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基于体外细胞实验和网络药理学探讨槐定碱治疗前列腺癌的作用机制

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天然产物研究与开发 2024年第3期36卷 528-539,498页

作者：王乐芦春斌暨南大学生命科学技术学院广州510632

基于体外细胞实验、网络药理学和分子对接探讨槐定碱(sophoridine,SRI)对DU-145前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。MTT、克隆形成以及免疫荧光实验检测SRI对DU-145细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况。qPCR检测Ki67、P... 详细信息

基于体外细胞实验、网络药理学和分子对接探讨槐定碱(sophoridine,SRI)对DU-145前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。MTT、克隆形成以及免疫荧光实验检测SRI对DU-145细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况。qPCR检测Ki67、PCNA、Caspase-3/7、Bcl-2、Bax以及p38MAPK mRNA表达。Western blot检测PCNA、Caspase-3、Bcl-2、Bax、p38MAPK以及p-p38MAPK蛋白表达。利用TCMSP、HERB、Swiss Target Prediction和PharmMapper数据库获得SRI靶点,利用OMIM、GeneCards数据库收集前列腺癌靶点,并通过Venny2.1.0筛选两者的共同靶点。利用STRING数据库构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络,采用Cytoscape3.9.0软件进行网络拓扑学分析以及PPI网络可视化。通过DAVID数据库进行GO富集和KEGG通路分析。采用AutoDock1.5.6软件进行分子对接。细胞实验结果表明SRI能显著抑制DU-145细胞的增殖,并促进其凋亡。PPI网络分析得到ALB、MAPK1、CASP3、MAPK8、p38MAPK等16个核心靶点。GO富集分析得到158个条目(P<0.01),主要集中在细胞凋亡过程、蛋白质磷酸化、蛋白丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶活性等。KEGG富集分析得到84个信号通路(P<0.01),涉及癌症通路、癌症中的蛋白多糖、MAPK信号通路等。分子对接结果表明SRI与核心靶点p38MAPK能够稳定结合。qPCR和Western blot结果证实SRI能促进p38MAPK的表达。综上,本研究表明SRI能抑制DU-145前列腺癌细胞的增殖并促进其凋亡,这可能与p38MAPK的激活有关。

关键词：前列腺癌槐定碱增殖凋亡 p38MAPK

猪α乳清蛋白基因双元载体的构建和转化拟兰芥植物

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种子 2005年第5期24卷 20-22页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫中心广州510632

将人工合成的植物化的猪α乳清蛋白基因编码区克隆到载体中,构建了带有35S启动子———猪α乳清蛋白基因———终止子表达单元的双元载体,采用农杆菌法对拟兰芥进行植物转化。利用该双元载体上的除草剂抗性基因(Bar基因)为选择性标记进... 详细信息

将人工合成的植物化的猪α乳清蛋白基因编码区克隆到载体中,构建了带有35S启动子———猪α乳清蛋白基因———终止子表达单元的双元载体,采用农杆菌法对拟兰芥进行植物转化。利用该双元载体上的除草剂抗性基因(Bar基因)为选择性标记进行筛选,获得了一些抗除草剂的转化植株。对转化植株后代植进行猪α乳清蛋白基因的PCR检测,证实外源猪α乳清蛋白基因已整合到植物基因组DNA中。

关键词：猪α乳清蛋白基因双元载体遗传转化拟兰芥农杆菌法抗除草剂基因

转基因植物(农产品)中转基因成分的PCR检测

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种子 2006年第1期25卷 1-3页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫中心广东广州510632

转基因(植物)食品的安全性是科学界及公众普遍关心的问题。在转基因植物研究中,根据转基因植物所带有的转基因成分的DNA序列,设计引物对耐草铵膦转基因植物中转入的转基因成分进行了PCR分析,结果表明,采用PCR扩增对外源基因和遗传标记... 详细信息

转基因(植物)食品的安全性是科学界及公众普遍关心的问题。在转基因植物研究中,根据转基因植物所带有的转基因成分的DNA序列,设计引物对耐草铵膦转基因植物中转入的转基因成分进行了PCR分析,结果表明,采用PCR扩增对外源基因和遗传标记基因的分析方法灵敏、准确。

关键词：草铵膦耐性转基因成分 PCR分析

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植物化的猪α-乳清蛋白基因人工合成

种子 2004年第12期23卷 3-5页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫中心广东广州510632

根据猪α-乳清蛋白基因 c DNA序列设计了多对特异性引物 ,采用循环 PCR方法人工合成了植物化的猪α-乳清蛋白基因编码区 (398bp)并对该 PCR产物进行测序。DNA序列测定结果表明 ,采用循环 PCR法扩增的产物是预期的猪 α-乳清蛋白基因编码... 详细信息

根据猪α-乳清蛋白基因 c DNA序列设计了多对特异性引物 ,采用循环 PCR方法人工合成了植物化的猪α-乳清蛋白基因编码区 (398bp)并对该 PCR产物进行测序。DNA序列测定结果表明 ,采用循环 PCR法扩增的产物是预期的猪 α-乳清蛋白基因编码区 ,该植物化的猪 α-乳清蛋白基因编码区可以用于植物转化 ,为猪 α-乳清蛋白基因转基因植物研究和在转基因植物中进行动物基因表达研究奠定了基础。

关键词： α-乳清蛋白基因编码区 PCR法基因cDNA 基因表达扩增循环植物转化人工合成 PCR产物

转基因拟南芥中外源基因的Southern blot检测

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种子 2007年第2期26卷 14-16页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫中心广州510632

外源基因在转基因植物的稳定表达是获得理想转基因植物的首要条件。在我们进行的转基因植物研究中,根据转基因植物所带有的转基因成分和标记基因的DNA序列,采用Southern blot技术对转基因植物中的猪α-乳清蛋白基因和标记基因的拷贝数... 详细信息

外源基因在转基因植物的稳定表达是获得理想转基因植物的首要条件。在我们进行的转基因植物研究中,根据转基因植物所带有的转基因成分和标记基因的DNA序列,采用Southern blot技术对转基因植物中的猪α-乳清蛋白基因和标记基因的拷贝数进行了分析。结果表明:外源基因的拷贝数和外源基因的稳定表达相关。

关键词：转基因植物基因沉默猪α-乳清蛋白基因 southern blot分析

花生种子贮藏蛋白的热稳定性与氨基酸组成的关系

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种子 2001年第3期20卷 3-5,20页

作者：芦春斌黄上志傅家瑞暨南大学生殖免疫中心广州510632 中山大学生命科学学院广州510275

分析两种不同蛋白类型的花生种子贮藏蛋白热稳定性 ,表明各品种类型花生种子贮藏蛋白的 3种主要组分的的热稳定性存在显著的差异 ,即伴花生球蛋白热稳定性最高 ,伴花生球蛋白次之 ,花生球蛋白最低。高甲硫氨酸品种类型 (汕油 5 2 3... 详细信息

分析两种不同蛋白类型的花生种子贮藏蛋白热稳定性 ,表明各品种类型花生种子贮藏蛋白的 3种主要组分的的热稳定性存在显著的差异 ,即伴花生球蛋白热稳定性最高 ,伴花生球蛋白次之 ,花生球蛋白最低。高甲硫氨酸品种类型 (汕油 5 2 3)的贮藏蛋白中无论花生球蛋白还是伴花生球蛋白的热稳定性都高于低甲硫氨酸品种类型 (海花 1号 )相应组分的热稳定性。氨基酸分析表明 ,各品种 3种组分中 17种氨基酸中的大多数氨基酸含量无显著变化 ,并且天冬氨酸 ,谷氨酸和精氨酸的含量最高 ,三者之和可达总量的 45 %以上 :3种组分中 ,伴花生球蛋白除了谷氨酸和精氨酸含量显著高于花生球蛋白 ,伴花生球蛋白外 ,含硫氨基酸 (甲硫氨酸和半胱氨酸 )也明显高于后两者。 3个组分中含硫氨基酸水平与热稳定性正相关 ,即含硫氨基酸水平越高 ,其热稳定性越高。冷藏过程中含硫氨基酸高的伴花生球蛋白不易降解、保持高热稳定性水平。

关键词：花生种子贮藏蛋白氨基酸组成热稳定性

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密码子植物化的小鼠ZP3蛋白基因人工合成

种子 2009年第5期28卷 21-23页

作者：芦春斌暨南大学生殖免疫研究所广州510632

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3... 详细信息

对小鼠ZP 3蛋白基因cDNA序列进行生物信息学分析,并将其核心区分成两部分进行分部合成。设计了多对特异性的重叠引物,采用多步PCR方法合成了植物化的小鼠ZP 3蛋白基因的不同片段。再经重叠PCR技术将这两段DNA连接在一起,构成完整的ZP 3基因的编码区。DNA序列测定人工合成的基因为植物化的ZP 3基因。

关键词：小鼠ZP3蛋白基因重叠PCR 合成植物反应器

重叠延伸PCR合成风疹病毒E1蛋白抗原肽基因及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第8期28卷 830-833页

作者：芦春斌邱建阁马贞丽暨南大学生命科学技术学院广东广州510632

目的:利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础。方法:利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计... 详细信息

目的:利用重叠延伸PCR合成风疹病毒E1基因的抗原肽段,构建其原核表达载体并表达蛋白,为进一步获得高质量的rE1重组抗原肽奠定基础。方法:利用软件对风疹病毒E1基因进行生物信息学分析,根据大肠杆菌密码子偏爱性对其密码子进行优化;设计多对寡核苷酸引物,以重叠延伸PCR法合成相应抗原肽段,克隆后测序鉴定。再以酶切连接的方法将合成的抗原肽序列克隆导入原核表达载体pET32a;利用IPTG诱导抗原肽段的表达,SDS-PAGE和West-ern blot法分析表达产物。结果:经过6轮重叠延伸PCR扩增,成功获得与预期目的序列一致的风疹病毒E1基因抗原肽并构建获得重组质粒pET32-rE1;在37℃下分别以终浓度为1 mmol/L和0.5 mmol/L的IPTG诱导抗原肽表达,SDS-PAGE和Western blot法检测到预期的蛋白条带;且以IPTG终浓度为1 mmol/L诱导6 h后表达量最高。结论:成功合成了密码子优化的风疹病毒E1基因抗原肽段,构建其原核表达载体pET32-rE1并表达该抗原肽。

关键词：风疹病毒E1基因抗原肽重叠延伸PCR 密码子优化原核表达

基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16

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病毒学报 2011年第1期27卷 64-70页

作者：芦春斌罗乐杨梦婕聂凯王淼马学军暨南大学生殖免疫研究所广州510632 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京102206

建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在... 详细信息

建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色的变化做为结果判定的标准,并经LA-320实时浊度仪和琼脂糖电泳证实。文中利用这种技术对13份已知的单重感染13种HPV不同亚型的临床样本进行了特异性分析,同时对2个含目的片段的克隆质粒的系列稀释物进行了灵敏度分析。结果显示LAMP方法特异性高,颜色法判断的灵敏度均为1000个拷贝DNA分子水平,比Real-time PCR低10～20倍,对62份宫颈刮片临床标本的HPV6和HPV16检出率和HPV分型试剂盒一致。因此,基于颜色判定的环介导等温扩增方法有望应用于人乳头瘤病毒HPV6和HPV16感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心和医院推广和应用的潜力。

关键词：等温扩增人乳头瘤病毒(HPV)