肺组织并称质量。ELISA法检测去势组和对照组血清中雌二醇(estrodiol,E_2)和睾酮(testosterone,T)水平。免疫组织化学法检测小鼠移植瘤与肺组织中雄激素受体(androgen receptor,AR)和雌激素受体(estrogen receptor,ER)α/β的表达情况。结果 :与对照组比较,去势组小鼠术后体质量减轻(P<0.05),移植瘤体积增长较快(P<0.05),移植瘤和肺组织质量均明显增加(P值均<0.05),肺部转移结节数增多(P<0.05),血清中E_2和T水平均成倍降低(P值均<0.001)。去势组和对照组的肺组织中,AR、ERα和ERβ均高表达,且去势组的高表达率明显高于对照组(P值均<0.05);在移植瘤组织中,去势组和对照组的AR和ERα均低表达,而ERβ高表达,且去势组的ERβ高表达率明显高于对照组(P<0.05)。结论 :去势可引起小鼠体内性激素水平紊乱,性激素受体表达异常上调,从而使小鼠体质量减轻,移植瘤生长加速,肺部转移结节数增多。推测性激素及其受体水平失衡可能影响肺癌的发生和发展。

关键词：肺肿瘤性腺甾类激素睾丸切除术肾虚疾病模型,小鼠

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肿瘤标志物联合检测对小细胞肺癌的诊断价值

中华实用诊断与治疗杂志 2016年第10期30卷 1005-1007页

作者：韦飞王贵吉王淑玲范智蕊李砺锋梁淑影龙芬李向辉郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州450052

目的探讨血清神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、糖类抗原(carbohydrate antigen,CA)125、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、非小细胞肺癌抗原(cytokeratin 19fragment,CYFRA21-1)联合检测对小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的诊断价值。方法 SCLC患者51例(SCLC组)和同期体检健康者25例(对照组),采用电化学发光法检测2组血清NSE、CA125、CEA、CYFRA21-1、CA19-9、CA72-4水平,应用ROC曲线进行分析和评价。结果 SCLC组NSE[(60.22±19.62)μg/L]、CA125[(49.79±9.78)u/mL]、CEA[(6.46±1.02)μg/L]、CYFRA21-1[(3.95±0.85)μg/L]高于对照组[(13.47±4.41)μg/L、(11.49±3.32)u/mL、(1.93±0.75)μg/L、(2.14±0.64)μg/L],差异有统计学意义(P0.05);血清NSE、CA125、CEA、CYFRA21-1在SCLC组的AUC分别为0.905、0.853、0.778、0.705;ROC曲线分析显示NSE、CA125、CEA、CYFRA21-1的临床诊断临界点分别为23.23μg/L、19.71 u/mL、2.64μg/L、3.24μg/L,单项检测时,NSE、CA125、CEA、CYFRA21-1的灵敏性分别为74.51%、64.71%、64.71%、50.98%,特异性分别为100.00%、96.00%、88.00%、92.00%,4项指标联合检测时灵敏性为94.12%,特异性为84.00%。结论血清NSE是诊断SCLC的一个较理想指标;检测血清NSE、CA125、CEA、CYFRA21-1水平对诊断SCLC有重要意义,4项联合检测灵敏度较单项检测升高,但特异性下降。

关键词：小细胞肺癌肿瘤标志物 ROC曲线

GSTP1基因启动子甲基化与前列腺癌发生风险:一项Meta分析

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肿瘤 2017年第6期37卷 604-615页

作者：周学良豆萌萌丁显飞李砺锋薛文华高新雅吕转张伟杰池艳艳吴少璇范智蕊孙同文赵杰王留兴郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院中西医结合科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科生物治疗中心河南郑州450052 郑州大学第一附属医院药剂科河南郑州450052

目的:系统评价谷胱甘肽S-转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因启动子甲基化与前列腺癌发生风险之间的关系。方法:计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、ISI Web of Science和中国知网等数据库,按照文献纳入标准... 详细信息

目的:系统评价谷胱甘肽S-转移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)基因启动子甲基化与前列腺癌发生风险之间的关系。方法:计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、ISI Web of Science和中国知网等数据库,按照文献纳入标准和排除标准选择有关GSTP1基因启动子甲基化状态与前列腺癌发生之间关系的研究。对比前列腺癌组织与非前列腺癌组织以及前列腺癌患者与非前列腺癌患者血液或尿液中GSTP1基因启动子甲基化发生率的差异。采用比值比(odds ratio,OR)作为效应量,各效应量以95%可信区间(confidence interval,CI)表示。应用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果:最终纳入19项研究,共含1 889例病例。Meta分析结果显示,GSTP1基因启动子甲基化组的前列腺癌发生风险是未甲基化组的23.49倍[OR=23.49(95%CI:13.14~42.01),P<0.001]。结论:GSTP1基因启动子甲基化可能增加前列腺癌的发生风险。

关键词：前列腺肿瘤谷胱甘肽S-转移酶P1 甲基化 Meta分析

二甲双胍与2型糖尿病患者膀胱癌发病风险及治疗疗效的Meta分析

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肿瘤 2016年第6期36卷 659-667页

作者：丁显飞豆萌萌周学良李砺锋张超奇王峰池艳艳吴少璇许振涛袁博师培娜郑少华范智蕊张亚娜王珺吕转王君生余言午孙谋孙同文樊青霞郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院中西医结合科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院肿瘤科生物治疗中心河南郑州450052 郑州大学第一附属医院外科ICU 河南郑州450052 郑州大学第一附属医院综合ICU 河南郑州450052

目的：系统评价二甲双胍与2型糖尿病患者膀胱癌发病风险以及治疗疗效之间的关系。方法：计算机检索Pub Med、Embase、Cochrane Library、ISI Web of Science和中国知网等数据库,按照文献纳入标准和排除标准选择关于二甲双胍与2型糖尿... 详细信息

目的：系统评价二甲双胍与2型糖尿病患者膀胱癌发病风险以及治疗疗效之间的关系。方法：计算机检索Pub Med、Embase、Cochrane Library、ISI Web of Science和中国知网等数据库,按照文献纳入标准和排除标准选择关于二甲双胍与2型糖尿病患者膀胱癌发病风险以及治疗疗效之间关系的研究,主要结局指标包含发病率（incidence）、癌症特异性死亡率（cancer-specific mortality,CSM）和无复发生存期（recurrence-free survival,RFS）;以风险比（hazard ratio,HR）为效应量,各效应量以95%可信区间（confidence interval,CI）表示,采用STATA 12.0统计软件进行Meta分析。结果：最终纳入8项队列研究,共942 055例患者。Meta分析结果显示,观察组（使用二甲双胍进行降糖的2型糖尿病患者）与对照组[使用其他降糖药物（包括磺脲类、噻唑烷二酮类、胰岛素或者其他药物联合）进行降糖的2型糖尿病患者]相比,采用二甲双胍治疗可使2型糖尿病患者的膀胱癌发病风险降低24%（HR=0.76,95%CI：0.59～0.98,P=0.032）、膀胱癌CSM风险降低22%（HR=0.78,95%CI：0.61～1.00,P=0.049）,但不增加2型糖尿病患者膀胱癌的RFS风险（HR=0.70,95%CI：0.44～1.10,P=0.120）。结论：二甲双胍治疗可降低2型糖尿病患者罹患膀胱癌的风险以及膀胱癌CSM。

关键词：膀胱肿瘤二甲双胍 2型糖尿病 Meta分析