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PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒

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PCR法制备地高辛标记探针斑点杂交检测栉孔扇贝急性病毒性坏死症...

中国海洋湖沼学会中国动物学会贝类学分会第十二次学术讨论会

作者：艾海新王崇明王秀华李赟宋微波中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒(Acute Virus Necrobiotic Virus,AVNV)是一种具囊膜、纤突的球形病毒,为单链RNA病毒,是1997年以来山东沿海栉孔扇贝暴发性大规模死亡的直接病原,感染病贝死亡率高达90%以上。目前最有效的防治方法是尽早... 详细信息

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒(Acute Virus Necrobiotic Virus,AVNV)是一种具囊膜、纤突的球形病毒,为单链RNA病毒,是1997年以来山东沿海栉孔扇贝暴发性大规模死亡的直接病原,感染病贝死亡率高达90%以上。目前最有效的防治方法是尽早发现传染源,果断切断传播途径。因此,在养殖生产实践中迫切需要建立一种快速、准确、简便、灵敏、特异并且适用于基层实验室的检测和诊断方法。核酸斑点杂交法是通过特异性探针与病毒核酸进行杂交检测病毒,具有快速、准确、简便易行等特点。本研究是在已建立的RT-PCR检测方

关键词：栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒 PCR 地高辛标记探针斑点杂交

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栉孔扇贝急性病毒性坏死症核酸诊断技术

栉孔扇贝急性病毒性坏死症核酸诊断技术

中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学分会第八次会员代表大会暨第十三次全国贝类学术讨论会

作者：王崇明艾海新王秀华李赟宋微波中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

"急性病毒性坏死病毒"(Acute Viral Necmbiotic Disease,AVNV)已被证实是一种对养殖栉孔扇贝造成极大危害的病员体。目前,在养殖生产实践中迫切需要建立一种快速、准确、灵敏的检测和诊断方法。与传统诊断方法相比,RT-PCR 检测技术具有... 详细信息

"急性病毒性坏死病毒"(Acute Viral Necmbiotic Disease,AVNV)已被证实是一种对养殖栉孔扇贝造成极大危害的病员体。目前,在养殖生产实践中迫切需要建立一种快速、准确、灵敏的检测和诊断方法。与传统诊断方法相比,RT-PCR 检测技术具有灵敏度高、特异性强、操作简便和快速等特点,是诊断病原体的一种有效的现代分子生物学技术。作者已经开展了栉孔扇贝(Chlamys farreri)急性病毒性坏死病毒基因克隆的研究,建立了 AVNV 的部分 cDNA 文库,获得了13#、52#重组质粒的序列。设计合成了2对特异性引物,预计目的产物分别为406bp 和412bp,开展了 AVNV 的 RT-PCR 检测技术的研究,建立了一种快速、准确、灵敏的 AVNV RT-PCR 检测方法,本方法具有较高的灵敏度和较强的特异性,以 P13F/P13R 为特异性引物的 RT-PCR 检测 AVNV RNA 的检出灵敏度为1pg,以 P52F/P52R 为特异性引物的 RT-PCR 检测 AVNV RNA 的检出灵敏度为100pg,与栉孔扇贝闭壳肌基因组 DNA 无交叉反应。利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过 PCR 法制备了13#、52#AVNV 的 cDNA 探针,探针长度分别为406bp 和412bp,标记产量分别约为60ng/μL和40ng/μL。通过核酸探针斑点杂交检测法对探针特异性和灵敏度进行验证,结果表明,13#、52#探针都具有较高的灵敏度和较强的特异性,分别检测 AVNV RNA 的检出灵敏度为6.1pg和610pg, 与栉孔扇贝闭壳肌基因组 DNA 无交叉反应。利用该法检测栉孔扇贝样品,结果显示栉孔扇贝的外套、鳃、肾、消化腺都显示阳性杂交信号,生殖腺、闭壳肌未显示杂交信号。

关键词：栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒诊断 RT-PCR 斑点杂交

栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒cDNA文库的构建及部分序列分析

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栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒cDNA文库的构建及部分序列分析

中国海洋湖沼学会中国动物学会贝类学分会第十二次学术讨论会

作者：王崇明艾海新刘英杰王秀华李赟宋微波中国水产科学研究院黄海水产研究所中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

栉孔扇贝(Chlamys farreri)是中国最重要的养殖经济贝类之一,养殖区域分布在濒临黄海的山东半岛和辽东半岛,为沿海地区主要的支柱性产业。自1997年起,连续几年爆发的“大规模死亡症”导致了该产业的巨大损失。作者所在的课题组自2000年... 详细信息

栉孔扇贝(Chlamys farreri)是中国最重要的养殖经济贝类之一,养殖区域分布在濒临黄海的山东半岛和辽东半岛,为沿海地区主要的支柱性产业。自1997年起,连续几年爆发的“大规模死亡症”导致了该产业的巨大损失。作者所在的课题组自2000年起在山东半岛栉孔扇贝主要养殖海区对导致“大规模死亡症”的各种可能诱因,分别从流行病学、病理学、病原学以及环境理化、生物因子等方面开展了深入、全面的研究与调查。结果明确证实一种RNA球形病毒是导致“大规模死亡症”的直接病原,并将该病症定名为“急性病毒性坏死

关键词：栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒 cDNA文库克隆序列分析

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提高创新实践能力的微生物应用技术教学改革

科技资讯 2016年第12期14卷 111-111,160页

作者：艾海新蒙新睿胡桓王天琦赵健于开源刘宏生辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036

微生物应用技术是学校向应用技术型高校转型的重要专业课程之一,其教学与其他学科显示出明显的不同,教学改革的内容应该着重于提高学生的创新实践能力。微生物应用技术的教学体系的创新主要从教学目标、教学形式、讲授内容、考试制度等... 详细信息

微生物应用技术是学校向应用技术型高校转型的重要专业课程之一,其教学与其他学科显示出明显的不同,教学改革的内容应该着重于提高学生的创新实践能力。微生物应用技术的教学体系的创新主要从教学目标、教学形式、讲授内容、考试制度等几方面进行创新,该文将对其进行详细探索。

关键词：微生物应用技术创新实践能力教学改革

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急性病毒性坏死症病毒基因克隆及初步分析

急性病毒性坏死症病毒基因克隆及初步分析

贝类学会第七次会员代表大会暨第十一次学术讨论会

作者：艾海新王崇明韩文君王秀华李赟宋微波黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室黄海水产研究所农业部海洋渔业资源可持续利用重点开放实验室中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室

＜正＞使用传统的蛋白酶k裂解法提取造成栉孔扇贝大规模死亡的急性病毒性坏死症（Acute Virus Necrobiotic Virus,AVND）病毒核酸,分别用DNase、RNase和绿豆芽核酸酶处理表明,该病毒为单链不分节段的RNA病毒。使用Invitrogen Trizol试... 详细信息

＜正＞使用传统的蛋白酶k裂解法提取造成栉孔扇贝大规模死亡的急性病毒性坏死症（Acute Virus Necrobiotic Virus,AVND）病毒核酸,分别用DNase、RNase和绿豆芽核酸酶处理表明,该病毒为单链不分节段的RNA病毒。使用Invitrogen Trizol试剂提取AVND病毒RNA,使用Invitrogen SuperScript Choice System for cDNA Synthesis试剂盒反转录合成cDNA,并用cDNA Size

关键词：栉孔扇贝病毒核酸 cDNA 克隆序列

CarcinoPred-EL:使用分子指纹和集成学习方法预测化学物质致癌性的新模型

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CarcinoPred-EL:使用分子指纹和集成学习方法预测化学物质致癌性...

中国生理学会张锡钧基金会第十四届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十二届全国青年生理学工作者学术会议

作者：张力艾海新陈稳尹子墨胡桓朱俊峰赵健赵琪刘宏生辽宁大学生命科学院

化合物的致癌性作为一种严重的毒性效应,已经成为药物开发过程中的重要问题。化合物的致癌性通常使用长期动物实验来检验,而这些实验不仅耗时耗力,成本很高,且不能对大量化合物进行检验。因此,使用计算机方法依据化合物的结构预测其致... 详细信息

化合物的致癌性作为一种严重的毒性效应,已经成为药物开发过程中的重要问题。化合物的致癌性通常使用长期动物实验来检验,而这些实验不仅耗时耗力,成本很高,且不能对大量化合物进行检验。因此,使用计算机方法依据化合物的结构预测其致癌性已成为近年来研究的焦点。本研究从CPDB等数据库中收集了1003个已知大鼠致癌活性的化合物(其中致癌化合物494个、

关键词：分子指纹新模型化合物集成学习方法化学物质 CarcinoPred-EL

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禽流感病毒NS1蛋白亚细胞定位研究

动物医学进展 2011年第10期32卷 10-14页

作者：朱春玉孙婷婷郑方亮艾海新朱俊丰王宁商玲玲刘宏生辽宁大学生命科学院辽宁省高校动物资源与疫病防治重点实验室辽宁沈阳110036

为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细... 详细信息

为深入研究NS1蛋白的生物学功能,了解NS1蛋白在哺乳动物细胞中的分布和亚细胞定位情况。采用RT-PCR扩增出禽流感病毒NS1基因片段,克隆至载体pEGFP-N1,经酶切和测序鉴定后,将构建的重组质粒pEGFP-N1-NS1经脂质体介导转染293T细胞和Hela细胞,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察NS1在细胞中的分布、亚细胞定位情况。成功构建了真核重组表达质粒pEGFP-N1-NS1,并在293T细胞及Hela细胞中得到高效表达。融合蛋白发出的绿色荧光表明NS1蛋白主要分布在细胞核,在胞浆中有少量表达。本研究成功在哺乳动物细胞中表达NS1蛋白,并对其进行亚细胞定位,为流感病毒的相关功能研究奠定了基础。

关键词：禽流感病毒 NS1蛋白亚细胞定位

一株新的高效解无机磷菌LNUT07的分离鉴定及其生物学特性的初步研究

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辽宁大学学报（自然科学版） 2013年第3期40卷 272-277页

作者：艾海新谭艳妮车雨辰陈佳佳黄林刘宏生辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁省生物大分子计算模拟与信息处理工程技术中心辽宁沈阳110036

对采自辽宁省沈阳市郊区的棚室土壤样品,开展解无机磷细菌分离纯化和筛选的研究.根据解磷圈直径和菌落直径比值大小,通过平板法初步筛选到了7株解无机磷细菌,进一步根据钼锑抗比色原理通过液体摇瓶培养法复筛出1株解无机磷能力最强的菌... 详细信息

对采自辽宁省沈阳市郊区的棚室土壤样品,开展解无机磷细菌分离纯化和筛选的研究.根据解磷圈直径和菌落直径比值大小,通过平板法初步筛选到了7株解无机磷细菌,进一步根据钼锑抗比色原理通过液体摇瓶培养法复筛出1株解无机磷能力最强的菌株LNUT07,测定其解磷能力,高达796.487mg/L,同时对该菌株进行了形态特征观察、生理生化特性、BIOLOGGN测定、16SrDNA序列分析等一系列试验,初步鉴定其为鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii).

关键词：解无机磷细菌分离解磷能力 16 S rDNA BIOLOG GN

纳豆激酶的原核表达、纯化及其特性分析（英文）

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微生物学杂志 2017年第1期37卷 20-27页

作者：艾海新张力张新刚陈思瑶胡桓魏洪运蒙新睿王天琦赵健刘宏生辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁省生物大分子计算模拟与信息处理工程技术研究中心辽宁沈阳110036 辽宁省药物分子模拟与设计工程实验室辽宁沈阳110036 沈阳神州天盛生物科技有限公司辽宁沈阳110036 辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

纳豆激酶(Nattokinase)作为一种新型溶解血栓的纤维蛋白溶解酶,有着广阔的市场前景和巨大的产业化潜力。本研究从枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵液中提取、纯化纳豆激酶,依次通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析方法纯... 详细信息

纳豆激酶(Nattokinase)作为一种新型溶解血栓的纤维蛋白溶解酶,有着广阔的市场前景和巨大的产业化潜力。本研究从枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)发酵液中提取、纯化纳豆激酶,依次通过硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和疏水层析方法纯化纳豆激酶,纯化倍数为5.2,纯化率为46.3%。纯化后的纳豆激酶经SDS-PAGE电泳显示相对分子量约为28 kD a,纤维蛋白平板法显示活性为4 580 IU/mg。但纳豆激酶在枯草芽胞杆菌发酵液中的含量较低,因此在原核表达载体大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中克隆并高效表达了纳豆激酶基因,其纳豆激酶产量显著提高,但酶活相对降低。

关键词：纳豆激酶纯化原核表达