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产气荚膜梭菌α-β-ε毒素融合蛋白的表达及其免疫原性分析

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产气荚膜梭菌α-β-ε毒素融合蛋白的表达及其免疫原性分析

作者：苗永强山东农业大学

学位级别：硕士

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏氏梭菌(***),呈杆状,革兰阳性菌,广泛存在于自然界中,是一种危害性较强的人畜共患病病原体,主要引起人和多种动物的食物中毒,创伤性坏疽或气性坏疽,分泌性、坏死性或者出血性肠炎,肠毒血症... 详细信息

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)又称魏氏梭菌(***),呈杆状,革兰阳性菌,广泛存在于自然界中,是一种危害性较强的人畜共患病病原体,主要引起人和多种动物的食物中毒,创伤性坏疽或气性坏疽,分泌性、坏死性或者出血性肠炎,肠毒血症,痢疾等。该病具有发病急、病程短、死亡率高的特点,经常会导致动物的急性死亡,对人类健康及养殖业具有较大的威胁。产气荚膜梭菌本身并无侵袭力,致病性主要由其分泌外毒素作用所致。根据4种主要毒素α(CPA)、β(CPB)、ε(Etx)、iota(Cpi)的产生情况将产气荚膜梭菌划分为A、B、C、D、E 5种毒素型。由于产气荚膜梭菌所致的疾病具有发病急、病程短的特点,往往不能及时发现,导致常规药物很难得到理想效果,疫苗是最主要的预防手段。当前广泛使用的疫苗主要为多联苗。这些疫苗主要成分为灭活菌体或者是类毒素或者是将其混合组成,其具有一些缺点如抗原成分复杂,有效抗原成分少,易引起免疫副反应,重组疫苗可能是一个解决方案。已有研究证明表达产气荚膜梭菌α毒素C末端CPA能够赋予小鼠高的保护率;具有H106P突变的ε毒素(rETX)的毒性显著降低,且依然具有相当的免疫原性,具有成为基因工程疫苗候选蛋白的潜力;本实验室前期研究证明,β毒素(CPB)具有多个抗原表位、毒性显著降低,而且诱导的保护水平与灭活β毒素类毒素疫苗无明显差异。鉴于以下三方面的原因:(1)α、β、ε毒素广泛存在于五种毒素型中;(2)产气荚膜梭菌往往是多种毒素联合致病;(3)重组多价毒素保护效力高于单价毒素。因此我们用基因工程手段将这三种毒素(CPA、CPB、rETX)串联表达,预防多种毒素型的感染。在本研究中我们用柔性氨基酸将其串联,成功构建了Cp-abx(CPA-CPB-rETX)。毕赤酵母(***)真核系统具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰功能,我们尚不清楚重组融合蛋白Cp-abx(CPA-CPB-rETX)是否存在一些需要修饰的潜在的特殊结构,这些翻译后修饰对于其免疫原性有何影响。此外,大肠杆菌(***)原核表达系统已广泛作为外源基因的表达工具,虽然不具有翻译后修饰功能,但也有诸多优点如表达量高、操作简单。本研究选用毕赤酵母(***)真核系统及大肠杆菌(***)原核表达系统来表达Cp-abx(CPA-CPB-rETX)。在体内体外评估了重组蛋白的安全性,发现重组蛋白安全稳定。将两种重组蛋白与弗氏不完全佐剂充分混合作为免疫原免疫小鼠,评价两种重组蛋白的免疫效果,筛选出适合的表达系统。此外,松花粉多糖具有免疫调节作用,在小鼠免疫期间口服松花粉多糖以评价其效果。本实验设计的Cp-abx融合基因序列交由公司分别根据大肠杆菌与毕赤酵母的密码子偏好进行优化后合成。将合成后的基因分别经PCR扩增后克隆到Blunt3载体中,之后转化到大肠杆菌DH5α克隆菌株并扩增,经PCR与测序鉴定正确之后,用两种内切酶NcoⅠ和XhoⅠ分别将pET-28a(+)空质粒和Blunt3-Cp-abx双酶切,并用T4 DNA连接酶连接并转化到到DH5α感受态细胞进行鉴定,鉴定正确后扩增,提取质粒并用热激法转化到BL21(DE3)感受态细胞中,鉴定正确后命名为pET-28(a)-Cp-abx。同时将空质粒也转入BL21(DE3)感受态细胞中作为阴性对照命名为pET-28(a)-vector。在毕赤酵母中选用pPIC9分泌型表达质粒,融合片段正确连接pPIC9表达质粒之后,用限制性核酸内切酶SacⅠ将其与空质粒进行单酶切线性化,用电转化法转入毕赤酵母GS115感受态细胞中,阳性转化子鉴定正确并命名为pPIC9-Cp-abx。空质粒作为阴性对照,命名为pPIC9-vector。将pET-28(a)-Cp-abx进行扩增,并在对数生长期前加入IPTG进行诱导,分别取诱导后0、1、2、3、4、5和6 h的菌液,4℃离心,收集上清与菌体并超声破碎,发现融合蛋白以包涵体形式存在。同样,将构建好的pPIC9-Cp-abx用甲醇进行诱导表达,并取0、1、2、3和4d的菌液,4℃离心,收集上清与菌体。SDS-PAGE分析表明,在两种表达体系下的蛋白凝胶层析中都出现了分子大小是71.15 kDa的目的条带,Western Blotting印迹分析进一步证明了SDS-PAGE中的目标条带与目标蛋白相对应,且重组大肠杆菌诱导表达后蛋白主要以包涵体形式存在;重组毕赤酵母诱导表达后蛋白主要在上清中,为分泌表达。将表达蛋白进行镍柱纯化,之后再用SDS-PAGE检测,只有71.15kDa单一目的条带。此外,融合蛋白在毕赤酵母中的表达量低于在大肠杆菌中的表达量。将纯化后的蛋白用BCA法测量蛋白浓度后与IFA佐剂等比例混合并搅拌均匀,

关键词：产气荚膜梭菌重组蛋白基因工程亚单位疫苗免疫调理

硼化钼作为锂硫电池隔膜修饰材料的电化学研究

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硼化钼作为锂硫电池隔膜修饰材料的电化学研究

作者：苗永强吉林大学

学位级别：硕士

锂硫电池因其正极活性物质硫的能量密度高、储量丰度大、成本低廉以及对环境友好等优点,有望取代已开始进入发展瓶颈期的锂离子电池体系,成为最具潜力的新一代二次电池体系。但是,该体系仍存在一些问题亟待解决:(1)活性物质硫及放电产... 详细信息

锂硫电池因其正极活性物质硫的能量密度高、储量丰度大、成本低廉以及对环境友好等优点,有望取代已开始进入发展瓶颈期的锂离子电池体系,成为最具潜力的新一代二次电池体系。但是,该体系仍存在一些问题亟待解决:(1)活性物质硫及放电产物硫化锂具有绝缘性,电池的反应动力学性能较差;(2)电池循环过程中正极材料的体积严重膨胀,导致正极材料粉化,影响电池后续循环的稳定性;(3)锂硫电池历经固—液—固的多步反应过程,其中产生的液相多硫化物会溶于电解液并透过隔膜与负极接触,发生不可逆的副反应,造成容量损失,也就是著名的“穿梭效应”;(4)负极锂堆叠沉积不均匀,容易产生枝晶结构,并且其尖端生长不可控,会刺破隔膜使电池短路。在这些问题之中,抑制穿梭效应的发生是促进锂硫电池商业化进程发展最为关键的一步。由此,在本论文中,我们将极性硼化钼材料作为锂硫电池的隔膜修饰材料,利用其与极性多硫化物之间的强化学结合作用,以改善锂硫电池的穿梭效应问题。首先,我们将MoB2作为锂硫电池隔膜修饰材料,对其进行电化学研究。结果表明,高导电性及强多硫化物吸附能力的MoB2能够显著减小电池极化并抑制锂硫电池的穿梭效应,使电池获得优异的电化学性能。随后,为了进一步催化锂硫电池的多步反应过程,我们采用熔盐法制备了Mo-MoB异质结构材料,将其用于修饰锂硫电池隔膜。研究表明,Mo与MoB的异质结构材料完美结合了金属单质(Mo)对多硫化物反应阶段的催化作用和金属硼化物(MoB)对多硫化物的化学吸附作用的优点,两者协同提升了锂硫电池的反应动力学性能,抑制了穿梭效应,使得电化学性能进一步提高。

关键词：锂硫电池多硫化物穿梭效应隔膜修饰金属硼化物

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网关模式下基于SAML的单点登录技术研究

网关模式下基于SAML的单点登录技术研究

作者：苗永强西安电子科技大学

学位级别：硕士

面向服务架构因其松耦合、资源共享等特性可以很好的适应分布式，跨平台等要求，迅速在各个领域发展并实际应用起来。但是面向服务架构中的安全问题一直是阻碍其发展的重大问题，随着网络的发展，网络中的服务越来越多，为了提高用户的... 详细信息

面向服务架构因其松耦合、资源共享等特性可以很好的适应分布式，跨平台等要求，迅速在各个领域发展并实际应用起来。但是面向服务架构中的安全问题一直是阻碍其发展的重大问题，随着网络的发展，网络中的服务越来越多，为了提高用户的使用效率同时减轻管理者的管理负担，单点登录和安全有效的身份管理需求越来越强烈。论文工作源于国家某预研项目，本文主要研究面向服务架构环境中的身份认证与单点登录技术。论文在分析信息安全与Web服务相关技术的基础上，对现有的认证技术与单点登录技术进行了总结归纳。论文讨论了基于SAML的单点登录框架，并对其安全性进行了分析，着重研究了实现SAML单点登录的Browser/Post与Browser/Artifact方式，重点分析了既有的基于SOAP网关的认证授权框架与非网关模型下实现单点登录的交互操作方面的区别，在上述分析的基础上提出了一种基于网关模型的支持跨域单点登录的模型，基于该模型讨论了有关单点登录框架的安全隐患，并将对应解决方法应用于该模型中，设计实现了相应的身份信息管理与认证机制，提高了整个模型的安全性。最后，对设计实现的机制进行了测试，并对论文工作进行了总结，指出了进一步的研究方向。

关键词：面向服务架构单点登录身份认证 SAML PKI

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矢量控制系统的模块化标幺化设计方法研究

矢量控制系统的模块化标幺化设计方法研究

作者：苗永强天津大学

学位级别：硕士

结构的模块化软件的优点是众所周知的。这一点尤其适用于有许多小模块构成的大型复杂系统。所有参与者必须遵循一个标准或一套规则和准则。为了实现数字化电机控制系统,TMS320 C2000(C2000)的ISA(指令集架构)已经被开发,T?MS320?DSP算... 详细信息

结构的模块化软件的优点是众所周知的。这一点尤其适用于有许多小模块构成的大型复杂系统。所有参与者必须遵循一个标准或一套规则和准则。为了实现数字化电机控制系统,TMS320 C2000(C2000)的ISA(指令集架构)已经被开发,T?MS320?DSP算法标准涉及应用领域的具体需求,如数字化电机控制( DMC)、工业自动化(IA)、不间断电源(UPS),加上其他一系列相关领域的控制。用于代表数字控制系统的信号流程图为控制行为的有效实现提供了很好的借鉴,这主要是通过定义好的I/O口由软件互联的模块来实现的。本文分析定点DSP在感应电机矢量控制中Q格式处理问题。以矢量控制为例,分析了其标幺值的Q15格式表示方案。最后,给出了矢量控制定点运算的具体编程实现方法。在实时软件编制方面,利用汇编语言和16位定点C语言混合编程的方法,编写了变频调速系统的模块化程序,以便于修改和移植。在实现SVPWM算法的汇编程序中采用了一种新型的定标法对标幺化的数值进行定标,这种定标法能直观的表示数值的大小范围,可以实时的对数值进行定标提高了SVPWM算法执行的精度和速度。该系统使用PC机对下位机DSP进行实时控制,在DSP中依据选定的电机控制策略程序,发出空间矢量脉冲调制形式的电压波形,实现对交流电机变压变频控制;在上位机中能实时查看变量波形,并对DSP内存变量进行修改。这种方法为矢量控制提供了一种很好的解决方案。

关键词：数字化电机控制标幺化数字定标矢量控制

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大粒径沥青混合料基层在青临路上的应用

公路交通科技（应用技术版） 2012年第8期8卷 89-92页

作者：姜成祥苗永强山东东方路桥建设总公司山东临沂276005

大量的路面损坏状况调查表明,渗入路面结构内的水,是造成或加速路面损坏的主要原因之一。沥青碎石因具有透水能力强和便于机械化施工等优点,得到越来越广泛的应用。本文从选材、设计、拌和、运输、摊铺、碾压等6个方面,阐述了大粒径透... 详细信息

大量的路面损坏状况调查表明,渗入路面结构内的水,是造成或加速路面损坏的主要原因之一。沥青碎石因具有透水能力强和便于机械化施工等优点,得到越来越广泛的应用。本文从选材、设计、拌和、运输、摊铺、碾压等6个方面,阐述了大粒径透水性沥青混合料(LSPM-30)在工程实际应用中的技术控制要点,并取得了一定的技术经验。

关键词：大粒径透水性沥青混合料应用

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个人所得税税收筹划——以KD公司为例

农村经济与科技 2018年第20期29卷 77-78页

作者：苗永强贵州财经大学贵州贵阳550025

随着互联网向实体方向深入,所有的数据、内容、服务、人都处于一个网络中,企业面临诸多困难,诸如媒体重合度高、媒介高度碎片化、消费者洞察难度大和产品决策周期慢等。大数据助力、全场景营销、智能生态营销、线上线下融合是现在发展... 详细信息

随着互联网向实体方向深入,所有的数据、内容、服务、人都处于一个网络中,企业面临诸多困难,诸如媒体重合度高、媒介高度碎片化、消费者洞察难度大和产品决策周期慢等。大数据助力、全场景营销、智能生态营销、线上线下融合是现在发展的潮流。KD公司作为一家从1999年就专业从事智能语音及语言技术、人工智能技术的研究企业,无疑现今的发展趋势给KD公司带来了无数机遇。如何在这个竞争激烈的环境下脱颖而出,税收的筹划也占据一个重要地位。本文以KD公司为例,针对该企业的个人所得税进行税收筹划,以在案例模拟过程中得到宝贵经验,以降低公司纳税成本,增强企业竞争力。

关键词：税收筹划税收风险个人所得税

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道路桥梁施工中混凝土裂缝成因及策略

运输经理世界 2021年第33期 103-105页

作者：苗永强山东东方路桥建设有限公司山东临沂276000

道路桥梁工程的材料质量性能直接决定道路桥梁的运行安全,因此全面防范控制混凝土材料裂缝十分必要。从道路桥梁的整个施工过程来讲,工程技术人员必须实时监测混凝土的工程材料缺陷,一旦混凝土的外表结构凹凸或者存在裂缝,需要对其进行... 详细信息

道路桥梁工程的材料质量性能直接决定道路桥梁的运行安全,因此全面防范控制混凝土材料裂缝十分必要。从道路桥梁的整个施工过程来讲,工程技术人员必须实时监测混凝土的工程材料缺陷,一旦混凝土的外表结构凹凸或者存在裂缝,需要对其进行必要的弥补修复处理。探讨了混凝土裂缝的主要成因,据此给出解决混凝土裂缝的工程实践技术要点。

关键词：道路桥梁施工混凝土裂缝成因解决策略

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加强公路工程试验检测与质量控制策略

大众标准化 2022年第15期4卷 177-179页

作者：苗永强山东东方路桥建设有限公司山东临沂276000

公路工程应当保证达到良好的质量安全标准,运用专业化的试验检测仪器来查找公路工程现有的质量缺陷因素。近些年以来,公路工程的建设范围已经表现为明显扩大的发展特征。然而实际上,某些地区的公路工程由于未能通过专门严格检测,就会形... 详细信息

公路工程应当保证达到良好的质量安全标准,运用专业化的试验检测仪器来查找公路工程现有的质量缺陷因素。近些年以来,公路工程的建设范围已经表现为明显扩大的发展特征。然而实际上,某些地区的公路工程由于未能通过专门严格检测,就会形成公路工程的各种质量缺陷,甚至侵害到公路车辆行人的安全。文章探讨了对于公路工程展开试验检测工作的现有缺陷,进而给出公路工程的质量控制要点。

关键词：公路工程试验检测质量控制

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《物权法》对现行物业管理工作的影响

住宅与房地产 2007年第5期 26-28页

作者：苗永强

《物权法》共分六篇十九章，其中明确业主权益并涉及物业管理工作的是在第二编所有权的第六章业主的建筑物区分所有权。现在让我们来深入探讨其中部分条款将带来的新变化。

关键词：物业管理工作《物权法》建筑物区分所有权现行业主权益第六章