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重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1996年第2期28卷 131-138页

作者：叶棋浓苏国富黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法，把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合，置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游，构建了ＳＤ序列... 详细信息

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法，把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合，置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游，构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构，但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１），ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明，它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明，表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性，说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．

关键词： MCAF GM-CSF 融合蛋白基因表达

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菠菜乙醇酸氧化酶基因的克隆及表达

生物工程学报 2002年第2期18卷 212-215页

作者：晋剑锋谭天伟苏国富北京化工大学生物化工系北京100029 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

采用RT PCR技术从菠菜总RNA中分离扩增了乙醇酸氧化酶 (GO)基因的cDNA序列 ,首先克隆到质粒pMD18 T ,进行了测序。然后将乙醇酸氧化酶的cDNA分别亚克隆至质粒pThioHisC、pTIG Trx、pBV2 2 0和pET 2b(+) ,分别转化大肠杆菌DH5α和BL2 1(D... 详细信息

采用RT PCR技术从菠菜总RNA中分离扩增了乙醇酸氧化酶 (GO)基因的cDNA序列 ,首先克隆到质粒pMD18 T ,进行了测序。然后将乙醇酸氧化酶的cDNA分别亚克隆至质粒pThioHisC、pTIG Trx、pBV2 2 0和pET 2b(+) ,分别转化大肠杆菌DH5α和BL2 1(DE3) ,并对重组乙醇酸氧化酶在大肠杆菌中的表达进行了研究。SDS PAGE和酶活分析表明 ,菠菜乙醇酸氧化酶在E .coliBL2 1(DE3) (pTIG Trx GO)和E .coliBL2 1(DE3) (pET 2 2b(+) GO)里得到了高水平的表达 ,其中E .coliBL2 1(DE3) (pET 2 2b(+) GO)的乙醇酸氧化酶活性较高。

关键词：乙醇酸氧化酶基因克隆表达菠菜

一种体内研究病原体致病机理的新方法——信号标签诱变技术

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遗传 2002年第6期24卷 721-726页

作者：姚潇黄留玉杨伯伦苏国富军事医学科学院生物工程研究所北京100071 西安交通大学环境与化学工程学院西安710049

信号标签诱变技术是以整个基因组为基础的研究病原体致病机制,可在体内对毒力基因进行高通量筛选的一种新方法。近几年应用该技术已对十多种病原微生物进行了筛选。这些筛选中除了找到已知的毒力基因外,还都鉴定到了未知的毒力因子。本... 详细信息

信号标签诱变技术是以整个基因组为基础的研究病原体致病机制,可在体内对毒力基因进行高通量筛选的一种新方法。近几年应用该技术已对十多种病原微生物进行了筛选。这些筛选中除了找到已知的毒力基因外,还都鉴定到了未知的毒力因子。本文就该技术的原理、优缺点、应用的必要条件、技术的改进及应用该技术鉴定到的毒力基因等作一综述。

关键词：体内研究病原体致病机理信号标签诱变技术毒力基因

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肿瘤基因治疗的转导方法和策略

国外医学（肿瘤学分册） 1996年第2期23卷 65-68页

作者：张述苏国富军事医学科学院附属医院 100039

基因治疗是肿瘤继手术、放疗和化疗后又一种新的有希望的疗法,如何将基因有效安全地导入靶细胞和选择何种策略使目的基因发挥应有的效应,是基因疗法研究的关键。本文从病毒转导和非病毒转导的角度,简述了基因转导方法的研究进展;又从免... 详细信息

基因治疗是肿瘤继手术、放疗和化疗后又一种新的有希望的疗法,如何将基因有效安全地导入靶细胞和选择何种策略使目的基因发挥应有的效应,是基因疗法研究的关键。本文从病毒转导和非病毒转导的角度,简述了基因转导方法的研究进展;又从免疫细胞和肿瘤细胞基因修饰的角度,概述了肿瘤基因治疗策略的近期动态,同时提出了基因疗法研究中需要进一步探讨的问题。

关键词：肿瘤基因治疗转导方法

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肠毒素性大肠杆菌疫苗的研制进展

中华流行病学杂志 2001年第5期22卷 386-388页

作者：应天翼韩照中苏国富北京生物工程研究所四室

细菌性腹泻是常见的肠道传染病,广泛流行于世界各地.据统计,全球年腹泻病人达30亿左右,我国年发病约8亿多人次,死亡率达0.02‰,其中最常见的是由肠毒索性大肠杆菌(Enterotoxigenic escherichia coli,ETEC)引起的腹泻[1].由于是经口传播... 详细信息

细菌性腹泻是常见的肠道传染病,广泛流行于世界各地.据统计,全球年腹泻病人达30亿左右,我国年发病约8亿多人次,死亡率达0.02‰,其中最常见的是由肠毒索性大肠杆菌(Enterotoxigenic escherichia coli,ETEC)引起的腹泻[1].由于是经口传播,所以常因食品或水源污染导致爆发性流行,特别是在自然灾害和战争时期更不易避免和控制,同时由于滥用抗菌药物而导致有耐药性细菌的大量增长,所以研制有效的疫苗加强免疫预防是迫切需要解决的公共卫生问题,但是目前还没有一种行之有效的ETEC疫苗[2-7].

关键词：肠毒素性大肠杆菌疫苗研制

重组人GM-CSF/MCAF融合蛋白的变性、复性及纯化研究

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生物工程学报 1996年第4期12卷 434-439页

作者：叶棋浓苏国富黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100071

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM-CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过... 详细信息

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM-CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS-PAGE纯的rhGM-CSF/MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM-CSF/MCAF能分别与GM-CSF和MCAF抗体发生特异反应。

关键词：融合蛋白重组 GM-CSF/MCAF 变性复性纯化

逆转录病毒载体介导人GM－CSF基因转染肿瘤细胞

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中国免疫学杂志 1996年第5期12卷 286-289页

作者：隋拥君苏国富叶棋浓军事医学科学院生物工程研究所

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）介导人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒收获液... 详细信息

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）介导人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒收获液感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ１测活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤细胞中获得稳定高效表达。为进─步建立ＧＭ－ＣＳＦ的转基因治疗模型提供了基础。

关键词：逆转录病毒载体载体 GM-CSF 基因表达肿瘤细胞

长双歧杆菌NCC2705菌株应激蛋白的研究

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微生物学报 2006年第3期46卷 390-396页

作者：袁静朱力冯尔玲王恒樑黄翠芬苏国富军事医学科学院生物工程研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

研究长双歧杆菌NCC2705菌株发酵至稳定期时应激蛋白的表达情况。根据乳酸乳球菌IL1403菌株蛋白质参考图谱及长双歧杆菌NCC2705基因组注释中应激蛋白的分子量与等电点,确定应激蛋白在双向电泳凝胶上的相应蛋白点,并利用MALDI-TOF和/或ESI... 详细信息

研究长双歧杆菌NCC2705菌株发酵至稳定期时应激蛋白的表达情况。根据乳酸乳球菌IL1403菌株蛋白质参考图谱及长双歧杆菌NCC2705基因组注释中应激蛋白的分子量与等电点,确定应激蛋白在双向电泳凝胶上的相应蛋白点,并利用MALDI-TOF和/或ESI-MS/MS对相应蛋白质点进行鉴定。每个蛋白质点的肽指纹图谱均在长双歧杆菌NCC2705的蛋白质数据库用Mascot进行检索,共鉴定到44个蛋白点对应8个应激蛋白。这些蛋白为亲水性酸性蛋白,大多具有翻译后修饰现象,它们基因的CAI值除DnaJ外,其余均在0.5以上,在全细胞表达谱中为高丰度蛋白;此外,菌体具有较强的抗脂质过氧化和清除DPPH自由基的能力,而对羟自由基和超氧负离子的清除力较弱,推测鉴定到的具有逆转氧化损害作用的碱性过氧化氢还原酶(ahpC)可能是体内表达的降低氧损伤的主要酶。

关键词：长双歧杆菌NCC2705 应激蛋白双向电泳 MALDI-TOF ESI-MS/MS

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嵌入式技术在篦冷机远程监控中的应用

电气应用 2013年第4期32卷 70-73页

作者：张晓明苏国富沈阳水泥机械有限公司

在篦冷机传统的“三元控制”基础上，结合篦冷机使用过程中发生的事故，运用嵌入式方法，在篦冷机及其附属设备的关键部位安置传感检测元件。监督、控制篦冷机的运行情况。并将运行情况及时反映到DCS控制系统。也可通过3G无线网络。快... 详细信息

在篦冷机传统的“三元控制”基础上，结合篦冷机使用过程中发生的事故，运用嵌入式方法，在篦冷机及其附属设备的关键部位安置传感检测元件。监督、控制篦冷机的运行情况。并将运行情况及时反映到DCS控制系统。也可通过3G无线网络。快速地将现场采集到的数据传输到远程计算机系统。

关键词：嵌入式篦冷机远程监控