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稳定敲低人脐带间充质干细胞EPCR基因对其向成纤维细胞分化能力的影响

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重庆医科大学学报 2020年第2期45卷 193-199页

作者：苟好彭单伊刘姜吴羡邹琳符州重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所、儿童发育疾病研究教育部重点实验室、儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地、重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆400014

目的:构建稳定敲低人内皮细胞蛋白C受体(endothelial cell protein C receptor,EPCR)的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs),检测敲低EPCR对hUC-MSCs向成纤维细胞分化能力的影响。方法:根据EPCR基因m RNA序列,合成3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)导入hUC-MSCs,通过检测EPCR蛋白表达筛选干扰效果最佳的siRNA。根据最佳siRNA序列构建慢病毒载体,包装重组慢病毒,感染hUC-MSCs,Real-time PCR和Western blot验证敲低效率。体外构建转化生长因子-β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)诱导hUC-MSCs向成纤维细胞分化模型,Real-time PCR和Western blot检测诱导前后α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)表达水平,以反映诱导效果。结果:以EPCR最佳siRNA序列构建EPCR基因RNAi慢病毒载体,成功敲低hUC-MSCs内EPCR的mRNA(t=28.86,P=0.000)和蛋白(t=88.60,P=0.000)表达水平。EPCR敲低后,hUC-MSCs合成的COL1A1和COL1A2在m RNA(P=0.044,P=0.000)和蛋白(P=0.000,P=0.000)水平减少。体外TGF-β1诱导可增加hUC-MSCs内α-SMA(F=369.713,P=0.000;F=451.060,P=0.000)、COL1A1(F=42.051,P=0.000;F=759.041,P=0.000)及COL1A2(F=359.205,P=0.000;F=764.348,P=0.000)在mRNA和蛋白水平的表达,促进其向成纤维细胞分化。但敲低EPCR,α-SMA(P=0.002,P=0.002)、COL1A1(P=0.002,P=0.000)及COL1A2(P=0.000,P=0.000)在mRNA和蛋白的升高水平明显降低。结论:成功获得EPCR稳定敲低的hUC-MSCs,证实敲低EPCR可减少hUC-MSCs内ColⅠ表达,并减弱其向成纤维细胞分化的能力。

关键词：慢病毒载体内皮细胞蛋白C受体人脐带间充质干细胞成纤维细胞

匹多莫德辅助治疗传染性单核细胞增多症的Meta分析

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四川医学 2022年第9期43卷 917-923页

作者：苟好汪雅孙香娟成都中医药大学附属医院儿科四川成都610075

目的系统评价匹多莫德辅助治疗传染性单核细胞增多症(IM)的有效性。方法于PubMed、EMbase、The Cochrane Library、VIP、CNKI、Wanfang Data数据库中检索匹多莫德辅助治疗IM的随机对照试验,两名研究者独立检索筛选数据库中文献时限至202... 详细信息

目的系统评价匹多莫德辅助治疗传染性单核细胞增多症(IM)的有效性。方法于PubMed、EMbase、The Cochrane Library、VIP、CNKI、Wanfang Data数据库中检索匹多莫德辅助治疗IM的随机对照试验,两名研究者独立检索筛选数据库中文献时限至2022年2月,纳入研究的文献使用RevMan5.3进行Meta分析。结果与对照组相比,常规疗法基础上,加用匹多莫德能提高治疗IM的总有效率(OR 5.95,95%CI 3.71~9.55),缩短IM患儿退热时间(MD=-2.01,95%CI-2.28~-1.73),改善咽峡炎(MD=-1.42,95%CI-1.67~-1.18),促使肝脾(MD=-2.21,95%CI-2.74~-1.68)及淋巴结(MD=-2.42,95%CI-2.81~-2.04)由肿大至恢复正常,减少CD_(8)^(+)T细胞(MD=-6.37,95%CI-8.11~-4.62),增加CD_(4)^(+)T细胞(MD=5.35,95%CI 4.48~6.22)及CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)值(MD=0.38,95%CI 0.30~0.47)。结论匹多莫德辅助治疗IM有良好的临床疗效,以上结论仍需更多大规模、高质量研究加以验证。

关键词：匹多莫德传染性单核细胞增多症 Meta分析

成都市某小学生心肺复苏知识认知现状及影响因素研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2023年第6期 1-5页

作者：周艳潘玲丽苟好胡娟李熙鸿四川大学华西第二医院急诊科四川成都610041 四川大学出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川成都610041 成都中医药大学附属医院儿科四川成都610075

了解成都市小学生对心肺复苏知识的认知和掌握情况,为进一步在学校普及急救知识和急救技能提供参考。方法随机抽取成都市某小学五~六年级4个班共169名学生,开展心肺复苏培训,自行设计调查问卷对其心肺复苏知识掌握情况进行调查。结果 ... 详细信息

了解成都市小学生对心肺复苏知识的认知和掌握情况,为进一步在学校普及急救知识和急救技能提供参考。方法随机抽取成都市某小学五~六年级4个班共169名学生,开展心肺复苏培训,自行设计调查问卷对其心肺复苏知识掌握情况进行调查。结果 61.35%的研究对象从未接受过心肺复苏相关培训,经培训后,总体回答正确率为78.45%。性别、年龄、既往是否接受过心肺复苏培训对得分无影响。对心肺复苏兴趣大、自我评价培训收获大的研究对象得分较高。结论成都市小学生对心肺复苏知识的认知和掌握率较低,培养小学生对心肺复苏的兴趣,关注小学生对心肺复苏培训效果的体验及心肺复苏培训后技能保可能有助于提高培训效果。

关键词：心肺复苏小学生急救技能

Ⅱ型肺泡上皮细胞Brg1基因条件敲低小鼠的基因型鉴定

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中国细胞生物学学报 2017年第3期39卷 280-287页

作者：司道祝彭单伊张荣夏耘秋牛超苟好刘姜王莉佳田代印刘恩梅邹琳符州重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 第四军医大学附属第一医院西京医院西安710000 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆400014

该文旨在鉴定特异敲低Ⅱ型肺泡上皮细胞中Brg1(Brahma-related gene 1)基因小鼠的基因型,为进一步研究Brg1在肺相关疾病中的作用奠定基础。将两对转基因小鼠Brg1fl/fl和SP-C-rt TA/(tet O)7-Cre进行繁殖交配,将得到纯合子、杂合子及野生... 详细信息

该文旨在鉴定特异敲低Ⅱ型肺泡上皮细胞中Brg1(Brahma-related gene 1)基因小鼠的基因型,为进一步研究Brg1在肺相关疾病中的作用奠定基础。将两对转基因小鼠Brg1fl/fl和SP-C-rt TA/(tet O)7-Cre进行繁殖交配,将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型。出生后1周龄剪尾提取基因组DNA,PCR法判定基因型。用多西环素诱导法诱导(tet O)7-Cre重组酶活性,靶向剪切Ⅱ型肺泡上皮细胞上Brg1基因,磁珠分选法提取小鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,通过观察细胞生长特征、检测pro SP-C表达鉴定原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,RT-PCR法、Western blot检测Brg1表达水平。结果显示,成功繁殖了Brg1纯合子小鼠,通过磁珠分选法成功分离了原代Ⅱ型肺泡上皮细胞,用多西环素诱导法成功敲低了Ⅱ型肺泡上皮细胞Brg1基因。该结果为相关研究提供动物模型奠定了基础。

关键词： Brg1 Ⅱ型肺泡上皮细胞基因敲低基因型

体外诱导人脐带间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

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中国细胞生物学学报 2018年第3期40卷 365-372页

作者：刘姜彭单伊苟好吴羡司道祝牛超田代印刘恩梅邹琳符州重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心重庆400014

该研究旨在通过条件培养基诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)向II型肺泡上皮细胞(type II alveolar epithelial cells,AEC2s)分化,为后续研究h UC-MSCs来源的AEC2s在肺部疾病中的治疗作用奠定基础。h UC-MSCs分为实验组和对照组,实验组用小气道上皮细胞生长基础培养基培养2天后添加生长因子诱导培养,对照组用20%血清的DMEM/F12培养。第14天观察细胞形态;Western blot、免疫荧光、流式细胞术和ELISA法检测肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)及前肺泡表面活性蛋白C(pro-surfactant protein C,pro SP-C)。利用透射电镜观察板层小体。结果显示,实验组细胞形态由长梭形向多边形转变,细胞内有pro SP-C表达,培养基上清中有SP-C分泌,透射电镜观察到板层小体;而对照组细胞形态无明显改变,未检测到pro SP-C表达、SP-C分泌和板层小体形成。该研究结果表明,体外诱导培养可促进h UC-MSCs向AEC2s分化,通过该方法有望大量获得h UC-MSCs来源的AEC2s用于肺部疾病治疗研究。

关键词：人脐带间充质干细胞 Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

人脐带间充质干细胞联合吡非尼酮治疗小鼠肺纤维化

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中国细胞生物学学报 2018年第10期40卷 1677-1684页

作者：吴羡彭单伊苟好刘姜邹文静周欧丁凤霞田代印符州邹琳重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心重庆400014

该文旨在研究人脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)联合吡非尼酮(pirfenidone, PFD)对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用及可能机制。C57BL/6小鼠分为正常对照组、MSCs对照组、模型组、30 m... 详细信息

该文旨在研究人脐带间充质干细胞(umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)联合吡非尼酮(pirfenidone, PFD)对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的治疗作用及可能机制。C57BL/6小鼠分为正常对照组、MSCs对照组、模型组、30 mg/kg PFD组(P30)、100 mg/kg PFD组、300 mg/kg PFD组、MSCs治疗组及MSCs联合P30组。气管滴注博来霉素后第7天尾静脉注射5×105 hUC-MSCs,第7天起每日予PFD灌胃。造模后第21天收集肺组织, HE、Masson染色分别评估肺部形态变化及胶原沉积情况; Sircol法测胶原含量; PCR和Western blot检测纤维化标志物水平。超滤收集hUC-MSCs条件培养基(conditioned medium, CM),联合PFD体外培养肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB), CCK-8与Brdu实验检测MFB生长及增殖。结果显示,与模型组相比, MSCs联合P30组显著改善小鼠生存率及肺部病理,显著降低胶原及纤维化标志物水平(P<0.001),且疗效优于单用PFD和hUC-MSCs组(P<0.05)。PFD部分抑制MFB增殖,联合CM增强了PFD对MFB增殖的抑制(P<0.001)。研究表明, hUC-MSCs联合低剂量PFD可能通过抑制MYB的增殖减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。

关键词：人脐带间充质干细胞吡非尼酮特发性肺纤维化

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浅析如何提高小学生写作的积极性

中国科技经济新闻数据库教育 2016年第12期 209-209页

作者：苟好重庆师范大学重庆400700

小学作文教学是小学语文教学的重要组成部分,是形成发展学生语文能力的重要环节,也是语文教师长久研讨的重要课题。然而受多方因素影响,很多小学生对写作的兴趣不足。本文将从家庭、教师两方面就如何提高学生写作积极性进行讨论。

关键词：小学生写作积极性

当归多糖作为潜在佐剂对细胞的免疫激活及机制研究

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药学学报 2025年

作者：何沅聪尤朋涛黄雅宁张剑锋苟君波王建湖北中医药大学药学院湖北中医药大学中药资源与中药化学湖北省重点实验室宣城市食品药品检验中心湖北时珍实验室

为了探讨当归多糖 (Angelica sinensis polysaccharide， ASP) 作为潜在疫苗佐剂对巨噬细胞RAW264.7免疫激活作用及其释放细胞因子的影响，并阐明其潜在的信号通路作用机制。采用细胞计数试剂 (cell counting kit-8， CCK-8) 法检测细... 详细信息

为了探讨当归多糖 (Angelica sinensis polysaccharide， ASP) 作为潜在疫苗佐剂对巨噬细胞RAW264.7免疫激活作用及其释放细胞因子的影响，并阐明其潜在的信号通路作用机制。采用细胞计数试剂 (cell counting kit-8， CCK-8) 法检测细胞活力，流式细胞术检测5个浓度梯度的ASP对RAW264.7细胞表面分子白细胞分化抗原 (cluster of differentiation， CD) 80、CD86和主要组织相容性复合物Ⅱ (major histocompatibility complex II， MHC Ⅱ) 表达的影响， ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素-6 (interleukin-6， IL-6)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α， TNF-α) 等细胞因子的含量; quantitative polymerase chain reaction (qPCR) 检测Toll样受体4 (Toll-like receptor 4， TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88， MyD88)、TNF受体相关因子6 (TNF receptor associated factor 6， TRAF6)、核因子κB (nuclear factor kappa-B， NF-κB) 信号通路的mRNA表达水平， Western blot检测TRAF6、IκB激酶 (IκB kinase， IKK) 和p65蛋白磷酸化水平。结果显示，不同浓度的ASP对RAW264.7无细胞毒性。ASP均能浓度依赖性地促进RAW264.7细胞表面分子CD80、CD86和MHC Ⅱ的表达上调 (P < 0.05)。不同浓度的ASP组均使得IL-6和TNF-α等的分泌水平有显著的提升 (P < 0.05)，且在一定范围内存在量-效关系。qPCR结果显示，不同浓度的ASP均使得TLR4、MyD88、TRAF6和NF-κB的mRNA表达水平上调。不同浓度的ASP均能提高TRAF6、p-IKK和p-p65的表达水平。TLR4受体抑制剂TAK-242能显著降低ASP诱导的细胞因子分泌量 (P < 0.05)。本研究揭示了ASP可通过TLR4等信号通路显著增强了共刺激分子和细胞因子的表达，显示出作为疫苗佐剂的潜力。

关键词：当归多糖佐剂免疫活性 TLR4信号通路 RAW264.7细胞

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小学高年级群文阅读教学探索

文理导航(下旬) 2025年第1期 34-36页

作者：苟永琴甘肃省兰州市永登县柳树镇复兴小学

群文阅读教学是新课改下的一种新型阅读教学模式，它是将相似或相近的一些文章或文章片段组织到一起进行比较学习，从而提高阅读教学的效果。在具体的教学中要因材施教、因人施策、因文用法，灵活运用提炼、讲授、训练、兴趣、对比、巩... 详细信息

群文阅读教学是新课改下的一种新型阅读教学模式，它是将相似或相近的一些文章或文章片段组织到一起进行比较学习，从而提高阅读教学的效果。在具体的教学中要因材施教、因人施策、因文用法，灵活运用提炼、讲授、训练、兴趣、对比、巩固等教学方法，全面提升学生阅读的综合知识、能力和水平。

关键词：小学高年级群文阅读教学探索