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导致狐狸重症腹泻疫情的新型犬冠状病毒的发现与鉴定

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Science Bulletin 2023年第21期68卷 2598-2606,M0006页

作者：刘雨婷邓瑶牛胜朱娜宋敬东张晓爽苏伟婷佴文慧陆柔剑 David MIrwin 高福王文玲王奇慧谭文杰张树义 College of Animal Science and Veterinary Medicine Shenyang Agricultural UniversityShenyang 110866China NHC Key Laboratory of Biosafety National Institute for Viral Disease Control and PreventionChinese Center for Disease Control and PreventionBeijing 102206China College of Veterinary Medicine Shanxi Agricultural UniversityJinzhong 030801China National Key Laboratory of Intelligent Tracking and Forecasting for Infectious Diseases National Institute for Viral Disease Control and PreventionChinese Center for Disease Control and PreventionBeijing 102206China Tianjin Zoo Tianjin 300381China Kunming Cell Bank State Key Laboratory of Genetic Resources and EvolutionKunming Institute of ZoologyChinese Academy of SciencesKunming 650223China Department of Laboratory Medicine and Pathobiology University of TorontoToronto ON M5S 1A8Canada CAS Key Laboratory of Pathogen Microbiology and Immunology Institute of MicrobiologyChinese Academy of SciencesBeijing 100101China School of Laboratory Medicine and Life Sciences Wenzhou Medical UniversityWenzhou 325035China

2019年末,中国东北地区狐狸群中暴发大规模疫情,发病狐狸表现出急性腹泻症状,并出现大量狐狸死亡.通过对该疫源地发病狐狸肛拭子、血液与发病组织的检测分析,获得了多条全长新型犬冠状病毒(CCoV)基因组序列,研究团队将该病毒命名为VuCC... 详细信息

2019年末,中国东北地区狐狸群中暴发大规模疫情,发病狐狸表现出急性腹泻症状,并出现大量狐狸死亡.通过对该疫源地发病狐狸肛拭子、血液与发病组织的检测分析,获得了多条全长新型犬冠状病毒(CCoV)基因组序列,研究团队将该病毒命名为VuCCoV,并确认VuCCoV是引起该疫情的病原.进一步分析表明,VuCCoV基因组的4个结构基因(S,E,M,N)中的3个(E,M,N)与犬冠状病毒(CCoV)对应基因具有超过90%的核苷酸同一性,但S基因核苷酸序列表现出较大的差异.VuCCoV的RNA依赖的RNA聚合酶与蝙蝠冠状病毒PB025的对应蛋白仅存在2~3个氨基酸差异,系统进化分析提示VuCCoV很可能来源于蝙蝠.表面等离子体共振分析实验表明,VuCCoV刺突蛋白受体结合区(RBD)可与犬和狐狸的氨肽酶N(APN)结合,但不与人APN结合,假病毒感染及病毒分离培养实验进一步证实该VuCCoV不易感染人源细胞.蝙蝠等野生动物宿主的病毒跨物种传播对人类和家畜健康构成了显著威胁,VuCCoV的发现和溯源证实蝙蝠作为疫情出现的潜在驱动因素的重要性.积极监控蝙蝠及其他犬科动物中的病毒感染,发现、鉴定对人兽健康构成潜在威胁的新型冠状病毒并研究其进化变异特征与感染特性,对于防控新发人兽共患传染病、建设国家生物安q全体系具有重要意义.

关键词：犬冠状病毒人兽共患传染病病毒感染表面等离子体共振犬科动物动物宿主氨肽酶N 狐狸

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朱鹮细胞系的建立及其生物学特性观察

Zoological Research 2012年第6期33卷 591-596页

作者：王金焕苏榕苏伟婷成诚魏曙光丁海华段英李生斌佴文惠中国科学院昆明动物研究所、遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 西安交通大学法医学院陕西西安710061 国家林业总局陕西省林业厅陕西西安710082

濒危级生物朱鹮是朱鹮属的唯一物种。为保藏朱鹮的遗传资源并为开展其相关生物学研究提供方便的实验材料,利用采自雌、雄两只成年朱鹮的皮肤样品,成功建立了两株朱鹮的细胞系。两株细胞系的形态均为典型的成纤维样细胞;免疫荧光染色检... 详细信息

濒危级生物朱鹮是朱鹮属的唯一物种。为保藏朱鹮的遗传资源并为开展其相关生物学研究提供方便的实验材料,利用采自雌、雄两只成年朱鹮的皮肤样品,成功建立了两株朱鹮的细胞系。两株细胞系的形态均为典型的成纤维样细胞;免疫荧光染色检测显示细胞强表达平滑肌特异α-actin,表明两株细胞均来源于血管平滑肌组织;生长特性分析显示细胞增殖能力在10代以前较强,在15代以后逐渐减弱,25代以后则生长缓慢,难以生成单层细胞;染色体分析显示,两株细胞系均为正常二倍体,核型为2n=68,ZZ(♂),ZW(♀)。该研究首次报道了朱鹮染色体的Ag带、C带和G带,并通过带型分析和荧光原位杂交鉴别了朱鹮的性染色体。该文建系所用的皮肤组织块贴壁种植法,可以应用于其他鸟类,特别是珍稀濒危鸟类细胞系的建立。

关键词：朱鹮细胞培养生长特征染色体带型

蹄蝠科的核型进化:比较染色体涂色、G带和C带分析(英文)

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Zoological Research 2010年第5期31卷 453-460页

作者：毛秀光王金焕苏伟婷王应祥杨凤堂佴文惠中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 Wellcome Trust Sanger Institute Wellcome Trust Genome Campus

与其姐妹科(菊头蝠科)相比,蹄蝠科的细胞遗传学研究较少。迄今为止,仅少数蹄蝠科几个物种有高分辨率的G带核型报道,且有关该科核型进化的大多数结论都是基于常规Giemsa染色研究而得。该研究利用三叶小蹄蝠的染色体特异探针,通过比较染... 详细信息

与其姐妹科(菊头蝠科)相比,蹄蝠科的细胞遗传学研究较少。迄今为止,仅少数蹄蝠科几个物种有高分辨率的G带核型报道,且有关该科核型进化的大多数结论都是基于常规Giemsa染色研究而得。该研究利用三叶小蹄蝠的染色体特异探针,通过比较染色体涂色、G和C显带,建立了5种蹄蝠的染色体同源性图谱,并探讨了它们同源染色体间的G和C带异同。结果表明:罗伯逊易位、臂内倒位以及异染色质的扩增可能是蹄蝠科物种核型进化的主要机制。通过对这5种蹄蝠物种及其外群物种之间的同源染色体片段的比较分析,作者推测蹄蝠科的祖先核型并不像先前认为的全由端着丝粒染色体组成,而应该含有中着丝粒染色体。

关键词：比较染色体涂色罗伯逊易位臂内倒位蹄蝠科翼手目

利用相互染色体涂色技术分析两株人肺腺癌细胞系(A549和GLC-82)的核型特征(英文)

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Zoological Research 2010年第2期31卷 113-121页

作者：彭昆靖王金焕苏伟婷王熙才杨凤堂佴文惠中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 昆明医学院第三附属医院云南省肿瘤医院/省肿瘤研究所云南昆明650118 Wellcome Trust Sanger Institute Wellcome Trust Genome CampsHinxtonCambridgeCB101SAUK

肺癌是全世界癌症死亡中的一个主要的原因。除吸烟外,一些肺癌患者的发病与氡气污染相关。该研究采用包括染色体分选、正向和反向染色体涂色技术,分析了两株肺腺癌细胞系A549和GLC-82的核型特征。A549和GLC-82细胞系都属于非小细胞肺癌... 详细信息

肺癌是全世界癌症死亡中的一个主要的原因。除吸烟外,一些肺癌患者的发病与氡气污染相关。该研究采用包括染色体分选、正向和反向染色体涂色技术,分析了两株肺腺癌细胞系A549和GLC-82的核型特征。A549和GLC-82细胞系都属于非小细胞肺癌细胞系,但诱因不同,后者来源于一个长期生活在氡气污染环境肺癌病人的癌组织。染色体涂色结果表明,这两株肺癌细胞系发生了复杂的染色体重排。在A549和GLC-82细胞系中,除正常染色体拷贝数变化外,还分别存在13条和24条畸变染色体。约一半的畸变染色体是通过非相互易位形成的,其余的畸变染色体则是通过一些正常染色体的片段缺失或重复而产生的。尽管这两株肺癌细胞系都没有共同的畸变染色体,但它们似共享两个染色体易位断裂点:HSA8q24和12q14。

关键词：肺腺癌细胞系染色体分选染色体涂色细胞遗传学特征

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

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临床皮肤科杂志 2008年第7期37卷 434-437页

作者：严慧邓丹琪王金焕苏伟婷樊应俊昆明医学院第二附属医院皮肤科中国科学院昆明动物所细胞分子遗传学实验室云南昆明650223

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响。方法:采用45.00mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细... 详细信息

目的:为探讨蒿甲醚治疗光敏性皮肤病的机制,观察一定剂量的中波紫外线(UVB)照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞活性的影响及其表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响。方法:采用45.00mJ/cm2剂量UVB照射培养的永生化HaCaT角质形成细胞,以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及免疫组化检测紫外线照射及经羟氯喹和蒿甲醚处理后HaCaT细胞活性变化及其Fas和Bcl-2蛋白水平的变化。结果:①羟氯喹及小剂量(≤50mg/L)蒿甲醚对细胞活性影响不明显,而≥100mg/L蒿甲醚增加细胞活性,但浓度超过200mg/L,可见大量细胞悬浮于培养液上;②与未照射组相比UVB照射可使HaCaT细胞表达Fas增加;③与UVB组相比,UVB+羟氨喹(Q)组、UVB+25mg/L蒿甲醚(H1)组、UVB+50mg/L蒿甲醚(H2)组、UVB+100mg/L蒿甲醚(H3)组使HaCaT细胞表达Fas减少;④与未照射组相比,UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;⑤与UVB组相比,UVB+Q组、UVB+H1组、UVB+H2组、UVB+H3组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加。结论:小剂量(25mg/L、50mg/L、100mg/L)蒿甲醚可以抑制HaCaT细胞凋亡,具有一定的保护作用。蒿甲醚可能通过影响与凋亡相关的Fas和Bcl-2表达,减少紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡。

关键词：蒿甲醚紫外线 HaCaT细胞 Fas Bcl-2

利用流式细胞分离法和DOP-PCR技术制备人与其他六种哺乳动物的染色体特异探针

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利用流式细胞分离法和DOP-PCR技术制备人与其他六种哺乳动物的染...

中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：王金焕佴文惠苏伟婷杨凤堂中国科学院昆明动物研究所细胞与分子进化重点实验室

流式细胞分离法是目前从中期细胞中大量获取染色体特异DNA常用的方法。利用流式细胞分离仪可根据各条染色体的AT/GC碱基对比例的不同和DNA含量的差异,把Hoechst33258和Chromomycin A3荧光染料处理过的染色体分离开来。分选所得到的染色... 详细信息

流式细胞分离法是目前从中期细胞中大量获取染色体特异DNA常用的方法。利用流式细胞分离仪可根据各条染色体的AT/GC碱基对比例的不同和DNA含量的差异,把Hoechst33258和Chromomycin A3荧光染料处理过的染色体分离开来。分选所得到的染色体,经过DOP-PCR(Degenerate Oligonucleotide-Primed PCR)扩增和荧光素标记,可制备成为染色体特异的DNA探针。本研究利用双激光流式细胞分离仪和DOP-PCR技术,在国内首次成功地制备

关键词：染色体分选 DOP-PCR 染色体特异探针

来源： cnki会议评论

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中国貂与狗的比较染色体图谱的建立

中国貂与狗的比较染色体图谱的建立

黑麂和费氏麂四种卫星DNA的克隆特征和染色体定位(英文)

中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：佴文惠王金焕苏伟婷杨凤堂中国科学院细胞与分子进化重点实验室

利用一套家狗(Canis familiaris)的染色体特异探针通过荧光原位杂交建立了中国貂(Nectereutes procyonoides procyonoides)与狗的比较染色体图谱。在中国貂的单倍核型中,一共检测到41个与狗38条常染色体同源的保守的染色体片段。其中狗... 详细信息

利用一套家狗(Canis familiaris)的染色体特异探针通过荧光原位杂交建立了中国貂(Nectereutes procyonoides procyonoides)与狗的比较染色体图谱。在中国貂的单倍核型中,一共检测到41个与狗38条常染色体同源的保守的染色体片段。其中狗的1、13和19号染色体特异探针,每一条分别与中国貂的两个染色体片段杂交;狗的15条常染色体特异探针(2,4,6,7,8,11,12,15,16,17,18,20,21,22,23),分别与中国貂的一条染色体杂交;其余的狗常染色体特异

关键词：中国貂狗比较染色体图谱

来源： cnki会议评论

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动物学研究（英文） 2008年第3期29卷 225-235页

作者：刘妍佴文惠黄玲王金焕苏伟婷 LIN Chyi Chyang 杨凤堂中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化重点实验室 Department of Medical Research China Medical University Hospital

近年来,分子细胞遗传学研究已基本证实了染色体的串联融合(端粒-着丝粒融合)是麂属动物核型演化的主要重排方式。尽管染色体串联融合的分子机制还不清楚,但通过染色体的非同源重组,着丝粒区域的卫星DNA被认为可能介导了染色体的融合。... 详细信息

近年来,分子细胞遗传学研究已基本证实了染色体的串联融合(端粒-着丝粒融合)是麂属动物核型演化的主要重排方式。尽管染色体串联融合的分子机制还不清楚,但通过染色体的非同源重组,着丝粒区域的卫星DNA被认为可能介导了染色体的融合。以前的研究发现在赤麂和小麂染色体的大部分假定的串联融合位点处存在着非随机分布的卫星DNA。然而在麂属的其他物种中,这些卫星DNA的组成以及在基因组中的分布情况尚未被研究。本研究从黑麂和费氏麂基因组中成功地克隆了4种卫星DNA(BMC5、BM700、BM1.1k和FM700),并分析了这些卫星克隆的特征以及在小麂、黑麂、贡山麂和费氏麂染色体上的定位情况。结果表明,卫星I和IIDNA(BMC5,BM700和FM700)的信号除了分布在这些麂属动物染色体的着丝粒区域外,也间隔地分布在这些物种的染色体臂上。其研究结果为黑麂、费氏麂和贡山麂的染色体核型也是从一个2n=70的共同祖先核型通过一系列的串联融合进化而来的假说提供了直接的证据。

关键词：荧光原位杂交定位卫星DNA 麂属染色体串联融合

熊猴存在TRIM5/TRIMCyp杂合子基因型

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Zoological Research 2011年第1期32卷 40-49页

作者：曹光佴文惠刘丰亮况轶群王金焕苏伟婷郑永唐中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院研究生院北京100049 遗传资源与进化国家重点实验室中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223 中国科学院昆明灵长类研究中心中国科学院昆明动物研究所云南昆明650223

缺乏合适的动物模型是制约艾滋病研究取得重大突破的关键瓶颈之一。细胞内的抗病毒蛋白被称为限制因子。研究不同灵长类动物抗HIV-1宿主限制因子的存在形式及作用机制对建立合适AIDS灵长类动物模型有十分重要的意义。TRIM5α是哺乳动物... 详细信息

缺乏合适的动物模型是制约艾滋病研究取得重大突破的关键瓶颈之一。细胞内的抗病毒蛋白被称为限制因子。研究不同灵长类动物抗HIV-1宿主限制因子的存在形式及作用机制对建立合适AIDS灵长类动物模型有十分重要的意义。TRIM5α是哺乳动物细胞中一种重要和关键的限制因子,它以物种依赖的方式限制包括HIV-1在内的逆转录病毒的感染。TRIM5-CypA融合基因是存在于新大陆猴与旧大陆猴中的一种独特的TRIM5基因形式。为了研究不同灵长类动物TRIM5基因的存在方式,该文对熊猴、藏酋猴、红面猴及中国恒河猴4个物种共110只灵长类动物进行了TRIM5-CypA融合模式的研究。首次发现熊猴也存在TRIM5-CypA基因融合现象。熊猴TRIMCyp融合基因形成模式类似于北平顶猴TRIMCyp融合基因模式,即CypA假基因的cDNA序列通过逆转座方式插入到TRIM5基因的3'-UTR区域。基因序列分析表明,该基因与北平顶猴相应基因序列高度相似;并且其TRIM5内含子6的3'-剪接位点也相应存在G-to-T突变现象(G/T)。这提示熊猴也极有可能像北平顶猴一样表达TRIM5-CypA融合蛋白,从而导致熊猴可能跟北平顶猴一样可能被HIV-1感染。因此,熊猴极有希望成为一种新的HIV/AIDS灵长类动物模型。

关键词：熊猴限制因子 TRIM5α TRIM5-CypA融合基因杂合子基因型 HIV 动物模型