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人KIR2DL1-Ig融合蛋白在COS-7细胞的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 245-247页

作者：颜卫华范丽安上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的 :获得人KIR2DL1分子 (killerIg likereceptor 2DL1)胞外区与人IgGFc段的融合蛋白。方法 :从人外周血单个核细胞中提取总RNA ,通过RT PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中... 详细信息

目的 :获得人KIR2DL1分子 (killerIg likereceptor 2DL1)胞外区与人IgGFc段的融合蛋白。方法 :从人外周血单个核细胞中提取总RNA ,通过RT PCR扩增编码KIR2DL1胞外段cDNA ,经NheⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,定向插入真核细胞表达载体CD5lnegl中。构建的重组真核表达载体CD5lnegl KIR2DL1。经酶切分析和测序鉴定后 ,通过DEAE dextran/chloroquine法转染COS 7细胞。瞬时表达后 ,取培养上清液经亲和层析、ELISA、SDS PAGE及Western印迹 ,鉴定融合蛋白的表达及其免疫学活性。结果 :序列测定证实 ,该重组表达载体含有正确的KIR2DL1胞外区基因序列。重组真核表达载体CD5lnegl KIR2DL1转染COS 7细胞后 ,ELISA法检测细胞培养上清中有融合蛋白的表达。SDS PAGE结果显示 ,该融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 730 0 0。Western印迹结果证实 ,该蛋白能被特异性单克隆抗体 (mAb)EB6所识别。结论 :KIR2DL1 Ig融合蛋白表达载体成功构建并在COS 7细胞中获得功能性表达。

关键词： KIR2DL1 融合蛋白基因表达

KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第8期23卷 579-583页

作者：颜卫华范丽安上海市免疫学研究所上海200025

目的　克隆KIR2DL4cDNA ,并使其在NK 92细胞上获得稳定表达 ,分析KIR2DL4分子对NK 92细胞功能的调节作用。方法　采用RT PCR方法 ,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4cDNA ,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4 pLNCX表... 详细信息

目的　克隆KIR2DL4cDNA ,并使其在NK 92细胞上获得稳定表达 ,分析KIR2DL4分子对NK 92细胞功能的调节作用。方法　采用RT PCR方法 ,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4cDNA ,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4 pLNCX表达载体 ,将重组质粒转入NK 92细胞 ,利用单克隆抗体 # 33进行FACS检测 ,观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达。ELISA检测KIR2DL4对IFN γ分泌的影响 ,同时根据LDH的释放实验 ,分析KIR2DL4分子对NK 92细胞毒功能的调节。结果　KIR2DL4分子在经KIR2DL4 pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达 ,且不影响其他受体在NK 92细胞上的表达水平。KIR2DL4分子能够部分限制NK 92细胞对HLA G阳性靶细胞的杀伤作用 ,交联KIR2DL4分子能够诱导IFN γ的分泌。结论　成功构建了KIR2DL4 pLNCX逆转录病毒表达载体 ,并使KIR2DL4分子在NK 92细胞上获得功能性的高表达。

关键词： NK-92细胞自然杀伤细胞 KIR2DL4 免疫调节

Tapasin对HLA-E细胞表面表达的影响

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中国免疫学杂志 2002年第2期18卷 82-84页

作者：赵亮范丽安上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的 :探索伴侣分子Tapasin对HLA E分子细胞表面表达的影响。方法 :体外构建HLA EcDNA的逆转录病毒表达载体 ,并通过感染的方法将其转入Tapasin阴性的T2细胞系 ,利用流式细胞术检测HLA E分子在靶细胞表面的表达情况。结果 :外源HLA E基... 详细信息

目的 :探索伴侣分子Tapasin对HLA E分子细胞表面表达的影响。方法 :体外构建HLA EcDNA的逆转录病毒表达载体 ,并通过感染的方法将其转入Tapasin阴性的T2细胞系 ,利用流式细胞术检测HLA E分子在靶细胞表面的表达情况。结果 :外源HLA E基因在Tapasin阴性的T2细胞表面获得表达 (74 13% ) ,而对照细胞及经空载体转染的T2细胞表面未检测到HLA E分子的表达。结论 :HLA E分子的细胞表面表达也存在TAP非依赖的方式。

关键词： HLA-E Tapasin T2细胞抗原肽相关转运蛋白细胞表面表达

HLA-C基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及表达

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中国免疫学杂志 2002年第11期18卷 772-775页

作者：李卫党范丽安上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

目的 :构建人白细胞抗原 (HLA C)基因真核细胞表达载体 ,在JAR细胞表面表达 ,并对其功能进行探讨。方法 :用RT PCR从人外周血淋巴细胞的总mRNA中逆转录扩增HLA C的cDNA ,克隆到PBluescriptSK + -噬菌粒中 ;测序鉴定后 ,定向亚克隆到真... 详细信息

目的 :构建人白细胞抗原 (HLA C)基因真核细胞表达载体 ,在JAR细胞表面表达 ,并对其功能进行探讨。方法 :用RT PCR从人外周血淋巴细胞的总mRNA中逆转录扩增HLA C的cDNA ,克隆到PBluescriptSK + -噬菌粒中 ;测序鉴定后 ,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中。经脂质体转染JAR细胞 ,G4 18筛选阳性克隆 ,FACS检测HLA C分子的表达。转染HLA C分子的JAR细胞再与分离的NK细胞进行细胞毒试验。结果 :限制性内切酶酶切和序列分析表明 ,克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中的HLA C等位基因是HLA Cw 0 6 0 2 ,该分子在JAR细胞株获得高效表达。直接分离的PBL细胞对JAR细胞以及表达HLA C分子的JAR细胞无细胞毒作用 ;而IL 2活化的NK细胞对这些细胞都有细胞毒作用。结论 :HLA C基因的成功表达为研究HLA C分子与NK细胞受体 (KIR)之间的关系奠定了基础 ,NK细胞对JAR细胞的杀伤可能存在不依赖HLA C分子的机制。

关键词： HLA-C基因真核细胞 RT-PCR 基因克隆基因表达载体构建鉴定

人类白细胞抗原-DRB1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症的相关性研究

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中华妇产科杂志 2002年第9期37卷 519-522页

作者：陈富强范丽安许玲娣姚芳娟江苏省无锡市锡山人民医院妇产科上海第二医科大学上海市免疫研究所

目的　探讨人类白细胞抗原 (HLA) DRB1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP)的关系。方法　采用聚合酶链反应序列寡核苷酸 (PCR SSO)探针杂交法对 42例ICP患者 (ICP组 )和 5 6例正常孕妇 (对照组 )进行HLA DRB1等位基因分型 ,比较... 详细信息

目的　探讨人类白细胞抗原 (HLA) DRB1基因多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP)的关系。方法　采用聚合酶链反应序列寡核苷酸 (PCR SSO)探针杂交法对 42例ICP患者 (ICP组 )和 5 6例正常孕妇 (对照组 )进行HLA DRB1等位基因分型 ,比较其基因频率及其与临床表型之间的关系。同时对ICP组孕妇的肝功能及甘胆酸盐水平进行检测。结果　两组孕妇中 ,HLA DR9、DR12、DR4基因频率均较高。ICP组孕妇中共检出 14例HLA DR6等位基因 ,对照组仅检出 4例HLA DR6等位基因。ICP组中HLA DR6等位基因频率为 16 7% ,对照组为 3 6% ,两组比较 ,差异有极显著性 (P0 0 5 )。未发现ICP组孕妇HLA DR6基因与肝功能及甘胆酸盐水平有相关关系。结论　ICP患者HLA DR6基因可能是ICP发病的易感基因之一。

关键词：妊娠并发症肝内胆汁郁积疾病遗传易感性 HLA-DR抗原等位基因多态现象

HLA-A和B基因真核细胞表达载体的克隆及序列分析

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免疫学杂志 2002年第1期18卷 17-19页

作者：李卫党范丽安上海市免疫学研究所免疫遗传学室上海200025

目的　构建人白细胞抗原 (HLA) A、B基因真核细胞表达载体。方法　用RT PCR从人外周血淋巴细胞的总mRNA中逆转录扩增HLA A、B的cDNA ,克隆到PBluescriptSK +/-噬菌粒中 ,限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因 ;再经HindⅢ和BamHⅠ双... 详细信息

目的　构建人白细胞抗原 (HLA) A、B基因真核细胞表达载体。方法　用RT PCR从人外周血淋巴细胞的总mRNA中逆转录扩增HLA A、B的cDNA ,克隆到PBluescriptSK +/-噬菌粒中 ,限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因 ;再经HindⅢ和BamHⅠ双酶切后定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中。结果　限制性内切酶酶切和序列分析表明 ,克隆的A、B等位基因分别是HLA A 30 0 1和HLA B 2 70 5 2 ,并正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中。结论　本研究为真核细胞表达HLA A、B分子以及研究它们与NK细胞受体 (KIR)

关键词： HLA RT-PCR 基因克隆序列分析真核细胞

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人类血清可溶性HLA抗原的研究进展

免疫学杂志 1995年第3期11卷 198-202页

作者：谢宗法范丽安上海市免疫学研究所免疫遗传室

人类血清可溶性ＨＬＡ抗原的研究进展谢宗法，范丽安人类主要组织相容性复合物（ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙＣｏｍｐｌｅｘ，ＭＨＣ）基因产物主要由三类抗原组成，ＨＬＡＩ类抗原（Ｎ１ｔＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）和Ⅱ类... 详细信息

人类血清可溶性ＨＬＡ抗原的研究进展谢宗法，范丽安人类主要组织相容性复合物（ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙＣｏｍｐｌｅｘ，ＭＨＣ）基因产物主要由三类抗原组成，ＨＬＡＩ类抗原（Ｎ１ｔＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）和Ⅱ类抗原（ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＱ，ＤＰ）以...

关键词：人类白细胞分子生物学自身免疫性疾病

用竞争结合法检测HLAⅠ类分子抗原呈递能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第12期23卷 982-984页

作者：蒋黎华史桂英石学耕范丽安上海第二医科大学上海市免疫学研究所200025 上海第二医科大学细胞生物学教研室

目的　建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHCⅠ类分子抗原呈递能力的方法 ,并评估其实用性。方法　pH2 .7～ 3.1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后 ,即用IMDM培养液中和pH ,然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的 9肽及... 详细信息

目的　建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHCⅠ类分子抗原呈递能力的方法 ,并评估其实用性。方法　pH2 .7～ 3.1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后 ,即用IMDM培养液中和pH ,然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的 9肽及竞争肽共同孵育 ,FACs检测细胞表面的平均荧光强度 ,以达到 5 0 %抑制所需的竞争肽浓度作为衡量竞争肽与MHC分子结合能力的指标。结果　通过不同pH的柠檬酸缓冲液处理、处理后不同时间加 β2微球蛋白和 /或荧光素标记肽、加入不同稀释度的竞争肽等角度 ,对方法进行评估 ,结果显示本方法操作简便、结果可靠、非特异性吸附小。结论　在排除其它MHCⅠ类分子的干扰后 ,本方法适合在国情条件下广泛开展MHCⅠ类分子抗原呈递能力及T细胞肽表位筛选等研究。

关键词：竞争结合法检测 HLAⅠ类分子抗原呈递能力

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HLA-G与移植免疫

免疫学杂志 2004年第Z1期20卷 1-3,7页

作者：颜卫华范丽安上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海200025

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-Ⅰb)HLA-G参与抗原递呈,通过相应受体调节NK细胞及T淋巴细胞功能,是一个重要的免疫调节分子。HLA-G分子的免疫调节作用已从母胎免疫耐受扩展到肿瘤免疫、抗感染免疫和器官移植免疫等领域, 近年来在移植免疫方... 详细信息

非经典HLA Ⅰ类分子(HLA-Ⅰb)HLA-G参与抗原递呈,通过相应受体调节NK细胞及T淋巴细胞功能,是一个重要的免疫调节分子。HLA-G分子的免疫调节作用已从母胎免疫耐受扩展到肿瘤免疫、抗感染免疫和器官移植免疫等领域, 近年来在移植免疫方面取得了重要进展。

关键词： HLA-G NK细胞 T淋巴细胞