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先天性甲状腺功能减低症伴甲状腺肿大患儿甲状腺球蛋白基因突变研究

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中国实用儿科杂志 2013年第7期28卷 529-532页

作者：张元凤李堂苏乃伦张立琴马少春青岛大学山东青岛266071 青岛市妇女儿童医院青岛大学医学院附属医院儿科山东青岛266003

目的研究先天性甲状腺功能减低症(简称先天性甲低,CH)伴甲状腺肿大患儿甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)基因突变类型及特点,为基因诊断提供理论依据。方法对2012年1月至8月青岛市妇女儿童医院11例经新生儿筛查确诊为先天性甲低伴甲状腺... 详细信息

目的研究先天性甲状腺功能减低症(简称先天性甲低,CH)伴甲状腺肿大患儿甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)基因突变类型及特点,为基因诊断提供理论依据。方法对2012年1月至8月青岛市妇女儿童医院11例经新生儿筛查确诊为先天性甲低伴甲状腺肿患儿,采用PCR扩增并直接测序的方法,对TG基因的外显子7、14、22、33、38进行基因突变检测,结合测序验证及生物信息学分析,研究TG基因突变类型及特点。结果在11例先天性甲低伴甲状腺肿患儿中,没有发现TG基因突变,分别在1例患儿和6例患儿中发现TGc.3218-81T>G(rs853324,纯合)和c.3218-81T>G(rs853324,杂合)两个单核苷酸多态性位点。结论青岛地区先天性甲低伴甲状腺肿大患儿中,TG基因突变率极低,可能不是该地区先天性甲低伴甲状腺肿大的突变热点基因。

关键词：先天性甲状腺功能减低症甲状腺肿大甲状腺球蛋白基因单核苷酸多态性

5-HTTLPR基因多态性与Tourette综合征的关联分析

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中华医学遗传学杂志 2014年第5期31卷 646-649页

作者：张颖苏乃伦王桂菊崔佳佳衣明纪刘世国青岛大学附属医院儿童保健科山东省青岛市266003 青岛大学附属医院精神病与精神卫生学教研室山东省青岛市266003 青岛大学附属医院产前诊断中心山东省青岛市266003 山东省青岛市妇女儿童医院检验科山东省日照市人民医院儿童保健科

目的探讨5-羟色胺转运体基因启动子区（the serotonin transporter linked polymorphic region，5-HTTLPR）44bp数目可变串联重复序列（variable number of tandem repeat，VNTR）多态性与中国汉族人群Tourette综合征（Tourette syndrome，TS）发病的关联性。方法应用聚合酶链反应-基因分型方法对来自中国汉族人群的252个TS核心家系的5-HTTLPR44bpVNTR多态性进行检测，用传递不平衡检验（transmission disequilibrium test，TDT）和单倍型相对风险分析（haplotype relative risk，HRR）方法分析该多态性位点的遗传分布与TS的关系，应用基于单倍型的单倍型相对风险分析（haplotype—based HRR，HHRR）进行验证。结果对252个TS核心家系的5-HTTLPR 44 bpVNTR基因频率分布进行TDT、HRR和HHRR分析，发现5-HTTLPR44bpVNTR与TS之间存在关联，且存在等位基因L的过度传递（TDT：x2=6．680，dr=1，P=0．012；HRR：x2=9．345，P=0．002，OR=1.739，95％CI为1．218～2．483）。分别对204例男性和48例女性的核心家系与TS的关系进行分析，发现5-HTTLPR与男性TS之间存在关联，与女性TS无明显关联（男性TDT：x2=4．643，df=1，P=0．038；女性TDT：x2=2．189，df=1，P=0．188）。结论5-HTTLPR44bpVNTR多态性与中国汉族人群男性TS发病存在明显的关联，该结果提示5-HTTLPR是男性TS发病的易感基因，但仍需在不同的种族中进行验证。

关键词： Tourette综合征 5-羟色胺转运体基因启动子区易感基因传递不平衡检验单倍型相对风险分析

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XJ-160病毒复制子型表达载体的构建

中国病毒学 2003年第3期18卷 221-226页

作者：杨益良梁国栋付士红苏乃伦邓娟侯云德中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所基因工程国家重点实验室北京100052

XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,全基因组测序已经完成。本文利用该病毒全基因序列首先构建了全基因组cDNA克隆质粒,在此基础上,利用基因重组技术将病毒结构基因序列替换为含有多个单酶切位点的序列,得到复制子表达载体质粒pRe... 详细信息

XJ-160病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒,全基因组测序已经完成。本文利用该病毒全基因序列首先构建了全基因组cDNA克隆质粒,在此基础上,利用基因重组技术将病毒结构基因序列替换为含有多个单酶切位点的序列,得到复制子表达载体质粒pRepxj160。为验证载体的功能,将报告基因绿色荧光蛋白(EGFP)和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)分别插入到载体的多克隆位点,得到两个表达质粒;经体外转录获得的转录体RNA转染BHK-21细胞后14h,可检测到报告基因的表达。结果表明我们构建的XJ-160病毒复制子型表达载体具有自主复制功能,可以表达异源基因。本研究为进一步开发具有我国自主知识产权的甲病毒载体奠定了基础。

关键词： XJ-160病毒复制子型表达载体构建辛德毕斯病毒

乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达

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病毒学报 2003年第3期19卷 224-229页

作者：徐丽宏梁国栋付士红宋宏王大维苏乃伦夏国良张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G41... 详细信息

拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物。经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4。该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右。用美国雅培公司AUZYMEMONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100OD600细胞。上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达。同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外。以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养基中。

关键词：乙型肝炎病毒表面抗原pres2+S基因酵母系统分泌表达

两种不同方法在新生儿溶血病诊断中的应用分析

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中国实验诊断学 2013年第11期17卷 2091-2092页

作者：苏乃伦李伟刘慧青岛市妇女儿童医院检验科山东青岛266034

新生儿溶血病（hemolytic disease of the new-born，HDN）主要是指母婴血型不合引起的同族免疫性溶血病。人类血型系统有40多种，但以ABO和Rh血型系统母婴不合引起溶血者为多见。近几十年来，随着Rh免疫球蛋白的预防性应用，ABO血型不... 详细信息

新生儿溶血病（hemolytic disease of the new-born，HDN）主要是指母婴血型不合引起的同族免疫性溶血病。人类血型系统有40多种，但以ABO和Rh血型系统母婴不合引起溶血者为多见。近几十年来，随着Rh免疫球蛋白的预防性应用，ABO血型不合导致的HDN已经成为新生儿所有溶血性疾病中最常见最重要的一种。ABO溶血病多发生于O型血产妇所生的A型或B型血的婴儿。由于A、B抗原因子在自然界广泛存在，O型血妇女在孕前可能受血型物质的刺激，使机体产生抗A、抗B的IgG，妊娠期间这些抗体可以通过胎盘进入胎儿血液循环，从而引起胎儿或新生儿红细胞的破坏。在新生儿红细胞膜上或血清中查出对抗其自身红细胞的抗体，是诊断ABO溶血病的重要实验依据。

关键词：新生儿溶血病预防性应用诊断 ABO血型不合同族免疫性溶血病母婴血型不合 Rh血型系统 ABO溶血病

运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达

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运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表...

应用SELDI蛋白芯片技术筛选肝癌患者血清中的特异性生物标志

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：苏乃伦牟文风王斌青岛市妇女儿童医疗保健中心检验科

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/ Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达.从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12h,24h,48h后用... 详细信息

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/ Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达.从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12h,24h,48h后用细胞裂解液裂解细胞。裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3(固定金属亲和)和WCX2(弱阳离子交换)芯片,SELDI- TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异。结果感染24小时细胞出现明显病变(CPE),感染12小时质谱分析即可见蛋白的差异表达。共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个,WCX2芯片发现差异峰10个。结论SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便.敏感性高.从而为从蛋白质水平研究HSV- 1感染的致病机理.HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础。

关键词： SELDI蛋白质芯片 Vero细胞 HSV—1 蛋白表达

来源： cnki会议评论

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应用SELDI蛋白芯片技术筛选肝癌患者血清中的特异性生物标志

青岛地区TTV抗体阳性人群的病毒基因检测及序列分析

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：苏乃伦牟文风王斌青岛市妇女儿童医疗保健中心检验科

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/ Ionization)时间飞行质谱仪检测肝癌血清蛋白质的特异性生物标志.建立筛选血清蛋白质图谱模型并初步验证。方法选择肝癌患者30例.HBV阳性携带者20例及正常人20例.应用SELDI蛋白芯片... 详细信息

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/ Ionization)时间飞行质谱仪检测肝癌血清蛋白质的特异性生物标志.建立筛选血清蛋白质图谱模型并初步验证。方法选择肝癌患者30例.HBV阳性携带者20例及正常人20例.应用SELDI蛋白芯片技术及相应的计算机软件进行比较分析.检测肝癌血清蛋白质的特异性生物标志.建立肝癌的筛选模型.并对其进行了盲法验证。结果肝癌组与对照组共有25个蛋白质有显著性差异(P<0.01),以其中5个蛋白生物标志物(6888,13764,6487,3450,6814Da)建立的筛选模型检测灵敏度为96.7.3%(29/30),特异性为90.0%(36/40),盲法验证,灵敏度为95.5%(21/22),特异性为90%(27/30)。结论SELDI蛋白质芯片技术具有高灵敏度和特异性,在肝癌的诊断及肿瘤特异性生物标志的筛选等方面具有一定价值。

关键词： SELDI蛋白质芯片技术肝癌生物标志

来源： cnki会议评论

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齐鲁医学杂志 2001年第3期16卷 192-193页

作者：苏乃伦王斌江崇才青岛市儿童医院检验科青岛266011

①目的　了解经血传播病毒 (TTV)在青岛地区的基因变异情况。②方法　选择TTV抗体阳性的标本 ,用巢式PCR技术扩增血清中的DNA特定片段 ,纯化后与载体连接并转入大肠杆菌JM10 9,提取阳性克隆的重组质粒测序并与TTV的已知序列相比较。③... 详细信息

①目的　了解经血传播病毒 (TTV)在青岛地区的基因变异情况。②方法　选择TTV抗体阳性的标本 ,用巢式PCR技术扩增血清中的DNA特定片段 ,纯化后与载体连接并转入大肠杆菌JM10 9,提取阳性克隆的重组质粒测序并与TTV的已知序列相比较。③结果　在选择的 2 0例标本中 ,15例扩增出TTVDNA ,对其中 1株测序后与已知序列AB0 0 8394比较 ,发现碱基变异率为 13.3 % .

关键词：经血传播病毒序列分析 DNA 序列同源性聚合酶链反应 TTV病毒

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超微量间接荧光法检测特异性病毒IgM抗体

实用儿科临床杂志 1995年第2期10卷 101-102页

作者：苏乃伦江崇才魏强青岛市儿童医院

超微量间接荧光法检测特异性病毒ＩｇＭ抗体青岛市儿童医院（２６６０１１）苏乃伦，江崇才，魏强用免疫荧光技术检测特异性病毒ＩｇＭ抗体是目前实验室常用手段之一。但以往的试验多需采取静脉血完成，这对抽血困难的儿童极为不便。我... 详细信息

超微量间接荧光法检测特异性病毒ＩｇＭ抗体青岛市儿童医院（２６６０１１）苏乃伦，江崇才，魏强用免疫荧光技术检测特异性病毒ＩｇＭ抗体是目前实验室常用手段之一。但以往的试验多需采取静脉血完成，这对抽血困难的儿童极为不便。我们经过多次试验配对研究推出一种经济...

关键词：病毒免疫球蛋白M 抗体间接荧光法