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坚持科学养鱼,四大家鱼也能创高产高效益

珠江水产 2000年第2期 14-19页

作者：苏明权广东省中山市粮食局中山市

长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

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中华骨科杂志 2004年第7期24卷 427-430页

作者：王臻杨旻李立文苏明权于文彬第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 第四军医大学西京医院临床分子生物学研究中心西安710032

目的通过构建能产生长双链RNA的质粒载体,探讨长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的可行性。方法以无毒性、完全外源性基因绿色荧光蛋白EGFP基因为RNA模板,使用2个启动子同时从正反向引导DNA序列产生正义和反义链RNA,构建产生长双链... 详细信息

目的通过构建能产生长双链RNA的质粒载体,探讨长双链RNA非特异性诱导人骨肉瘤细胞凋亡的可行性。方法以无毒性、完全外源性基因绿色荧光蛋白EGFP基因为RNA模板,使用2个启动子同时从正反向引导DNA序列产生正义和反义链RNA,构建产生长双链RNA的质粒载体。转染人骨肉瘤细胞系MG63,48h后对细胞进行凋亡荧光染色、流式细胞仪及MTT法测定,对数据进行统计学处理。结果成功获得能产生长双链RNA的质粒载体pCI-neo-dsEGFP,MTT法测定显示随着pCI-neo-dsEGFP质粒剂量的增加(0.05μg,0.10μg,0.15μg,0.20μg,0.25μg,0.30μg),细胞的吸光度逐渐减小。转入pCI-neo-dsEGFP组的MG63细胞经凋亡荧光染色呈现大量绿色不规则荧光,出现凋亡现象,而对照组没有出现。流式细胞仪检测结果显示阴性对照组MG63细胞凋亡率为0.028±0.006;pCI-neo-dsEGFP质粒剂量1.0μg时MG63凋亡率为0.175±0.021;2.0μg时凋亡率为0.348±0.032;3.0μg时凋亡率为0.381±0.027;阳性对照组MG63细胞凋亡率为0.386±0.029。随着dsRNA剂量的增加,骨肉瘤细胞生长的抑制效应逐渐增加。当pCI-neo-dsEGFP质粒剂量为3.0μg时,对MG63细胞产生的凋亡效应与100 μl的5-FU(50μg/ml)产生的凋亡效应差异无显著性。结论长双链RNA能非特异性诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡,

关键词：骨肉瘤程序细胞死亡基因表达调控质粒载体

抗前列腺癌γ-精浆蛋白人源Fab抗体的原核表达和特性鉴定

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中国肿瘤临床 2011年第15期38卷 902-905页

作者：张青郝晓柯苏明权刘家云张鹏天津医科大学附属肿瘤医院检验科天津市肿瘤防治重点实验室天津市300060 第四军医大学西京医院检验科

目的:对从噬菌体抗体库筛选的抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源化Fab抗体进行表达纯化和生物学特性鉴定,为其应用于前列腺癌抗体导向酶—前药治疗奠定基础。方法:首先将重组表达载体γ-sm-hFab/pComb3X转化大肠杆菌并诱导其可溶性表达,亲和纯... 详细信息

目的:对从噬菌体抗体库筛选的抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源化Fab抗体进行表达纯化和生物学特性鉴定,为其应用于前列腺癌抗体导向酶—前药治疗奠定基础。方法:首先将重组表达载体γ-sm-hFab/pComb3X转化大肠杆菌并诱导其可溶性表达,亲和纯化后采取Western-blot检测表达产物对γ-sm抗原结合特异性。其次分别采用抑制ELISA和竞争抑制ELISA方法分析表达纯化的抗γ-sm人源Fab抗体的亲和力和结合表位。最后采用竞争抑制流式细胞术和免疫组化超敏S-P法鉴定制备纯化的人源Fab抗体在前列腺癌细胞和组织上的结合分布特性。结果:成功诱导表达和纯化出理论分子量大小可溶性Fab抗体蛋白,含量约占细菌总可溶性蛋白的20.5%,Western-blot证实其能特异性结合识别γ-sm。抑制ELISA显示其表观结合常数(Ka)为0.78×10~8M^(-1),亲和力约为亲本鼠源单抗E4B7的37.5%,竞争抑制ELISA进一步显示,二者识别γ-Sm抗原蛋白上的表位相同。流式细胞术和免疫组化显示,表达纯化的人源Fab抗体可显著地与前列腺癌细胞和组织特异性结合,其结合主要分布在腺上皮内瘤和中低度恶性的前列腺癌组织上。结论:成功地对筛选的抗γ-sm人源Fab抗体进行了原核可溶性表达、纯化和免疫生物学特性鉴定,为其进一步应用于抗体导向酶—前药实验治疗前列腺癌奠定了基础。

关键词： Fab抗体人源化原核表达 γ-精浆蛋白前列腺癌

3TAT-DRBD融合蛋白的原核表达及其siRNA结合活性与穿膜功能的鉴定

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中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第2期20卷 201-206页

作者：刁艳君刘家云马越云苏明权郝晓柯第四军医大学附属西京医院全军临床检验医学研究所陕西西安710032

目的:构建3TAT-DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。方法:采用基因合成技术获取靶基因3TAT-DRBD,并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,凝血... 详细信息

目的:构建3TAT-DRBD重组载体,表达和纯化融合蛋白,并对其siRNA结合活性和穿膜功能进行初步验证。方法:采用基因合成技术获取靶基因3TAT-DRBD,并克隆到原核表达载体pET-44b中;用IPTG诱导融合蛋白表达,镍亲和凝胶层析柱纯化融合蛋白,凝血酶切除标签,Western blotting鉴定。凝胶迁移阻滞实验验证DRBD和siRNA的结合能力,激光共聚焦显微镜观察TAT的穿膜能力。结果:限制性酶切和基因测序表明重组质粒pET-44b-3TAT-DRBD构建成功;IPTG诱导后3TAT-DRBD融合蛋白(含Nus标签和S标签)在大肠杆菌中高效表达,可溶性蛋白占菌体总蛋白约80%;成功切除融合标签并纯化了无标签的融合蛋白,经Western blotting鉴定其相对分子质量约为17 000;凝胶迁移阻滞实验证明,融合蛋白3TAT-DRBD能有效结合靶向survivin基因的siRNA(survivin-siRNA);激光共聚焦显微镜下可见,在TAT的介导下survivin-siRNA穿透胞膜进入前列腺癌PC3细胞的效率明显增高。结论:成功表达并纯化了具有siRNA结合活性与穿膜功能的3TAT-DRBD融合蛋白,为进一步3TAT-DRBD的功能研究及临床应用奠定了基础。

关键词： TAT DRBD 融合蛋白 siRNA 前列腺癌结合活性穿膜功能

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肺癌胸水细胞端粒酶活性的表达

陕西医学杂志 2002年第10期31卷 921-922,927页

作者：曾佑平杨秀芝苏明权新疆乌鲁木齐克拉玛依东路55号武警兵团指挥部医院内科乌鲁木齐830000 第四军医大学西京医院临床分子生物学研究中心

采用 PCR- TRAP方法检测肺癌胸水细胞标本中的端粒酶活性 ,并与细胞学诊断进行比较 ,结果 :36例肺癌胸水标本中 ,2 4例细胞学阳性胸水有 2 3例端粒酶表达阳性 ,3例细胞学可疑胸水有 2例端粒酶阳性 ,6例细胞学阴性胸水中有 2例端粒酶阳... 详细信息

采用 PCR- TRAP方法检测肺癌胸水细胞标本中的端粒酶活性 ,并与细胞学诊断进行比较 ,结果 :36例肺癌胸水标本中 ,2 4例细胞学阳性胸水有 2 3例端粒酶表达阳性 ,3例细胞学可疑胸水有 2例端粒酶阳性 ,6例细胞学阴性胸水中有 2例端粒酶阳性。细胞学诊断和端粒酶检测阳性率分别为 66.7% ( 2 4 /36)和 75 .0 % ( 2 7/36)。提示 :端粒酶活性检测可能在肺癌胸水诊断和鉴别诊断方面有重要价值。

关键词：胸水细胞端粒酶活性肺肿瘤病理学

西安地区汉族亚甲基四氢叶酸还原酶的两种基因多态性

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第四军医大学学报 2003年第7期24卷 634-636页

作者：孙文萍万琪苏明权第四军医大学西京医院神经内科陕西西安710033 第四军医大学西京医院检验科陕西西安710033

目的 :了解西安地区汉族人MTHFR基因C677T和A12 98C两个位点的遗传多态性 .方法 :应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)调查西安地区 96个汉族人的基因型分布 .结果 :677T等位基因的分布频率为 4 5 %,TT纯合子占 18%;12 98... 详细信息

目的 :了解西安地区汉族人MTHFR基因C677T和A12 98C两个位点的遗传多态性 .方法 :应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)调查西安地区 96个汉族人的基因型分布 .结果 :677T等位基因的分布频率为 4 5 %,TT纯合子占 18%;12 98C等位基因的分布频率为 2 0 %.CC合子占 3 %;双杂合子 677CT ,12 98AC占 2 1%.结论 :调查显示这两个位点的遗传多态性与文献报道不同 ,可能具有群体差异性 .

关键词：限制性片段长度多态性亚甲基四氢叶酸还原酶基因聚酶链反应

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采用PCR快速检测金葡菌的mecA基因

细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 642-643页

作者：苏明权张建芳樊新刘家云于文彬第四军医大学西京医院检验科陕西西安710032

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)是医院内感染的重要病原之一 ,除对甲氧西林耐药外 ,还对临床上广泛应用的多种抗生素耐药 ,其所致感染呈散发或爆发流行 ,治疗困难、死亡率高 ,已成为临床治疗上的一大难题。我们根据ＰＢＰ2ａ编码... 详细信息

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)是医院内感染的重要病原之一 ,除对甲氧西林耐药外 ,还对临床上广泛应用的多种抗生素耐药 ,其所致感染呈散发或爆发流行 ,治疗困难、死亡率高 ,已成为临床治疗上的一大难题。我们根据ＰＢＰ2ａ编码基因设计了一对ｍｅｃＡ引物 ,用 16ＳｒＲＮＡ基因作为内参照 ,采用ＰＣＲ法可快速检测临床分离的金黄色葡萄球菌中的ｍｅｃＡ基因 ,用于ＭＲＳＡ的筛选和鉴定。1　材料和方法ＡＴＣＣ2 5 92 3。溶葡萄球菌素为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,蛋白酶Ｋ为Ｍａｒｋ公司产品。苯唑西林青霉素 (批号 :0 10 4 0 0 4 )为河北张药公司产品。1.2　方法1.2 .1　ｍｅ

关键词： mecA基因聚合酶链反应甲氧西林金黄色葡萄球菌院内感染

多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析检测耐异烟肼结核分枝杆菌

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中华结核和呼吸杂志 2004年第1期27卷 23-26页

作者：程晓东于文彬别良峰苏明权张荣郝晓柯第四军医大学西京医院检验科西安710032

目的　建立耐异烟肼 (isoniazid ,INH )结核分枝杆菌多重聚合酶链反应单链构象多态性分析 (multiple polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,multi PCR SSCP)方法 ,快速、特异地同时检出aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况 ,用于快速诊断结核分枝杆菌对INH的耐药性。方法　根据结核分枝杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列 ,分别设计出 3对特异性寡聚核苷酸引物 ,采用multi PCR及SSCP技术 ,同时检测对结核分枝杆菌耐INH起作用的这 3个基因的突变情况。结果　对H3 7Rv标准株、临床分离INH敏感株 (2 3株 )及INH耐药株 (3 5株 )分别采用常规PCR和multi PCR同时进行扩增 ,两种扩增方法均能扩增出预期的目的片段 ,且结果符合率达10 0 % ;采用单基因PCR SSCP ,aphC启动子序列突变检出率 17% (6/3 5)、inhA序列突变检出率 2 0 % (7/3 5)、katG序列突变检出率 66% (2 3 /3 5) ;multi PCR SSCP突变检出率 83 % (2 9/3 5)。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,multi PCR SSCP方法敏感、特异 ,能同时快速有效地检测结核分枝杆菌aphC启动子、inhA、katG 3个INH耐药基因的突变 ,提高检验效率 ,有望成为临床指导用药的好方法。

关键词：多重聚合酶链反应单链构象多态性分析检测耐异烟肼结核分枝杆菌药物耐受性

血液分析仪语音数据管理程序的开发及其在门诊血液学检验中的应用

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第四军医大学学报 2005年第1期26卷 80-82页

作者：郑善銮皇海杨麦贵苏明权郝晓柯第四军医大学西京医院检验科陕西西安710033

目的 :自行开发血液分析仪语音数据管理程序 ,应用于门诊血液分析仪检测数据的审核、查询、打印及患者姓名中文发音等事务管理 .方法 :采用MicrosoftAccess 2 0 0 0建立相关数据库 /表 ,在可视化编程语言VisualBasic 6 .0环境中 ,通过... 详细信息

目的 :自行开发血液分析仪语音数据管理程序 ,应用于门诊血液分析仪检测数据的审核、查询、打印及患者姓名中文发音等事务管理 .方法 :采用MicrosoftAccess 2 0 0 0建立相关数据库 /表 ,在可视化编程语言VisualBasic 6 .0环境中 ,通过标准串口通讯控件MsComm ,接收仪器检测数据 ,调用WindowsAPI中文语音函数 ,计算机自动患者姓名中文发音 ,将所有编写的源代码生成单独可执行程序及其安装程序 .结果 :该程序应用于临床 ,检测了 10 0 0 0 0份样本 ,其数据全部成功存储入库 /表 ,语音清晰 ,运行未出现程序中断或错误信息 ,使用简单快捷 .结论 :计算机与血液分析仪联机 ,可有效地对检测数据进行灵活的管理 ,清晰的中文发音 ,杜绝了报告单发放处的拥挤现象 ,提供一个井然有序的就医环境 ,为门诊血液学检验和报告单规范化提供极大方便 .

关键词：血液分析仪数据管理程序语音