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人TPON端结构域在毕赤酵母中的分泌表达及产物鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 1998年第5期18卷 397-400页

作者：田生礼刘丽孟岩芦兴武谢宝树刘立忠冷爱军王颖空军总医院空军临床分子生物学研究中心东北师范大学遗传与细胞研究所

目的在酵母系统中分泌表达人ＴＰＯＮ－端结构域，对其生物学活性进行初步研究，为与其它ＴＰＯ分子进行ＴＰＯ糖基化生物学意义的研究打基础。方法将编码人ＴＰＯ成熟肽Ｎ端１９５个氨基酸的ｃＤＮＡ与酵母整合型载体ｐＰＩＣＺαＡ重... 详细信息

目的在酵母系统中分泌表达人ＴＰＯＮ－端结构域，对其生物学活性进行初步研究，为与其它ＴＰＯ分子进行ＴＰＯ糖基化生物学意义的研究打基础。方法将编码人ＴＰＯ成熟肽Ｎ端１９５个氨基酸的ｃＤＮＡ与酵母整合型载体ｐＰＩＣＺαＡ重组，构建的重组质粒用ＤｒａⅠ消化成线性ＤＮＡ，转染酵母细胞ＧＳ１１５，使ＴＰＯ基因整合到酵母染色体上；用ＴＰＯ抗体筛选获得遗传性分泌稳定表达的重组酵母细胞株；用ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定ＴＰＯ产物及分子量；用对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（Ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）的方法测定活性。结果获得了ＴＰＯＮ－端结构域在酵母系统中的分泌表达，表达产物可被ＴＰＯ抗血清识别，分子量约为２２０００；其产物对小鼠骨髓细胞形成ＣＦＵ－Ｍｅｇ具有明显的刺激作用。

关键词：血小板生成素毕赤酵母 N端结构域分泌表达

人TPO全长分子在大肠杆菌中的表达及其活性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1997年第6期17卷 463-470页

作者：刘丽田生礼王艳华芦兴武孟岩谢宝树中国人民解放军空军总医院分子生物学研究中心

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯ... 详细信息

利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤＮＡ，在大肠杆菌中表达了人ＴＰＯ全长分子。电镜观察结果，目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的２７％；表达产物经初步纯化后，与ＣＯＳ－７细胞中表达的人ＴＰＯ３５３个氨基酸全长分子分别做ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体内活性分析，结果表明，原核与真核系统表达的ＴＰＯ均具有明显促进血小板生成的作用。这为进一步研究ＴＰＯ的糖基化与其生物学活性及半衰期关系打下基础。

关键词：血小板生成素基因表达

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人B淋巴细胞活化相关新基因的克隆

中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 27-31页

作者：芦兴武殷际义崔莲仙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显... 详细信息

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显示分析共获得明显的差异表达的标签序列（ expressed sequence tag, EST） 62条，其中主要在静止 B细胞表达的有 32条，在活化 B细胞表达的有 30条。经 Northern杂交验证，共获得阳性的片段 25条。以在活化 B细胞中高表达的 EST30为探针，经 3轮筛选人活化 B细胞文库后获得 1个新的全长为 2 048 bp的 cDNA克隆。该克隆含有 1个 630 bp的开放读码框。其推断的氨基酸序列 N端与酵母的动力蛋白 KAR3部分同源。结论克隆了 1条可能与 B细胞活化相关的新基因。

关键词：差异显示 B淋巴细胞酵母KAR3蛋白

人血小板生成素在CHO细胞中的稳定表达及其产物鉴定

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解放军医学杂志 1998年第5期23卷 446-448页

作者：刘丽田生礼芦兴武谢宝树刘立忠王颖空军总医院

目前，血小板生成素（ＴＰＯ）的基因工程研究是继促红细胞生成素（ＥＰＯ）之后的又一个热点。由于对ＴＰＯ结构与功能的关系了解不够，其基因工程方面的研究在表达系统的选择和分子结构的设计上均存在很大的盲目性。针对这一问题，作... 详细信息

目前，血小板生成素（ＴＰＯ）的基因工程研究是继促红细胞生成素（ＥＰＯ）之后的又一个热点。由于对ＴＰＯ结构与功能的关系了解不够，其基因工程方面的研究在表达系统的选择和分子结构的设计上均存在很大的盲目性。针对这一问题，作者欲对ＴＰＯ的糖基化程度与其生物学...

关键词：血小板生成素 CHO细胞基因表达表达产物

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甘肃省镇原县北部勘查区煤炭资源潜力评估

甘肃科技 2014年第3期30卷 18-20,132页

作者：芦兴武甘肃煤田地质局一四九队甘肃兰州730000

镇原县北部煤炭勘查区位于鄂尔多斯地块天环向斜区,含煤地层为中侏罗统延安组,煤炭资源丰富,可采煤层结构简单,较稳定,埋藏较深。随着浅部煤炭资源日益枯竭,可以将其作为后备资源,保证地方经济可持续发展。

关键词：镇原县北部煤炭资源评估

甘肃省临泽县红柳园矿区煤层沉积环境及对比初步探讨

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甘肃科技 2013年第19期29卷 26-29页

作者：芦兴武甘肃煤田地质局一四九队甘肃兰州730000

红柳园矿区煤层位于中侏罗统青土井群,可采煤层共5层,虽然煤层层数较多,但分布有规律,不难对比。通过对矿区含煤地层及对比层的研究,认为,运用岩性标志,物性特征及煤质特征可有效对比各煤层,并进行追踪对比,为今后进一步工作提供了可靠... 详细信息

红柳园矿区煤层位于中侏罗统青土井群,可采煤层共5层,虽然煤层层数较多,但分布有规律,不难对比。通过对矿区含煤地层及对比层的研究,认为,运用岩性标志,物性特征及煤质特征可有效对比各煤层,并进行追踪对比,为今后进一步工作提供了可靠的地质资料。

关键词：红柳园矿区中侏罗统青土井群煤层沉积环境煤层对比

人TPON端结构域在大肠杆菌中的表达、纯化及活性分析

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生物化学杂志 1997年第6期13卷 666-671页

作者：刘丽田生礼王艳华孟岩芦兴武谢宝树空军总医院空军临床分子生物学研究中心

在利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码人血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤ－ＮＡ的基础上，综合ＴＰＯ结构与功能的研究信息，在大肠杆菌中表达了成熟肽Ｎ端结构域．目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的３０... 详细信息

在利用反转录－ＰＣＲ从人胎肝中获得编码人血小板生成素（ｈＴＰＯ）全长ｃＤ－ＮＡ的基础上，综合ＴＰＯ结构与功能的研究信息，在大肠杆菌中表达了成熟肽Ｎ端结构域．目的蛋白在菌体内以包涵体形式存在，表达量约占菌体总蛋白的３０％；包涵体经变性、复性、凝胶过滤、离子交换层析等步骤处理后，所得产物给Ｂａｂｌ／ｃ小鼠腹腔连续注射８ｄ，第９ｄ摘眼球采血，计数血小板的数量．结果表明，ＴＰＯＮ端结构域具有明显促进血小板生成的作用．

关键词：血小板生成素遗传工程药物 N端结构域研制

酵母系统表达TPO与***表达TPO N端结构域生物半衰期比较

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第6期14卷 784-789页

作者：刘丽田生礼王颖芦兴武孟岩谢宝树刘立忠冷爱军空军总医院空军临床分子生物学研究中心东北师范大学细胞与遗传研究所

为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系，首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后，两种蛋白以相同浓度... 详细信息

为了探讨血小板生成素（ＴＰＯ）糖基化与其生物半衰期的关系，首先纯化了巴氏毕赤酵母系统分泌表达的人ＴＰＯ成熟肽和大肠杆菌表达的人ＴＰＯＮ端结构域蛋白．纯化产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定和活性分析后，两种蛋白以相同浓度或相同活性单位给Ｗｉｓｔｅｒ大鼠尾静脉注射，利用酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）和ＴＦ１细胞测定不同时间点实验动物血浆中ＴＰＯ浓度或生物学活性，求出两种ＴＰＯ的生物半衰期（ｔ１／２）值．结果显示，以相同浓度和相同活性单位给药，ＴＰＯ成熟肽的ｔ１／２均比其Ｎ端结构域的长，前者分别是后者的１．６５倍和１．２７倍．

关键词：血小板生成素糖基化生物半衰期 N端结构

人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第4期14卷 358-364页

作者：田生礼刘丽芦兴武孟岩谢宝树刘立忠王颖冷爱军空军总医院空军临床分子生物学研究中心

外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上，获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα，对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计，使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分... 详细信息

外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上，获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα，对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计，使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析，分子量约为６６ｋＤ处蛋白条带可被ＴＰＯ抗体识别；表达量约为０．１ｇ／Ｌ；Ｎ端氨基酸序列分析结果与设计的一致；表达产物对小鼠骨髓细胞形成巨核细胞集落形成单位（ｍｅｇａｋａｒｙ－ｏｃｙｔｅｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ，ＣＦＵ－Ｍｅｇ）具有明显的刺激作用．

关键词：血小板生成素毕赤酵母分泌表达活性测定