检索结果-南通市图书馆

含NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体的真核表达

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第5期34卷 59-62页

作者：苏春霞苏鑫铭张彦明曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移... 详细信息

为进一步提高重组病毒的表达水平,用构建的含gB启动子和NDV F48E9株F基因的MDV CVI988株转移质粒载体pUS10F转染293T细胞,通过PCR和接免疫荧光(IFA)法研究了其在真核中的表达,并确定最佳的转染条件。结果表明,真核细胞中带有F基因,转移质粒载体已经进入细胞DNA;转染转移质粒载体 pUS10F后的293 T细胞所表达的NDV F基因产物抗原性较好,能够与抗NDV的标准血清反应。确定的最佳转染条件为:DNA 3μg／mL,转染后48 h外源基因在细胞中的表达量最高,在6孔板和96孔板中细胞数量分别以 2×105／孔和1×101／孔的转染效果最好。

关键词：畜禽疫病新城疫病毒 F基因马立克氏病病毒CVI988转移质粒载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PCR快速检测伪狂犬病病毒野毒感染

中国病毒学 2004年第6期19卷 612-615页

作者：周斌苏鑫铭张素芳贾赟曹瑞兵陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI基因的序列,设计并合成了一对引物,以PrV容A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分PrV野毒株和疫苗弱毒的鉴别PCR方法.该方法能从PrV容A株(RA)、上海株(SH)、鲁A株(LA)中... 详细信息

根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI基因的序列,设计并合成了一对引物,以PrV容A株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分PrV野毒株和疫苗弱毒的鉴别PCR方法.该方法能从PrV容A株(RA)、上海株(SH)、鲁A株(LA)中扩增出一条848bp的片段,但Bartha-K61株没有扩增出该片段.测序结果表明PCR扩增产物和方法的特异性.对正常细胞与其它6种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应.对PrV容A株细胞毒提取物DNA进行检测,其最低检出量为***对感染野毒的发病猪不同组织器官检测发现,淋巴结检出率最高,依次为脾、脑(海马角)、肺、肾、肝等.对2003～2004年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的37个大中型猪场送检的172份病料进行PCR检测病料阳性率为20.34%(35/172),猪场阳性率为40.54%(15/37).实验结果表明所建立的PCR技术可用于伪狂犬病野毒感染的快速鉴定和流行病学调查.

关键词：伪狂犬病毒 PCR 建立应用

检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的重组N蛋白-ELISA的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病毒学 2004年第3期19卷 250-254页

作者：许立华苏鑫铭王玲王志亮吴延功陈溥言南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 宁夏大学农学院动物科学系宁夏银川750021 农业部动物检疫所山东青岛266032

将已构建成功的重组质粒pETN转化入***21(DE3)中,在最佳诱导条件下获得重组N蛋白。随后用His-Bind对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性分别用SDS-PAGE电泳及Western-blot试验检测。在此基础上,以纯化的重组N蛋白作为包被抗... 详细信息

将已构建成功的重组质粒pETN转化入***21(DE3)中,在最佳诱导条件下获得重组N蛋白。随后用His-Bind对表达产物进行纯化,对纯化效果及纯化产物的特异性分别用SDS-PAGE电泳及Western-blot试验检测。在此基础上,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,对各种条件进行优化(如抗原的包被,作用时间及底物的选择),确定了判定标准,建立了检测PRRS抗体的间接ELISA方法。用此方法检测了200份血清样品,并与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果相比较,符合率达91%。

关键词：重组质粒重组N蛋白猪繁殖与呼吸综合征抗体间接ELISA

猪繁殖与呼吸综合征与伪狂犬病混合感染的分子生物学快速诊断

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病毒学 2003年第6期18卷 614-615页

作者：许立华王玲苏鑫铭王志亮吴延功陈溥言南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 宁夏大学农学院动物科学系宁夏银川750105 农业部动物检疫所山东青岛266032

猪繁殖与呼吸综合征自1987年发现至今,已在世界大多数养猪国家和地区普遍存在[1,2].而伪狂犬病作为仅次于口蹄疫、猪瘟的危害养猪业的重要疫病，一直引起人们的高度重视[3,4].

关键词：猪繁殖与呼吸综合征伪狂犬病混合感染快速诊断

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的克隆及高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病毒学 2003年第3期18卷 279-282页

作者：许立华芦银华胡志华苏鑫铭苏春霞陈溥言南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室西北农林科技大学陕西杨凌712100

本试验参照GenBank公布的Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)VR2332株的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,应用RT-PCR方法扩增出了PRRSV的核衣壳蛋白基因(N基因)。在对N基因及pET32a载体双酶切后进行连接,构建了高效原核表达载体pETN。将pETN重组质粒转化BL21(DE3)宿主菌后,对培养条件及诱导表达条件(IPTG最佳浓度、作用时间)等影响表达的因素进行优化,实现了PRRSV核衣壳蛋白基因的高效表达。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N基因克隆表达原核表达载体核衣壳蛋白基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病毒学 2003年第6期18卷 548-552页

作者：许立华苏小运王玲苏鑫铭任雪枫苏春霞陈溥言南京农业大学农业部畜禽疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 宁夏大学农学院动物科学系宁夏银川750105 西北农林科技大学陕西杨陵712100

参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段... 详细信息

参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达。用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验。检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司FLISA检测试剂盒符合率达93.8％。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 Ⅳ基因流感病毒 HA基因联合表达血凝素基因乳胶凝集试验

插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2006年第10期26卷 36-40页

作者：王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。

关键词：伪狂犬病痛毒 TK基因 Cre loxP GFP重组病毒

表达Cre重组酶的真核细胞系的建立及在重组伪狂犬病病毒研究中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南京农业大学学报 2007年第4期30卷 114-119页

作者：苏鑫铭徐亚林于春梅曹瑞兵周斌陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 南京医科大学微生物与免疫学教研室江苏南京210029

根据Cre基因序列设计并合成1对引物,PCR扩增出Cre基因编码区,克隆于pIREShyg载体,得到重组质粒pIREShyg-Cre,转染HEK-293A细胞后经400μ***-1 Hygromycin B的筛选,将其中1个阳性克隆命名为293A-Cre。利用伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)S03109株(带有gfp报告基因表达盒及loxP位点)感染293A-Cre细胞,荧光显微镜观察、PCR及Western blot检测gfp基因的表达。结果表明,S03109感染293A-Cre二代后loxP位点间的gfp表达盒被删除,获得重组病毒S0419。将S0419感染已转染pBlulox的293A-Cre细胞,在RK13细胞上筛选得到表达LacZ的重组病毒S06293。S06293在293A-Cre细胞上传代2次,X-Gal原位染色表明LacZ的表达消失。测序结果证实,在Cre重组酶作用下,2个同向loxP序列之间的外源基因序列被正确除去。以上结果表明,本研究构建的稳定表达Cre重组酶的293A-Cre细胞系可以用于在包含有loxP位点的PRV基因组中外源基因的快速删除或整合。

关键词：伪狂犬病病毒 PCR Cre重组酶真核细胞系 loxP

伪狂犬病病毒ul24基因表达蛋白的胞内定位研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病毒学 2006年第5期21卷 463-467页

根据GenBank已发表的PrVul24基因序列(NC006151),设计并合成一对引物,PCR扩增出ul24基因编码区,克隆于pEGFP-N1载体,得到重组质粒pUL24-GFP。酶切鉴定,测序及WesternBlot验证重组质粒。ul24基因序列测定结果已提交GenBank,登录号DQ226544。Westernblot分析结果表明UL24-GFP融合蛋白为45KD。将pUL24-GFP转染真核细胞,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞内定位,结果表明UL24-GFP融合蛋白定位于细胞核。

关键词：伪狂犬病病毒 PCR ul24 GFP