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采用合成生物学技术在青蒿中重建圆柚酮生物合成的研究

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采用合成生物学技术在青蒿中重建圆柚酮生物合成的研究

作者：苟玉琴西南大学

学位级别：硕士

圆柚酮是一种高价值的倍半萜烯,有着独特的愉悦气味,在食品和化妆品行业极受欢迎。圆柚酮主要生产原料是葡萄柚果皮,但其含量极低,导致其产量低而无法满足广阔的市场需求。虽然化学全合成圆柚酮在科学上取得成功,但由于该方法采用致癌... 详细信息

圆柚酮是一种高价值的倍半萜烯,有着独特的愉悦气味,在食品和化妆品行业极受欢迎。圆柚酮主要生产原料是葡萄柚果皮,但其含量极低,导致其产量低而无法满足广阔的市场需求。虽然化学全合成圆柚酮在科学上取得成功,但由于该方法采用致癌物、重金属、易燃物和强氧化物等,导致生产的圆柚酮成本高且不被市场认可。因此,采用合成生物学技术可能会成为生产圆柚酮的一种更为有效的方法。圆柚酮生物合成前体和其它倍半萜烯一样,都为法尼烯焦磷酸(farnesyl diphosphate,FPP),在植物中普遍存在。从FPP到圆柚酮共涉及到两个酶促反应:首先瓦伦西合成酶(valencene synthase,VS)催化FPP环化为瓦伦烯,随后瓦伦西氧化酶(valencene oxidase,VO)催化瓦伦烯转化为圆柚酮。圆柚酮生物合成基因的鉴定,为采用合成生物学技术生产圆柚酮提供了必不可少的元件。目前,在毕赤酵母中重建圆柚酮合成途径已经取得成功。同理,采用合成生物学技术在植物中重建圆柚酮生物合成途径也应当可行。药用植物青蒿含有丰富的倍半萜类化合物,如青蒿素(artemisinin)、法尼烯和石竹烯等以及这些倍半萜的前体物质FPP。青蒿中富含FPP使得其可以作为生产圆柚酮的理想底盘植物;培育产圆柚酮的青蒿还有助于提高青蒿的综合经济价值。本研究设计了两种合成生物学方案在青蒿中重建圆柚酮生物合成途径:方案一是通过将VS和VO引入青蒿胞质而重建圆柚酮生物合成途径;方案二是通过质体转运肽将法尼烯合成酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)、VS和VO引入青蒿质体中而重建圆柚酮生物合成途径。通过相关研究,取得了以下结果:1.植物表达载体的构建通过引入pBI121中的35S启动子和植物表达载体p EG104中的OCS终止子,在植物双元表达载体p1305.1中构建新的表达框,引入35S启动子所用的限制性内切酶是Hind III和Pst1,引入OCS终止子所用限制性内切酶为Bam H1和Eco R1,并将改造的载体命名为p ZZG100,该载体可用于插入相关生物合成基因。结合已经报道的阿拉斯加黄柏心材中VO编码区基因序列(Gen Bank Accession:JX518290.1)和VS编码区基因序列(Gen Bank Accession:JX040471.1),通过PCR扩增获得VO和VS的编码区基因序列。在胞质中共表达VO和VS植物表达载体的构建。在植物双元表达载体pZZG100中35S启动子和OCS终止子之间的表达框引入VS基因片段,所用限制性内切酶为Sal1和Bam H1,并将其命名为p ZZG100-VS;在重组质粒载体p ZZG100-VS中35S启动子和NOS终止子之间的表达框引入VO基因片段,所用限制性内切酶为Sac1和Kpn1,并将其命名为p ZZG100-VS+VO,该重组植物表达载体用于在青蒿胞质中重建圆柚酮的合成途径。通过质体转运肽(transit peptide,TP)的协助,在质体中共表达FPS、VO和VS植物表达载体的构建。在植物表达载体p ZZG100-VS+VO中的VO基因片段处同源重组TP基因片段,所用限制性内切酶为Sac1,将其命名为p ZZG100-VS+tp VO;在重组载体质粒p ZZG100-VS+tp VO中的VS基因片段处同源重组tp FPS融合基因片段,所用限制性内切酶为Sal1,并将其命名为p ZZG100-tp FPSVS+tp VO,该重组植物表达载体用于在青蒿质体中重建圆柚酮的合成途径。2.转基因青蒿的获得和分子检测通过植物表达载体pZZG100-VS+VO将VS和VO引入青蒿胞质而重建圆柚酮生物合成途径的转基因青蒿的获得和分子检测:在农杆菌EHA105的介导下,采取叶盘侵染的方法获得转基因青蒿。获得抗性筛选阳性转基因青蒿后,提取青蒿DNA,通过PCR扩增检测目的基因VO、VS和潮霉素抗性基因(hygromycin resistance gene,Hygr),在转基因青蒿C1、C2、C3、C8、C13共5个株系中同时检测到VO、VS和Hygr;获得转基因青蒿后,提取转基因青蒿和同期野生型青蒿的RNA,反转为c DNA后,采取q PCR的技术对转基因青蒿中目的基因表达量进行分析,转基因青蒿C1、C2、C3、C8、C13中目的基因VO和VS都有表达,同期野生型青蒿中未检测到VO和VS的表达。通过植物表达载体pZZG100-tp FPSVS+tp VO将FPS、VO和VS引入青蒿质体中而重建圆柚酮生物合成途径的转基因青蒿的获得和分子检测:获得抗性筛选阳性转基因青蒿后,检测转基因青蒿中的目的基因tp FPS、VO、VS和Hygr,在转基因青蒿P5、P6、P9、P10、P11共5个株系中同时检测到tp FPS、VO、VS和Hygr;获得转基因青蒿后,采取q PCR技术对转基因青蒿中目的基因表达量进

关键词：圆柚酮合成生物学青蒿质体细胞质

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乡村振兴背景下农村电商及其物流发展研究

物流工程与管理 2022年第11期44卷 62-64页

作者：苟玉琴西安建筑科技大学公共管理学院陕西西安710300

近年来,随着互联网技术的广泛应用,电商行业发展迅速,尤其是农村地区电商的发展,拓宽了我国农村经济的发展道路。在乡村振兴战略背景下,农村地区将得到更多的政策扶持以及更大的资金支持,而如何利用这种优势来实现乡村振兴,电商行业的... 详细信息

近年来,随着互联网技术的广泛应用,电商行业发展迅速,尤其是农村地区电商的发展,拓宽了我国农村经济的发展道路。在乡村振兴战略背景下,农村地区将得到更多的政策扶持以及更大的资金支持,而如何利用这种优势来实现乡村振兴,电商行业的发展是一条至关重要的途径。目前,农村地区的电商发展初具雏形,但还面临着不少困难,例如农村地区基础设施建设落后、物流技术水平低、缺乏专业人才、农产品品牌效应低等,这导致农村电商发展缓慢,阻碍了农村经济的发展。文中立足乡村振兴战略,分析我国农村地区电商发展的困境并结合实际情况提出一些可行性建议,以期促进农村经济的可持续发展。

关键词：乡村振兴农村电商物流发展

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新时期下幼儿园实施家园共育的有效策略

科幻画报 2023年第2期 67-68页

作者：苟琴玉甘肃省定西市临洮县教育局

随着时代的不断发展，人们生活水平的提高，对教育教学也提出了更高的要求。当前的幼儿教育越来越被予以重视，经过相关调查研究表明，幼儿教育和家庭教育都是学前儿童教育中缺一不可的部分，其在学前儿童发展和成长的过程中，各自都有... 详细信息

随着时代的不断发展，人们生活水平的提高，对教育教学也提出了更高的要求。当前的幼儿教育越来越被予以重视，经过相关调查研究表明，幼儿教育和家庭教育都是学前儿童教育中缺一不可的部分，其在学前儿童发展和成长的过程中，各自都有不可忽视的影响。只有将幼儿园教育和家庭教育合二为一，才能最大化发挥出二者教育的优势，才能保证幼儿得到更好的成长和发展。

关键词：幼儿园家园共育有效策略

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现代服务业空间无限潜力巨大 003

兰州日报

作者：蒋凌苟玉琴

工行授信100亿元　　支持我市现代服务业发展　　【本报讯】工商银行甘肃省分行授信１００亿元用于支持兰州市“十二五”期间现代服务产业的发展。７月７日，作为第十七届兰洽会的重要活动之一，兰州市现代服务业推介会暨银政战略合...

工行授信100亿元　　支持我市现代服务业发展　　【本报讯】工商银行甘肃省分行授信１００亿元用于支持兰州市“十二五”期间现代服务产业的发展。７月７日，作为第十七届兰洽会的重要活动之一，兰州市现代服务业推介会暨银政战略合作协议签字仪式隆重举行。市委?

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我市拟建四大出口基地 002

兰州日报

作者：蒋凌苟玉琴

【本报讯】7月14日，全市商务系统召开会议认真学习了胡锦涛总书记在庆祝中国共产党成立90周年大会上的重要讲话。与会人员表示，要用实际行动和工作成绩来贯彻“讲话”精神，力争年内启动兰州国际物流产业园、兰州农副产品物流中心、...

【本报讯】7月14日，全市商务系统召开会议认真学习了胡锦涛总书记在庆祝中国共产党成立90周年大会上的重要讲话。与会人员表示，要用实际行动和工作成绩来贯彻“讲话”精神，力争年内启动兰州国际物流产业园、兰州农副产品物流中心、兰州粮油物流中心、甘肃新华图书物流园4个?

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我市年内有望新建200个社区再生资源回收站点 003

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兰州日报

作者：蒋凌苟玉琴

【本报讯】年底前，我市有望新建２００个社区再生资源回收站点。７月１８日，市商务局召开全市商务工作上半年小结分析会，总结了上半年商务工作，分析存在的问题，安排部署了下半年的工作。　　据介绍，上半年，全市实现社会消费品...

【本报讯】年底前，我市有望新建２００个社区再生资源回收站点。７月１８日，市商务局召开全市商务工作上半年小结分析会，总结了上半年商务工作，分析存在的问题，安排部署了下半年的工作。　　据介绍，上半年，全市实现社会消费品零售总额３００.９８亿元，同比增长?

关键词：

光照和渗透胁迫对枸杞离体叶片花青苷积累的影响

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西北林学院学报 2022年第4期37卷 73-78页

作者：郭铁城曾海涛徐皓唐琪赵冠杰崔卓越苟玉琴陕西理工大学生物科学与工程学院/秦巴山区生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育)/陕南秦巴山区生物资源综合开发协同创新中心陕西汉中723000

为研究不同光照和渗透胁迫条件对枸杞离体叶片花青苷积累的影响,该研究使用萌发后25 d的‘宁杞7号’红枸杞和黑果枸杞无菌苗离体叶片进行不同光照(白光、红光、蓝光、远红光)和渗透胁迫(蔗糖浓度梯度)处理7 d,然后测定枸杞离体叶片中花... 详细信息

为研究不同光照和渗透胁迫条件对枸杞离体叶片花青苷积累的影响,该研究使用萌发后25 d的‘宁杞7号’红枸杞和黑果枸杞无菌苗离体叶片进行不同光照(白光、红光、蓝光、远红光)和渗透胁迫(蔗糖浓度梯度)处理7 d,然后测定枸杞离体叶片中花青苷含量。结果表明:1)枸杞离体叶片中花青苷积累受培养基中不同浓度蔗糖影响差异显著,花青苷积累随培养基中蔗糖浓度的升高先升高再降低,在白光(15000 lx)下蔗糖浓度500 mmol/L时,‘宁杞7号’红枸杞和黑果枸杞离体叶片花青苷的积累均达到最大值;2)相同浓度蔗糖的渗透胁迫下,不同波长单色光对枸杞离体叶片中花青苷积累的影响差异显著:蓝光(450 nm)下,黑果枸杞离体叶片中花青苷的积累显著高于‘宁杞7号’红枸杞,黑果枸杞离体叶片中花青苷积累量最高值超过相同渗透胁迫白光处理时花青苷积累量的3倍;红光(650 nm)和远红光(730 nm)下,‘宁杞7号’红枸杞离体叶片中花青苷的积累显著高于黑果枸杞,且远红光下2种枸杞离体叶片花青苷积累差异更显著,但绝对值较低。结果表明,蔗糖浓度400~500 mmol/L的渗透胁迫条件下可适于诱导枸杞离体叶片中花青苷积累,短波长的蓝光较适合黑果枸杞离体叶片中花青苷诱导,而长波长的红光更适合红枸杞离体叶片中花青苷诱导。该研究结果为后续以枸杞离体叶片或悬浮细胞作为生物反应器低成本大规模生产花青苷提供了重要依据。

关键词：枸杞花青苷离体叶片单色光蔗糖

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急诊科护士安宁疗护培训内容的构建

中华护理教育 2023年第11期20卷 1298-1304页

作者：余琴苟玉琦李沛窈刘梦婕西南医科大学护理学院泸州市646000 成都市中西医结合医院·成都市第一人民医院护理部成都市610041

目的构建急诊科护士安宁疗护培训内容,为国内急诊科护士的安宁疗护培训提供参考。方法在文献研究、问卷调查、课题组讨论的基础上拟定培训内容,采用德尔菲法邀请6个省份的17名相关领域专家进行3轮函询,最终构建了急诊科护士安宁疗护培... 详细信息

目的构建急诊科护士安宁疗护培训内容,为国内急诊科护士的安宁疗护培训提供参考。方法在文献研究、问卷调查、课题组讨论的基础上拟定培训内容,采用德尔菲法邀请6个省份的17名相关领域专家进行3轮函询,最终构建了急诊科护士安宁疗护培训内容。结果3轮咨询问卷的有效回收率均为100%,专家权威系数分别为0.91、0.92、0.92,3轮咨询后各级条目的协调系数为0.224~0.258(P<0.001)。最终确定的急诊科护士安宁疗护培训内容包括急诊科安宁疗护总论、身体护理、心理-社会-精神护理、急诊科安宁疗护转诊、终末期护理、急诊护士的自我关怀与提升6个一级条目、18个二级条目、53个三级条目。结论急诊科护士安宁疗护培训内容具有先进性和实用性,构建科学合理,可将急诊科护士安宁疗护培训内容纳入到急诊科护士在职培训体系中,以弥补当前培训的不足。

关键词：急诊室,医院护士临终关怀医疗在职培训德尔菲技术

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6个项目签约总投资额13.4亿元 001

兰州日报

作者：蒋凌苟玉琴罗小红

【本报讯】７月８日，兰州市多元支柱产业高峰论坛暨项目推介会——冶金有色产业专场推介会受到兰洽会来宾的关注。来自全省各地的企业代表、专家学者及政府部门工作人员汇聚一堂，就我市冶金有色产业发展的战略定位、发展模式等问题进...

【本报讯】７月８日，兰州市多元支柱产业高峰论坛暨项目推介会——冶金有色产业专场推介会受到兰洽会来宾的关注。来自全省各地的企业代表、专家学者及政府部门工作人员汇聚一堂，就我市冶金有色产业发展的战略定位、发展模式等问题进行了深入探讨。　　市人大常委会副?

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