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用竞争性RT-PCR方法定量检测p53基因的表达

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军事医学科学院院刊 1999年第2期23卷 107-110页

作者：魏小龙茹祥斌王青定芮贤良北京药物毒物研究所

目的：建立定量检测ｐ５３基因表达的方法。方法：采用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法定量检测了组织和细胞内抑癌基因ｐ５３ｍＲＮＡ含量的变化，同时用狭线杂交的方法进行了对照。结果：竞争性ＲＴ－ＰＣＲ和狭线杂交... 详细信息

目的：建立定量检测ｐ５３基因表达的方法。方法：采用竞争性逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法定量检测了组织和细胞内抑癌基因ｐ５３ｍＲＮＡ含量的变化，同时用狭线杂交的方法进行了对照。结果：竞争性ＲＴ－ＰＣＲ和狭线杂交均反映了ｐ５３基因表达变化的趋势，两者的结果相吻合。与狭线杂交相比，竞争性ＲＴ－ＰＣＲ具有灵敏度高、专一性好、简便、快速等特点，尤适合于定量检测微量样品和表达水平较低的基因。结论：竞争性ＲＴ－ＰＣＲ是一种较好的定量检测基因表达水平的方法。

关键词：聚合酶链反应狭线杂交 p53基因 RT-PCR

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痢疾志贺氏Ⅰ型菌毒素基因的克隆与表达

微生物学报 1991年第6期31卷 420-425页

作者：李丰生黄培堂芮贤良黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所

从痢疾志贺氏Ⅰ型菌 W30864株中提取染色体 DNA,用 EcoRI 完全酶解,电泳回收3—7kb 的片段,与载体 pUC19质粒连接重组,用大肠杆菌痢疾样毒素(SLT)基因探针进行筛选,得到了阳性重组子。实验表明志贺氏毒素基因是位于约4.5kb 的 EcoRl 片... 详细信息

从痢疾志贺氏Ⅰ型菌 W30864株中提取染色体 DNA,用 EcoRI 完全酶解,电泳回收3—7kb 的片段,与载体 pUC19质粒连接重组,用大肠杆菌痢疾样毒素(SLT)基因探针进行筛选,得到了阳性重组子。实验表明志贺氏毒素基因是位于约4.5kb 的 EcoRl 片段上,包含毒素的 A 亚单位基因和 B 亚单位基因。在对克隆株的毒性测定中,采用 Hela-S3细胞试验,证明所产生的痢疾毒素具有杀死细胞的能力。此毒素可引起肠积水和充血,可使小鼠肢体麻痹并致死,克隆重组株的痢疾毒素产量是亲本野生株 W30864的16倍。此外,实验中还对克隆株和产生 SLT 的菌株的毒素产量做了比较。

关键词：痢疾志贺氏菌毒素基因克隆

肠毒素源性定居因子CS6在减毒伤寒沙门氏菌中表达及免疫原性的研究

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微生物学报 1999年第6期39卷 533-538页

作者：滕家波芮贤良张毅张兆山苏国富卫生部长春生物制品研究所长春130062 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 白求恩医科大学长春130021

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原ＣＳ６基因克隆至ｐＸＬ６７０，转化ａｓｄ基因突变的Ｅ．ｃｏｌｉＸ６０９７，获得重组质粒ｐＳＳ６４，再将后者转化至减毒的△ａｒｏＡ、△ａｒｏＣ、△ａｓｄ伤寒沙门氏菌，构建了无... 详细信息

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原ＣＳ６基因克隆至ｐＸＬ６７０，转化ａｓｄ基因突变的Ｅ．ｃｏｌｉＸ６０９７，获得重组质粒ｐＳＳ６４，再将后者转化至减毒的△ａｒｏＡ、△ａｒｏＣ、△ａｓｄ伤寒沙门氏菌，构建了无药物抗性且稳定的大肠杆菌和伤寒双价菌苗候选株。小鼠腹腔免疫和攻击实验表明，该菌株对伤寒沙门氏菌毒株的攻击具有良好的保护作用。家兔免疫实验证明，该菌株能产生抗ＣＳ６和伤寒菌Ｖｉ

关键词：定居因子CS6 伤寒沙门氏菌双价活菌苗 ETEC

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围产期沙眼衣原体感染的研究

中华妇产科杂志 1995年第12期30卷 714-717页

作者：沈犁吴仕孝刘官信苏国富叶棋浓芮贤良重庆医科大学儿童医院解放军军事医学科学院

采用细胞培养、聚合酶链反应（ＰＣＲ）和核酸测序技术对２７８名孕妇沙眼衣原体（ＣＴ）感染进行研究。结果：细胞培养和ＰＣＲ检出孕妇宫颈ＣＴ感染率各为１０．８％（３０／２７８）和１４．０％（３９／２７８）。生于ＣＴ感染母亲... 详细信息

采用细胞培养、聚合酶链反应（ＰＣＲ）和核酸测序技术对２７８名孕妇沙眼衣原体（ＣＴ）感染进行研究。结果：细胞培养和ＰＣＲ检出孕妇宫颈ＣＴ感染率各为１０．８％（３０／２７８）和１４．０％（３９／２７８）。生于ＣＴ感染母亲的婴儿中，５５．０％（１１／２０）感染了ＣＴ。ＣＴ感染孕妇产褥期宫内膜炎发病率２８．６％（６１２１），明显高于ＣＴ阴性孕妇的８．１％（５／６２）；ＣＴ感染母亲的婴儿结膜炎和肺炎发病率各为４５．０％（９／２０）和３０．０％（６／２０），明显高于ＣＴ阴性孕妇婴儿的１８．３％（１１／６０）和８．３％（５／６０）。提示：我国围产期ＣＴ感染比较常见，应于重视。

关键词：围产期沙眼衣原体聚合酶链反应序列分析

宋内Ⅰ相抗原和霍乱CT-B共表达的免疫保护效果观察

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生物工程学报 1996年第1期12卷 78-83页

作者：李德玲苏国富芮贤良黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100850

将编码宋内氏痢疾菌(Shigella sonnei)I相O抗原的基因和霍乱弧菌(Vibrio choler-ae)的CT-B基因克隆至带asd基因的质粒PYA248,得重组质粒PMGL105。将该重组质粒转入asd基因缺失的减毒伤寒沙门氏菌X4072,构成了一个不带抗药性基因的载体-... 详细信息

将编码宋内氏痢疾菌(Shigella sonnei)I相O抗原的基因和霍乱弧菌(Vibrio choler-ae)的CT-B基因克隆至带asd基因的质粒PYA248,得重组质粒PMGL105。将该重组质粒转入asd基因缺失的减毒伤寒沙门氏菌X4072,构成了一个不带抗药性基因的载体-宿主平衡致死系统。一系列实验表明,该重组菌X4072(PMGL105)能稳定地表达宋内I相O抗原和霍乱弧菌的CT-B抗原。小鼠免疫保护实验表明,该重组菌对有毒的宋内氏I相痢疾杆菌及霍乱弧菌的攻击均具有良好保护作用。

关键词：霍乱宋内I抗原 CT-B抗原免疫保护

宋内Ⅰ相O抗原及霍乱毒素B亚基在福氏2a痢疾菌中的表达及其免疫保护效果的观察

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Acta Genetica Sinica 1996年第4期23卷 322-328页

作者：钱锋芮贤良苏国富黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所

本文利用基因重组的方法，将宋内Ｉ相Ｏ抗原基因以及霍乱毒素Ｂ亚单位基因（ｃｔｘ－Ｂ）克隆至带链球菌的ａｓｄ基因的表达载体，然后转化至ａｓｄ－痢疾菌苗株福氏２ａＴ３２。脂多糖银染以及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ实验证实... 详细信息

本文利用基因重组的方法，将宋内Ｉ相Ｏ抗原基因以及霍乱毒素Ｂ亚单位基因（ｃｔｘ－Ｂ）克隆至带链球菌的ａｓｄ基因的表达载体，然后转化至ａｓｄ－痢疾菌苗株福氏２ａＴ３２。脂多糖银染以及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ实验证实以上两基因都能在宿主菌中稳定表达。动物（小白鼠）保护实验表明，该重组菌对福氏２ａ、宋内氏痢疾菌的保护效率达１００％，对霍乱弧菌的保护效率也达７０％。该菌具有稳定、无抗生素标记、多价的特点。

关键词：细菌性痢疾痢疾菌霍乱毒素B 亚单位基因表达

痢疾志贺氏毒素B亚单位在大肠杆菌中的高效表达

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生物工程学报 1993年第1期9卷 36-42页

作者：苏国富李丰生黄培堂芮贤良黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所

本文从痢疾志贺氏Ⅰ型菌W30864的染色体克隆了编码志贺氏毒素(Stx)的基因,表达Stx的基因位于约4.5kb的EcoR1片段内。一系列的生物学试验表明:我们构建的杂种质粒(pMGC001)能产生Stx,产量为亲代株的16倍,克隆株不仅有细胞毒和肠毒作用,... 详细信息

本文从痢疾志贺氏Ⅰ型菌W30864的染色体克隆了编码志贺氏毒素(Stx)的基因,表达Stx的基因位于约4.5kb的EcoR1片段内。一系列的生物学试验表明:我们构建的杂种质粒(pMGC001)能产生Stx,产量为亲代株的16倍,克隆株不仅有细胞毒和肠毒作用,而且还有神经毒性。我们又从质粒pMGC001将志贺氏毒素的B亚单位(Stx-B)的基因克隆至表达载体pJLA503,获得了Stx-B在大肠杆菌中的高效表达,Stx-B已被纯化,其特异的多克隆和单克隆抗体也被制备。Western blot表明它们能与Stx-B进行特异的抗原抗体反应。

关键词：痢疾志贺氏Ⅰ型菌基因克隆

利用减毒伤寒菌为载体构建稳定的三价抗原菌株

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白求恩医科大学学报 1999年第2期25卷 114-117页

作者：滕家波芮贤良苏国富张毅卫生部长春生物制品研究所长春130063 军事医学院生物工程研究所白求恩医大毒理教研室

目的：利用减毒伤寒菌为载体构建稳定的三价抗原菌株。方法：以△aroA、△aroC突变的伤寒图为载体，结合宿主—载体平衡致死表达系统[1]，将志贺氏毒素B亚单位（StxB）基因、人源肠毒源性大肠杆菌（***）定居因子表面抗原CS6（ColiSurfa... 详细信息

目的：利用减毒伤寒菌为载体构建稳定的三价抗原菌株。方法：以△aroA、△aroC突变的伤寒图为载体，结合宿主—载体平衡致死表达系统[1]，将志贺氏毒素B亚单位（StxB）基因、人源肠毒源性大肠杆菌（***）定居因子表面抗原CS6（ColiSurfaceAntigen，CS）基因引入该菌，构成一种潜在的三价抗原菌株。结果：重组质粒pSS64在不带任何抗生素基因的情况下，在asd－减毒沙门氏伤寒菌中能稳定存在。

关键词：沙门氏伤寒菌三价抗原菌株减毒伤寒菌疫苗

重组质粒pMG611中K99和F41抗原基因在***中表达条件的研究

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军事医学科学院院刊 1991年第4期15卷 282-284页

作者：钟声李丰生芮贤良吕学诜王庆元黄培堂佳木斯医学院生物教研室军事医学科学院生物工程研究所

本文通过 ELISA 方法测定了重组质粒 pMG611在不同宿主和培养条件下,K99和 F41菌毛抗原的表达水平。研究结果表明重组质粒 pMG611在 HB101和 RRI 宿主菌中较在 C600宿主菌中表达更多的 K99和 F41菌毛抗原。实验中还探讨了培养基、温度... 详细信息

本文通过 ELISA 方法测定了重组质粒 pMG611在不同宿主和培养条件下,K99和 F41菌毛抗原的表达水平。研究结果表明重组质粒 pMG611在 HB101和 RRI 宿主菌中较在 C600宿主菌中表达更多的 K99和 F41菌毛抗原。实验中还探讨了培养基、温度和丙氨酸对两种菌毛抗原表达的影响。

关键词： K99菌毛 F41菌毛重组质粒 pMG611 K99