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马链球菌兽疫亚种中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的克隆与表达

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中国人兽共患病杂志 2004年第7期20卷 633-636页

作者：苏良科陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点实验室南京210095

目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因... 详细信息

目的　构建马链球菌兽疫亚种 (Streptococcusequisubsp zooepidemicus)中国株的类M蛋白基因抗原表位片段的重组表达质粒 (pET -Szp) ,并检测表达产物的免疫反应性。方法　根据GenBank登录的马链球菌兽疫亚种纽约分离株w6 0类M蛋白基因序列设计和合成引物 ,以该菌中国分离株ATCC35 2 4 6的基因组DNA为模板 ,扩增类M蛋白基因 5’端第 5 83～ 10 6 8bp片段 ,并按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET - 32a(+)中 ,将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1株 ,用IPTG诱导表达 ,并通过SDS -PAGE和免疫印迹对表达蛋白进行初步分析。结果　扩增出 4 86bp的马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6的类M蛋白基因片段 ,该基因在大肠杆菌表达系统中经诱导 ,得到分子量为 5 0 0 0 0的表达产物 ,免疫印迹表明该产物具有特异的免疫反应性。结论　成功构建了表达马链球菌兽疫亚种中国株类M蛋白片段的重组表达质粒 ,并实现在大肠杆菌中表达 ,为重组类M蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M基因克隆表达重组表达质粒免疫反应性

马链球菌兽疫亚种ATCC35246株类M蛋白的提取

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畜牧与兽医 2004年第1期36卷 25-26页

作者：苏良科陆承平南京农业大学动物医学院江苏南京210095

马链球菌兽疫亚种 (***) 是引起我国猪链球菌病的主要病原之一 ,其类M蛋白是一重要的毒力因子和保护性抗原。用热酸提取的马链球菌兽疫亚种ATCC352 4 6株类M蛋白 ,作SDS PAGE电泳 ,在电泳图谱中出现相对分子质量为 43 0 0 0、 34 0 0 0... 详细信息

马链球菌兽疫亚种 (***) 是引起我国猪链球菌病的主要病原之一 ,其类M蛋白是一重要的毒力因子和保护性抗原。用热酸提取的马链球菌兽疫亚种ATCC352 4 6株类M蛋白 ,作SDS PAGE电泳 ,在电泳图谱中出现相对分子质量为 43 0 0 0、 34 0 0 0、33 0 0 0、31 0 0 0和 30 0 0 0等 5条主蛋白带。免疫印迹显示 ,这 5条主蛋白带都能被ATCC352 4 6的全菌兔血清识别。

关键词：马链球菌兽疫亚种 ATCC35246株类M蛋白提取猪链球菌病亚单位疫苗

马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗小鼠免疫效果评价

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农业生物技术学报 2004年第2期12卷 226-227页

作者：苏良科陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

马链球菌兽疫亚种旧名马腺疫链球菌，多年来是引致我国猪链球菌病的主要病原。链球菌类M蛋白是一种二聚体丝状蛋白，c端为保守区域锚在细胞膜上并跨越整个细胞壁，与其它革兰氏阳性菌的表面蛋白有结构上的同源性。类 M蛋白和荚膜多糖都... 详细信息

马链球菌兽疫亚种旧名马腺疫链球菌，多年来是引致我国猪链球菌病的主要病原。链球菌类M蛋白是一种二聚体丝状蛋白，c端为保守区域锚在细胞膜上并跨越整个细胞壁，与其它革兰氏阳性菌的表面蛋白有结构上的同源性。类 M蛋白和荚膜多糖都有抗吞噬细胞的吞噬作用，有利于细菌在动物机体中生存和繁殖[1,2]。链球菌类M蛋白是一种良好的免疫原，可溶解于酒精。耐酸和耐热，在pH 2．0煮沸的环境中可保持活性十几分钟，在蛋白水解酶作用下能被降解[3]。本实验将热酸法提取的ATCC35246菌株类M蛋白、重组表达的类M蛋白及ATCC35246全菌作为免疫原，免疫小鼠，筛选出抗原性较好者，为进一步研制猪链球菌病的高效疫苗奠定基础。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M蛋白亚单位疫苗免疫原性

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类M蛋白对HEp-2细胞的黏附作用

南京农业大学学报 2004年第3期27卷 74-77页

作者：苏良科范红结陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最... 详细信息

采用通用的模式细胞HEp 2作黏附及黏附抑制试验 ,研究马链球菌兽疫亚种ATCC35 2 4 6株类M蛋白的黏附作用。结果表明 ,ATCC35 2 4 6株可以黏附HEp 2细胞。用重组表达的类M蛋白鼠抗血清处理ATCC35 2 4 6 ,可抑制其对HEp 2细胞的黏附 ,最大抑制率达 81 4 % ;而ATCC35 2 4 6的全菌鼠抗血清在 1∶80 0时能完全抑制它对HEp 2细胞的黏附。此外 ,热酸提取的ATCC35 2 4 6株的类M蛋白和重组表达的类M蛋白可不同程度地抑制该菌株的黏附 ,前者在 16 0μg·mL-1有最大的黏附抑制率 ( 4 0 % ) ,而后者在 6 0 μg·mL-1的黏附抑制率可达最高值 ( 2 3% )。结果显示 ,类M蛋白是ATCC35 2 4 6株的黏附素之一。

关键词：马链球菌兽疫亚种类M蛋白 HEp-2细胞黏附猪链球菌病

8株动物源编码Stx2短尾噬菌体的生物学特性

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微生物学报 2008年第8期48卷 1121-1125页

作者：夏炉明苏良科孙建和严亚贤上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海201101

【目的】对8株源自大肠杆菌O157编码Stx2毒素的噬菌体生物学特性进行研究。【方法】丝裂霉素C诱导8株大肠杆菌O157菌株释放噬菌体,采用PCR作初步鉴定,分离、纯化噬菌体基因组,随机引物法地高辛(DIG)标记stx2基因片段作为探针,对纯化的... 详细信息

【目的】对8株源自大肠杆菌O157编码Stx2毒素的噬菌体生物学特性进行研究。【方法】丝裂霉素C诱导8株大肠杆菌O157菌株释放噬菌体,采用PCR作初步鉴定,分离、纯化噬菌体基因组,随机引物法地高辛(DIG)标记stx2基因片段作为探针,对纯化的噬菌体采用Southern blot进行Stx2噬菌体再次鉴定,透射电子显微镜观察纯化的8株Stx2噬菌体的形态特征,通过限制性内切酶图谱分析,确定噬菌体的核酸类型和基因组大小、以及限制性内切酶酶切片段多态性,并分析噬菌体的蛋白质组成特征。【结果】Southern blot证实分离的8株噬菌体为Stx2噬菌体,电镜下观察的各株Stx2噬菌体形态一致,头部均为正六边形,尾部很短,属于短尾噬菌体科,各株噬菌体之间存在相同的蛋白结构模式,基因组为双链DNA,限制性内切酶片段长度表现出一定的多态性,噬菌体的基因组大小从48.0～65.3kb不等。【结论】来源不同菌株的8株编码Stx2噬菌体均为短尾噬菌体,其蛋白结构模式一致,但基因组具有不同组成。

关键词： Stx2噬菌体形态特征酶切多态性 SDS-PAGE

广东地区猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国兽医杂志 2007年第5期43卷 36-37页

作者：李春玲苏良科王贵平南京农业大学动物医学院江苏南京210095 广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640

本文从广东各地送检病料中分离链球菌,开展了其血清群鉴定及生化特性、溶血性、毒力等方面的研究工作,现报告如下。1材料与方法1.1菌株猪源疑似链球菌22株,分离自广东地区猪场。参考菌株,猪链球菌ST171弱毒疫苗株(广东省生物药厂生产,批... 详细信息

本文从广东各地送检病料中分离链球菌,开展了其血清群鉴定及生化特性、溶血性、毒力等方面的研究工作,现报告如下。1材料与方法1.1菌株猪源疑似链球菌22株,分离自广东地区猪场。参考菌株,猪链球菌ST171弱毒疫苗株(广东省生物药厂生产,批号0311),属链球菌兰氏分群C群。[第一段]

关键词：猪源链球菌生物学特性分离鉴定广东地区弱毒疫苗株生化特性猪链球菌血清群

烟曲霉毒素——一个影响猪健康和生产性能的重要因素

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国外畜牧学（猪与禽） 2009年第6期29卷 46-48页

作者：苏良科 Special Nutrients公司技术部

烟曲霉毒素主要是由串珠镰刀菌（Fusarium monili-forme）的产毒株产生的有毒次级代谢产物。水分活度大于0.91、温度在15～25℃之间的基质最容易产生烟曲霉毒素。

关键词：烟曲霉毒素生产性能健康次级代谢产物串珠镰刀菌水分活度猪株产

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沙门氏菌的垂直传播

国外畜牧学（猪与禽） 2013年第3期33卷 11-13页

作者：苏良科

当沙门氏菌在鸡群中不同鸡只间相互传染时，这种运动被称为横向扩散或横向传播。当细菌通过母鸡传给其子代则被称为垂直扩散或垂直传播。由于父母代母鸡从来都看不到其子代雏鸡，所以沙门氏菌在家禽中的垂直传播必定包括通过蛋的内部或... 详细信息

当沙门氏菌在鸡群中不同鸡只间相互传染时，这种运动被称为横向扩散或横向传播。当细菌通过母鸡传给其子代则被称为垂直扩散或垂直传播。由于父母代母鸡从来都看不到其子代雏鸡，所以沙门氏菌在家禽中的垂直传播必定包括通过蛋的内部或外表进行的传播，这正是我们本文所要讨论的内容。

关键词：垂直传播沙门氏菌子代雏鸡横向扩散垂直扩散父母代鸡群母鸡

志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

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微生物学报 2008年第9期48卷 1227-1233页

作者：苏良科严亚贤陆承平上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min... 详细信息

【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用λ噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7Min27株的stx2基因中,获得O157:H7Min27的突变菌株Min27(△stx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx∷cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】ΦMin27(△stx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。

关键词：大肠杆菌O157:H7 Stx2噬菌体 ΦMin27(△stx∷cat) 感染特性