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作者：苏传丽广西医科大学

学位级别：硕士

目的肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐步上升的趋势,严重危害人民的健康。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)和相应的肿瘤坏死因子受体(tumornecrosis factor receptor,TNFR)结合,转导凋亡信号进入靶细胞,使靶细胞发生凋亡,是机体免疫系统清除肿瘤细胞的常见方式,而肿瘤细胞表达死亡因子的诱捕受体是肿瘤逃避机体免疫杀伤的机制之一。近年来新发现的TNFR超家族成员DcR3通过影响FasL、LIGHT和TL1A的促凋亡作用和免疫调节作用而抑制机体的抗肿瘤免疫,与肿瘤的发生、发展相关。研究表明HCC组织存在DcR3的过表达,影响HCC细胞的凋亡,且HCC患者DcR3的表达水平与肿瘤的TNM分期、浸润或转移有关。这些研究结果提示,若能抑制DcR3的表达则有助于阻抑肿瘤的发展与浸润转移。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由与靶基因序列同源的双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)启动的一种序列特异性的转录后基因沉默机制,其介导子是21—25nt的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA),由细胞内的dsRNA特异性核酸内切酶(dsRNA specific endonuclease,Dicer)酶切产生。由于siRNA具有特异性高、抑制作用强、稳定性高、细胞摄取相对容易等优点,因此,RNAi技术目前已经被广泛应用于基因功能研究和基因治疗方面。本研究拟通过RNA干扰技术抑制HCC细胞系HepG2中DcR3的表达,检测DcR3干扰后HepG2细胞增殖、凋亡、迁移等生物学特性的改变,从而探讨DcR3在HCC发生发展与浸润转移中的作用。材料与方法 1.应用RT-PCR方法检测人HCC细胞系HepG2、癌旁肝细胞系QSG-7701及正常肝细胞系HL-7702中DcR3的表达情况。 2.设计并合成针对DcR3基因的特异性siRNA,采用阳离子脂质体转染试剂Lipofectamine2000将siRNA转染至高表达DcR3的HCC细胞系HepG2,通过荧光显微镜下观察和应用流式细胞仪鉴定和检测转染效率。 3.应用半定量RT-PCR方法筛选有效的靶序列,将筛选出的有效靶序列转染HepG2细胞,免疫细胞化学法检测其对HepG2细胞DcR3蛋白表达的影响。 4.应用MTT法检测细胞增殖能力的改变。 5.应用流式细胞仪测细胞周期的变化。 6.应用流式细胞仪、DNA ladder方法检测细胞的凋亡情况。 7.通过划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化。结果 1.人HCC细胞系HepG2细胞中DcR3 mRNA呈现高表达,而癌旁肝细胞系QSG-7701和正常肝细胞系HL-7702细胞中无DcR3 mRNA表达。 ***2000能有效地将siRNA转染至细胞内,转染效率约为85%。 3.各特异性DcR3-siRNA均有抑制DcR3 mRNA表达的作用,其中以siRNA4的作用更明显,干扰作用达62.9%,siRNA1、siRNA2、siRNA3的干扰作用分别为60.7%、32.1%、23.0%;转染siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4组的DcR3 mRNA表达与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05);脂质体转染组及非特异性siRNA转染组对DcR3 mRNA的表达无影响,与空白对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05)。选择抑制作用最明显的siRNA4转染HepG2细胞作为特异性组进行后续实验。免疫细胞化学结果显示,空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞DcR3蛋白呈阳性表达(++--+++),特异性DcR3-siRNA4转染组细胞蛋白呈阴性或弱阳性表达(---+),特异性DcR3-siRNA4转染组与前三组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。 ***实验:转染后24h、48h及96h特异性DcR3-siRNA4转染组细胞吸光度值明显低于空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组,差异有统计学意义(P＜0.001)。特异性DcR3-siRNA4转染组细胞的增殖抑制率在24h、48h及96h分别为20.71%、35.00%和34.04%。 5.流式细胞仪测细胞周期:特异性DcR3-siRNA4转染组与空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞相比,G1期细胞比例增多而G2/M期细胞比例减少,差异有统计学意义(P＜0.01)。 6.流式细胞仪检测细胞凋亡的结果显示,特异性DcR3-siRNA4转染组细胞凋亡率为(22.97±2.10)%,明显高于空白对照组(1.17±0.3

关键词： DcR3 肝细胞癌 RNAi 凋亡增殖转移

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小干扰RNA靶向抑制DcR3基因对肝癌细胞凋亡和迁移的影响

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世界华人消化杂志 2013年第27期21卷 2772-2779页

作者：苏传丽罗殿中陈罡覃新干广西医科大学病理学教研室广西医科大学第一附属医院病理科广西壮族自治区南宁市530021 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西壮族自治区南宁市530021

目的:应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达,并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.方法:设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条,转染HepG2细胞,通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细... 详细信息

目的:应用RNA干扰技术抑制人肝细胞癌细胞系HepG2细胞DcR3表达,并研究DcR3基因沉默后对HepG2细胞凋亡和迁移能力的影响.方法:设计并合成特异性DcR3-siRNA 4条和阴性对照siRNA 1条,转染HepG2细胞,通过半定量反转录-PCR(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测其对DcR3表达的抑制作用并筛选出干扰效果最强的siRNA,应用流式细胞仪、DNA ladder方法检测细胞的凋亡情况,应用划痕实验检测细胞体外迁移能力的变化.结果:各特异性DcR3-siRNA均能抑制DcR3mRNA表达(P<0.05),其中以DcR3-siRNA4的抑制作用最明显,抑制作用达62.9%;将DcR3-siRNA4转染HepG2细胞能明显抑制HepG2细胞DcR3蛋白的表达(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的凋亡率(22.97%±2.10%)明显高于空白对照组(1.17%±0.32%)、脂质体转染组(1.44%±0.43%)和非特异性siRNA转染组(1.22%±0.40%)(均P<0.001);DNA ladder实验发现特异性DcR3-siRNA转染组出现DNAladder,而空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组均未出现DNA ladder.划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组和非特异性siRNA转染组.结论:DcR3在肝癌细胞的凋亡及迁移中发挥重要作用,抑制DcR3的表达能诱导肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞的迁移能力.

关键词： DcR3 肝细胞癌 RNAi 凋亡迁移

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p14^(ARF)、ARF-BP1、c-myc在肝细胞癌中的表达及意义

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广西医科大学学报 2007年第4期24卷 528-531页

作者：覃新干吕自力林静苏传丽罗殿中广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021 广西医科大学病理学教研室

目的:探讨肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的表达及意义。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、免疫组化技术对45例HCC组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA表达和p14ARF、c-myc蛋白表达情况进行检测。结果:p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA在HCC组织中阳性表达分别为80.00%、86.67%、84.44%,在癌旁肝组织中分别为11.11%、20.00%、53.33%,三者的mRNA在癌组织中呈过表达,明显高于癌旁肝组织(P<0.01)。p14ARF、c-myc蛋白在HCC组织中表达分别为78.38%、75.68%,明显高于癌旁肝组织的13.51%(P<0.01)和51.35%(P<0.05)。结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc在HCC组织中高表达,这种高表达可能与HCC的发生有相关性。

关键词： p14^ARF ARF-BP1 c-myc 肝细胞癌逆转录-聚合酶链反应免疫组织化学

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高性能聚酰亚胺纤维及其可织造性能

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纺织学报 2018年第5期39卷 14-19页

作者：林芳兵蒋金华陈南梁杜晓冬苏传丽东华大学产业用纺织品教育部工程研究中心上海201620 东华大学纺织学院上海201620

为推进高性能聚酰亚胺纤维在纺织材料领域的应用发展,分析了5种商业化聚酰亚胺纤维的微观结构和力学性能,并通过全自动剑杆小样织机对其可织造性能进行了研究。借助红外光谱仪、X射线衍射仪、扫描电子显微镜、纤维强伸度仪和纱线抱合力... 详细信息

为推进高性能聚酰亚胺纤维在纺织材料领域的应用发展,分析了5种商业化聚酰亚胺纤维的微观结构和力学性能,并通过全自动剑杆小样织机对其可织造性能进行了研究。借助红外光谱仪、X射线衍射仪、扫描电子显微镜、纤维强伸度仪和纱线抱合力机对纤维的结构和性能进行表征。结果表明:5种聚酰亚胺纤维中强度及模量最高纤维的亚胺化程度为97.26%,结晶度为19.27%,取向度为0.92,以上结构参数赋予其优异的力学性能,其强度和模量分别为2 239.24 MPa和56.62 GPa,但伸长率较小,仅为4.03%;该纤维表面光滑、致密、具有明显的原纤结构,但耐磨性差,对其织造性能和织物表观形貌具有一定影响。

关键词：聚酰亚胺纤维微观结构力学性能织造性能

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特异性DcR3-siRNA对肝细胞癌生物学特性的影响

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临床与实验病理学杂志 2013年第12期29卷 1288-1293页

作者：苏传丽罗殿中陈罡覃新干广西医科大学病理学教研室南宁530021 广西医科大学第一附属医院病理科南宁530021 广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021

目的探讨特异性诱捕受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对HepG2细胞生物学特性的影响。方法设计并合成针对DcR3的siRNA,用脂质体转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR及免疫细胞化学法检测其对DcR3表达的抑制作用;应用MTT法、流式细胞术、... 详细信息

目的探讨特异性诱捕受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对HepG2细胞生物学特性的影响。方法设计并合成针对DcR3的siRNA,用脂质体转染HepG2细胞,通过半定量RT-PCR及免疫细胞化学法检测其对DcR3表达的抑制作用;应用MTT法、流式细胞术、划痕实验检测转染后HepG2细胞增殖、凋亡及迁移能力的变化。结果特异性DcR3-siRNA能抑制DcR3 mRNA和蛋白表达(P<0.05);MTT实验结果:转染后24、48和72 h特异性DcR3-siRNA转染组细胞吸光度值低于空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组(P<0.001),特异性DcR3-siRNA转染组细胞的增殖抑制率在24、48和72 h分别为20.71%、35.00%和34.04%;转染后72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞与空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞相比,G1期细胞比例增多而G2/M期细胞比例减少(P<0.01);流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,特异性DcR3-siRNA转染组细胞凋亡率(22.97%±2.10%)高于空白对照组(1.17%±0.32%)、脂质体转染组(1.44%±0.43%)及非特异性siRNA转染组(1.22%±0.40%)(P<0.001);划痕实验结果显示,转染后24、48和72 h,特异性DcR3-siRNA转染组细胞的相对迁移率均低于空白对照组、脂质体转染组及非特异性siRNA转染组细胞(P<0.001)。结论特异性DcR3-siRNA能有效抑制肝癌细胞系HepG2的DcR3表达,诱导细胞凋亡,并能抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力。

关键词：肝肿瘤 RNAi DcR3 增殖凋亡迁移

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尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义

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中国现代医学杂志 2007年第21期17卷 2600-2604页

作者：林静廖芝玲罗殿中苏传丽广西医科大学病理学教研室广西南宁530021

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)、基质金属蛋白酶(MMP-9)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法用RT-PCR和免疫组织化学法检测45例肝细胞癌及其癌旁组织u-PA和MMP-9的mRNA及蛋白表达,7例肝血管瘤旁肝组织作为对照组。结果肝癌组... 详细信息

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)、基质金属蛋白酶(MMP-9)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法用RT-PCR和免疫组织化学法检测45例肝细胞癌及其癌旁组织u-PA和MMP-9的mRNA及蛋白表达,7例肝血管瘤旁肝组织作为对照组。结果肝癌组织中u-PA和MMP-9mRNA阳性率均为100%(45/45);其对应的癌旁组和对照组的阳性率分别为84.44%(38/45)、28.57%(2/7)和86.67%(39/45)、57.14%(4/7);三组比较差异均有显著性(P0.05)。结论肝细胞癌中的u-PA和MMP-9mRNA及蛋白的高表达与肝癌的侵袭转移有关;检测u-PA和MMP-9有助于判断肝细胞癌的预后。

关键词：肝细胞癌尿激酶型纤溶酶原激活物基质金属蛋白酶-9 转移

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p14^(ARF)、ARF-BP1及c-myc mRNA在肝细胞癌中的表达及临床意义

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世界华人消化杂志 2008年第23期16卷 2656-2660页

作者：覃新干罗殿中吕自力林静苏传丽广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科广西壮族自治区南宁市530021 广西医科大学病理教研室广西壮族自治区南宁市530021

目的:探讨肝细胞癌组织中p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达及其与临床参数关系.方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对52例HCC组织及其中45例相应癌旁组织p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达丰度进行检测并分析他们之间... 详细信息

目的:探讨肝细胞癌组织中p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达及其与临床参数关系.方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,对52例HCC组织及其中45例相应癌旁组织p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达丰度进行检测并分析他们之间的关系及其与临床参数的关系.结果:在52例HCC组织中p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA各表达77.0%、77.0%和75.0%,与45例相应癌旁组织(11.1%、20.0%、53.3%)比较,呈高表达.p14ARF、ARF-BP1mRNA的表达与肿瘤大小有关(t=2.169,2.087,均P<0.05);而c-mycmRNA表达与肿瘤大小无关.p14ARF、ARF-BP1及c-myc的mRNA表达在性别、年龄、AFP、临床病理分级、浸润转移、HBV、包膜等无统计学差异.p14ARF与ARF-BP1、p14ARF与c-myc及ARF-BP1与c-myc的mRNA表达两两成正相关(r=0.565,0.436,0.584,均P<0.01).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc过度表达可能是HCC发生的早期指标;ARF-BP1过度表达可能是影响HCC发生、发展的关键,干预ARF-BP1可能是治疗HCC的新途径.

关键词： p14^ARF^ ARF-BP1 c-myc 肝细胞癌逆转录-聚合酶链式反应

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不同证型特应性皮炎患者皮损microRNAs表达谱的研究

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南京中医药大学学报 2017年第1期33卷 14-18页

作者：吴志洪苏传丽钟江黄涛徐张杰岳天天广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的探讨特应性皮炎(AD)患者皮损中炎症相关microRNAs及趋化因子的表达水平与其中医证型的关联。方法 AD患者79例辨证分型(湿热内蕴、脾虚湿盛、血虚风燥)后,分别采用qPCR和免疫组化法检测皮损标本中的5个炎症相关microRNAs及趋化因子... 详细信息

目的探讨特应性皮炎(AD)患者皮损中炎症相关microRNAs及趋化因子的表达水平与其中医证型的关联。方法 AD患者79例辨证分型(湿热内蕴、脾虚湿盛、血虚风燥)后,分别采用qPCR和免疫组化法检测皮损标本中的5个炎症相关microRNAs及趋化因子的表达情况,并对不同证型皮损中microRNAs差异表达的免疫调节作用进行分析。结果湿热内蕴组中miR-21相对表达量上调而miR-125b下降明显,两者与血虚风燥组及正常对照组相比差异均有显著性意义(P0.05);此时皮损中表达最高的是CTACK/CCL27分子,散在分布于表皮与真皮,RANTES/CCL5与湿热内蕴组相比亦表达上调。血虚风燥组中miR-146a的表达水平有所上调,与湿热内蕴组及正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);RANTES/CCL5表达增高,明显高于湿热内蕴组(P<0.01);TARC/CCL17分子与脾虚湿盛组相比亦有所上调。结论 microRNAs分子表达谱在AD不同证型患者皮损中存在差异表达,其介导的不同免疫炎症组织损伤可能是AD不同临床表现的物质基础。

关键词：特应性皮炎 microRNAs 表达谱趋化因子

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土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣皮损microRNA表达的影响

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西部中医药 2016年第10期29卷 1-4页

作者：苏传丽吴志洪钟江郑恩金黄涛岳天天广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的:探讨土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣(CA)皮损标本中micro RNA分子表达谱的影响。方法:以39例CA患者为观察组,使用土龙祛疣洗剂熏洗治疗,6周后观察疗效。以同期自本院外科就诊的10例行包皮环切患者为对照组,取其正常包皮组织。采用q RT-PC... 详细信息

目的:探讨土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣(CA)皮损标本中micro RNA分子表达谱的影响。方法:以39例CA患者为观察组,使用土龙祛疣洗剂熏洗治疗,6周后观察疗效。以同期自本院外科就诊的10例行包皮环切患者为对照组,取其正常包皮组织。采用q RT-PCR检测2组5个炎症相关micro RNA(mi R-21、mi R-203、mi R-125b、mi R-146a和mi R-155)的表达情况。结果:39例CA患者治疗6周后27例皮损消退明显,症状减轻,总有效率为69.2%;观察组mi R-203与正常对照组相比呈现低表达,土龙祛疣洗剂治疗后呈现明显上调,差异有统计学意义(P<0.01);mi R-21治疗后表达量与治疗前相比则下调明显(P<0.05);而mi R-155、mi R-125b、mi R-146a分子在治疗前后无明显变化。结论:土龙祛疣洗剂治疗尖锐湿疣疗效肯定,可能通过下调mi R-21和上调mi R-203分子来发挥抗病毒的治疗作用。

关键词：尖锐湿疣人类乳头瘤病毒土龙祛疣洗剂 microRNA分子

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红花逍遥片对血虚风燥型特应性皮炎患者免疫因子影响的研究

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实用中西医结合临床 2015年第10期15卷 10-13页

作者：苏传丽吴志洪钟江黄涛徐张杰岳天天广西中医药大学第一附属医院皮肤科南宁530023

目的:观察红花逍遥片治疗血虚风燥型特应性皮炎(AD)的临床效果及对患者血液中免疫因子水平的影响。方法:85例血虚风燥型AD患者随机分为治疗组和对照组,两组均采用甘草润肤洗剂外用治疗,治疗组43例加用红花逍遥片治疗,对照组42例加用氯... 详细信息

目的:观察红花逍遥片治疗血虚风燥型特应性皮炎(AD)的临床效果及对患者血液中免疫因子水平的影响。方法:85例血虚风燥型AD患者随机分为治疗组和对照组,两组均采用甘草润肤洗剂外用治疗,治疗组43例加用红花逍遥片治疗,对照组42例加用氯雷他定颗粒治疗。应用ELISA法检测两组血清TNF-a、IL-17A、IL-23、TGF-β1水平;应用q RT-PCR方法检测外周血浆趋化因子MDC/CCL22、TARC/CCL17、CTACK/CCL27、RANTES/CCL5和CXCL10/IP-10 m RNA的表达。结果:6周后治疗组临床基本治愈26例,显效10例,好转5例,无效2例,总有效率83.7%,对照组临床基本治愈5例,显效19例,好转10例,无效8例,总有效率为57.1%,两组相比差异具有显著性意义(u=4.1731)。治疗组治疗前血清IL-17A为(68.32±13.47)pg/ml,治疗后为(20.56±15.51)pg/ml,其表达水平下调明显,且与CXCL10/IP-10分子呈正直线相关(r=0.5218,P<0.05);IL-23、TARC/CCL17治疗后表达水平明显下调,但与IL-17A及CXCL10/IP-10无明显相关性;而TNF-a、TGF-β1和其他趋化因子治疗前后变化不明显。结论:红花逍遥片联合甘草润肤洗剂可以负向调控CXCL10/IP-10和IL-17A的表达从而影响表皮角化过程,这可能在其对特应性皮炎患者的治疗中起重要作用。

关键词：特应性皮炎红花逍遥片血虚风燥趋化因子

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