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KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9表达与肝细胞癌侵袭转移关系的研究

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KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9表达与肝细胞癌侵袭转移关系的研究

作者：臧盛兵福建医科大学

学位级别：硕士

目的:从mRNA和蛋白水平上,检测KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达情况,探讨KiSS-1、KiSS-1R及MMP-9表达与HCC侵袭转移的关系及其意义。方法:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测33例HCC、2例静脉癌栓、26例癌旁肝组织、13例远癌肝组织中KiSS-1、KiSS-1R mRNA的表达情况,并分析其与各临床病理参数的关系及其意义;对手工制作组织芯片的方法进行改良,构建含有HCC、肝内转移灶、癌旁肝组织、远癌肝组织以及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化、原位杂交方法及彩色图像分析技术从蛋白质水平上检测了150例HCC、137例癌旁肝组织、98例远癌肝组织、37例肝内转移灶和16例正常肝组织及从mRNA水平上检测了137例HCC、119例癌旁肝组织、85例远癌肝组织、28例肝内转移灶和16例正常肝组织中KiSS-1、MMP-9的表达情况,并分析其与各临床病理参数的关系及其意义。结果: 1、RT-PCR结果显示KiSS-1mRNA在HCC中表达明显低于癌旁、远癌肝组织(P0.05)。KiSS-1R的表达与HCC年龄、性别、AFP水平、肿瘤大小、包膜侵犯、组织学类型、分化程度、转移与否、病理学分级、临床分期等临床病理参数均无关(P>0.05)。KiSS-1和KiSS-1R mRNA的表达在HCC侵袭转移中存在负相关性( P 0.05)。HCC组的MMP-9表达明显高于癌旁、远癌肝组织及正常肝组织组(P0.05)。在蛋白和mRNA水平上, KiSS-1和MMP-9的表达在HCC侵袭转移中存在负相关性。结论: 1、对手工制作组织芯片的方法进行了改良,成功构建8个35 mm×25 mm×10 mm大小的含有HCC、癌旁肝组织、远癌肝组织以及肝内转移灶和正常肝组织的芯片蜡块。改良的手工制作组织芯片的方法省时省力,节约了实验费用,同时芯片脱片率低,而样本有效率高,芯片组织符合镜下组织学观察和后续进一步研究的需要;2、KiSS-1的缺失表达及MMP-9高表达与HCC的侵袭转移密切相关;3、KiSS-1R的表达与HCC年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、转移与否、临床分期等临床病理参数均无关;4、在HCC组织中, KiSS-1R mRNA的表达随着KiSS-1 mRNA表达降低而升高,KiSS-1和KiSS-1R mRNA的表达存在负相关性,推测由于KiSS-1表达水平的下调反馈性的引起KiSS-1R表达水平的升高,两者表达可能存在反馈性的调控机制;5、在HCC组织中,无论是蛋白还是mRNA水平,KiSS-1和MMP-9的表达存在负相关性,提示KiSS-1、MMP-9在HCC进展的过程中彼此相互作用,共同调控着HCC的侵袭转移的生物学行为;6、KiSS-1的缺失表达及MMP-9高表达是促进HCC侵袭与转移的重要因素,可作为预测HCC转移潜能的有价值的参考指标。

关键词：原发性肝癌 KiSS-1 KiSS-1R MMP-9 肿瘤转移逆转录聚合酶链反应组织芯片免疫组织化学原位核酸杂交图像分析

肝细胞癌中与转录激活因子3相互结合的蛋白质的筛选及验证

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中华病理学杂志 2016年第5期45卷 314-317页

作者：李小燕臧盛兵方雪婷马小杰黄爱民福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室福州350001 福建医科大学附属协和医院病理科

目的筛选及验证肝癌细胞中与转录激活因子3（ATF3）相互结合的蛋白质，初步探讨在肝癌发生发展中协助ATF3发挥生物学功能的相关分子机制。方法应用免疫沉淀法沉淀出HepG2细胞中与ATF3相互结合的蛋白，经变性聚丙烯凝胶分析，与空载体组... 详细信息

目的筛选及验证肝癌细胞中与转录激活因子3（ATF3）相互结合的蛋白质，初步探讨在肝癌发生发展中协助ATF3发挥生物学功能的相关分子机制。方法应用免疫沉淀法沉淀出HepG2细胞中与ATF3相互结合的蛋白，经变性聚丙烯凝胶分析，与空载体组比对，挑选出差异性的电泳条带进行蛋白质谱分析，筛选出候选蛋白；再经免疫共沉淀验证二者是否相互结合；应用免疫组织化学及Westernblot检测并分析ATF3和候选蛋白在肝癌中的表达模式。结果过表达ATF3的HepG2实验组呈现出差异性表达的电泳条带；经质谱检测，Mascot软件分析及NCBI数据库检索，得到候选蛋白肽段信息，结合前期实验结果，PubMed文献报道，从中筛选出与ATF3最可能相关的蛋白gelsolin（GSN）；免疫共沉淀结果验证了ATI^3与GSN相互结合的关系，免疫组织化学及Westernblot检测出肝癌组织中ATF3与GSN的表达模式一致。结论ATF3可能通过与GSN蛋白之间的相互作用，在肝癌形成过程中协同发挥抑癌作用。

关键词：肝细胞癌转录激活因子3 蛋白质类

利用组织芯片研究COX-2和mPGES-1在肝细胞癌中的表达及意义

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中国肿瘤临床 2007年第16期34卷 905-908页

作者：臧盛兵黄爱民高凌云刘景丰陈水平福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室福州市350004 福建医科大学附属第一医院肝脏外科

目的:检测COX-2和mPGES-1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的意义。方法:构建含HCC、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化和图像分析技术检测COX-2和mPGES-1蛋... 详细信息

目的:检测COX-2和mPGES-1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的意义。方法:构建含HCC、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化和图像分析技术检测COX-2和mPGES-1蛋白的相对表达量,进行半定量分析。结果:COX-2和mPGES-1在HCC中表达均高于正常肝组织(P0.05)。结论:COX-2和mPGES-1与HCC的发生密切相关,mPGES-1可能在HCC进展期发挥重要作用,选择性抑制mPGES-1有可能成为治疗HCC新的靶点。

关键词：肝细胞癌 COX-2 mPGES-1 组织芯片

微粒体前列腺素E合成酶-1在肝细胞癌发生、发展及侵袭转移中的作用

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中华肝脏病杂志 2011年第5期19卷 356-361页

作者：连渊娥刘景丰汪晓军臧盛兵黄爱民福建医科大学基础医学院病理学系、福建医科大学肿瘤研究室福州350004 福建医科大学附属第一医院肝脏外科

目的检测微粒体前列腺素E合成酶（mPGES）-1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达,观察其抑制剂MK886下调mPGES-1表达后对肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响,探讨mPGES-1在HCC发生、发展及侵袭转移中的作用.方法收集HCC,癌旁、远癌及正常肝... 详细信息

目的检测微粒体前列腺素E合成酶（mPGES）-1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达,观察其抑制剂MK886下调mPGES-1表达后对肝癌细胞株HepG2生物学行为的影响,探讨mPGES-1在HCC发生、发展及侵袭转移中的作用.方法收集HCC,癌旁、远癌及正常肝组织标本,用RT-PCR及Western blot检测mPGES-1 mRNA及蛋白的相对表达量.分别采用四甲基偶氮唑盐法、Transwell法检测MK886下调mPGES-1表达后对HepG2细胞增殖,黏附,迁移、侵袭能力的影响.计量资料若数据呈正态分布且方差齐,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两均数比较用LSD-t检验;若数据非正态分布或方差不齐,用多个样本比较的Kruskal-Wallis H秩和检验,两两比较用Mann-Whitney U秩和检验.结果 mPGES-1在HCC中表达水平高于正常肝组织（P〈0.01）;随病理学分级的升高,mPGES-1表达量逐渐增高;包膜侵犯组中mPGES-1表达量高于无包膜侵犯组（P〈0.01）;转移组高于无转移组（P〈0.01）.MK886作用于HepG2细胞48 h后,mPGES-1 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（F=140.402,P〈0.01; α＇=0.00714,P〈0.01）,并呈剂量依赖性.与对照组比较,MK886作用后HepG2细胞增殖抑制率呈明显的时间和剂量依赖性.20、40,75 μmol/LMK886实验组细胞黏附率分别为85.3%±1.3%、70.5%±1.5%、45.8%±2.4%,明显低于对照组的100.0%±0（F=626.313,P〈0.01）.迁移实验显示20、30、40 vmol/L MK886实验组细胞24h的迁移细胞数分别为每高倍视野（92.47±1.90）个、（62.63±1.96）个、（37.33±0.83）个,低于对照组迁移细胞数[（128.93±2.60）个,F=1253.805,P〈0.01].侵袭实验显示20,30,40μmol/L MK886实验组细胞24 h的侵袭细胞数分别为每高倍视野（41.67±1.30）个、（25.47±1.30）个,（13.93±1.66）个,对照组侵袭细胞数为（55.67±2.08）个,各组间差异均有统计学意义（F=372.615,P〈0.01）.MK886作用后HepG2细胞的黏附率、迁移及侵袭细胞数均呈剂量依赖性降低.结论 mPGEs-1与HCC的发生、发展密切相关,其表达下调预示可降低HCC的侵袭、转移潜能.

关键词：癌,肝细胞肿瘤侵润肿瘤转移微粒体前列腺素E合成酶-1

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病理学实验教学中创新教育的探讨与实践

福建医科大学学报（社会科学版） 2009年第1期10卷 42-44页

作者：臧盛兵福建医科大学病理学系福建福州350004

开展创新教育对于培养学生创新思维和创新能力具有十分重要的意义。文章通过优化组合多媒体教学、改革病理学实验教学内容及模拟情境式教学三个方面探讨了病理学实验教学中创新教育的途径与方法。

关键词：创新教育病理学实验教学

生存素、p27和PTEN在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

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中华肝脏病杂志 2008年第1期16卷 17-20页

作者：黄爱民丁毅刘景丰高凌云臧盛兵陈水平福建医科大学基础医学院病理学系、肿瘤研究室福州350004 福建医科大学附属厦门第一医院病理科福建医科大学附属第一医院肝病中心

目的探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床病理意义。方法自制组织芯片，采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、P... 详细信息

目的探讨生存素蛋白、生存素mRNA、p27蛋白、p27mRNA和第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）蛋白在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床病理意义。方法自制组织芯片，采用免疫组织化学和原位杂交法检测生存素蛋白、p27蛋白、PTEN蛋白和生存素mRNA、p27mRNA在141份肝细胞癌、128份癌旁肝组织、97份远癌肝组织及17份正常肝组织中的表达，探讨各指标的关系并建立预测肝癌发生的模型。结果肝癌组中生存素蛋白（Ridit值的95％甜为0．689±0．048，P〈0．01）、生存素mRNA（Ridit值的95％甜为0．690±0．049，P〈0．01）和p27蛋白（Ridit值的95％a为0．556±0．053，P〈0．05）表达明显增高，PTEN（Ridit值的95％a为0．282±0．048）表达明显下降（P〈0．01）；肝癌中生存素的表达与p27、PTEN表达均显著相关；生存素mRNA、p27蛋白和PTEN蛋白对判断肝癌发生与否有重要意义。结论生存素mRNA、p27蛋白的表达上调和PTEN蛋白的表达下调可作为判断肝癌发生的有价值指标。

关键词：癌肝细胞基因生存素第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因

APEX1单核苷酸多态性与肝癌易感性关系的研究

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福建医科大学学报 2016年第2期50卷 88-92页

作者：郑智华黄爱民高美钦臧盛兵泉州医学高等专科学校基础医学部病理教研室泉州362000 福建医科大学基础医学院病理学系福州350004

目的探讨中国福建人群APEX1单核苷酸多态性(SNP)与肝细胞癌(HCC)易感性的关系。方法应用连接酶检测反应(LDR)及直接测序法检测APEX1rs2307486、rs1130409及rs33956927 3个SNP位点,并进行连锁不平衡及单倍型分析,探讨3个SNP在福建HCC人... 详细信息

目的探讨中国福建人群APEX1单核苷酸多态性(SNP)与肝细胞癌(HCC)易感性的关系。方法应用连接酶检测反应(LDR)及直接测序法检测APEX1rs2307486、rs1130409及rs33956927 3个SNP位点,并进行连锁不平衡及单倍型分析,探讨3个SNP在福建HCC人群中的分布情况,并分析其与该人群HCC易感性的关系。结果相对于GG基因型,rs33956927位点的GA基因型增加了患HCC的风险(P=0.002),而rs2307486和rs1130409多态性与HCC易感性无关(P>0.05)。结论 APEX1rs33956927多态位点携带GA基因型人群可能对HCC更易感,APEX1rs33956927多态性可作为筛查HCC好发的危险因素;rs2307486和rs1130409多态性与HCC的发生无关。

关键词：肝肿瘤肿瘤基因多态性,单核苷酸多态现象,遗传聚合酶链反应

结直肠癌组织ATF3及其靶基因Cyclin D1与Maspin表达的临床意义分析

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中华肿瘤防治杂志 2012年第24期19卷 1870-1874页

作者：臧盛兵郁万媛陈虹施磊健李婷婷陈安敏陈虹黄爱民福建医科大学基础医学院病理学系福建福州350108 福建医科大学附属第一医院病理科福建福州350004

目的:检测转录激活因子3(ATF3)及其靶基因Cyclin D1与Maspin在结直肠癌组织芯片中的表达,探讨ATF3表达在结直肠癌发生、发展中的意义。方法:构建含结直肠癌及癌旁相对正常肠黏膜的组织芯片,应用免疫组织化学检测ATF3、Cyclin D1及Maspi... 详细信息

目的:检测转录激活因子3(ATF3)及其靶基因Cyclin D1与Maspin在结直肠癌组织芯片中的表达,探讨ATF3表达在结直肠癌发生、发展中的意义。方法:构建含结直肠癌及癌旁相对正常肠黏膜的组织芯片,应用免疫组织化学检测ATF3、Cyclin D1及Maspin的表达情况。结果:ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中阳性表达率分别为70.3%、51.4%和59.5%,明显高于癌旁正常组织的21.6%、2.7%和13.5%,差异有统计学意义,χ2值分别为35.252、44.411和33.689,P值均为0.000;ATF3与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及肿瘤分化程度无关,而与浸润程度和淋巴结有无转移有关,浆膜层表达(83.3%)高于肌层(38.9%),有淋巴结转移(92.3%)高于无淋巴结转移(45.7%),χ2值分别为13.290和17.110,P值均为0.000;Cyclin D1与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位及肿瘤大小无关,而与病理学分级、浸润程度和淋巴结有无转移有关,低分化组织表达(71.4%)高于高中分化组织(39.1%),浆膜层表达(61.1%)高于肌层(28.8%),有淋巴结转移(69.2%)高于无淋巴结转移(31.4%),χ2值分别为7.268、6.019和10.550,P值分别为0.007、0.014和0.001;Maspin与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、肿瘤分化程度、浸润深度及有无淋巴结转移均无关,P值均>0.05。ATF3、Cyclin D1与Maspin在结直肠癌中均高表达,ATF3与Cyc-lin D1在结直肠癌中表达呈正相关(r=0.362,P=0.000),与Maspin表达无明显相关(r=0.075,P=0.513)。结论:ATF3表达与结直肠癌的发生密切相关,ATF3可能通过调控Cyclin D1表达而促进结直肠癌的发生发展及侵袭转移。

关键词：结直肠肿瘤/病理学 ATF3 CyclinD1 Maspin 免疫组织化学

KiSS-1与肝癌细胞增殖及黏附和侵袭关系的体外实验研究

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中华肝脏病杂志 2012年第12期20卷 925-929页

作者：徐玫芳臧盛兵刘景丰高凌云高美钦杨映红黄爱民福建医科大学附属协和医院病理科福州350004 福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室福建医科大学附属第一医院肝病中心

目的观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础。方法培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H，瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组，转染空载体pcDNA3．1／HiS... 详细信息

目的观察KiSS-1基因表达对肝癌细胞体外增殖、黏附及侵袭能力的影响，为进一步探讨其抗肝细胞癌侵袭转移的机制奠定基础。方法培养具有高转移潜能的人肝癌细胞株MHCC97-H，瞬时转染KiSS-1基因的细胞为实验组，转染空载体pcDNA3．1／HiSC的细胞为空白对照组，未转染细胞为阴性对照组，采用流式细胞术与四甲基偶氮唑盐法、基质黏附实验、Transwell体外侵袭和趋化运动实验检测KISS-1表达对MHCC97-H细胞体外增殖、黏附、侵袭和运动能力的影响。应用SPSS13．0统计软件包进行统计分析，组间差异以两样本t检验分析。结果转染组、空载体组和未转染组与Matrigel基质的黏附能力（A值）分别为0．257±0．029、0．374±0．016和0．394±0．031，转染组明显低于空载体组（t=-7．90345，P〈0．01）和未转染组（t=-7．22752，P〈0．01）；与Fibronectin基质的黏附能力（A值）分别为0．292±0．004、0．394±0．010和0．412±0．023，转染组明显低于空载体组（t=-20．93138，P〈0．01）和未转染组（t=-11．31371，P〈0．01）;趋化运动至Transwell小室下室表面的细胞数分别为65．80±1．92、93．80±2．28和96．40±2．07，转染组明显低于空载体组（t=-30．11750，P〈0．01）和未转染组（t=-24．19142，P〈0．01）;侵袭至Transwell小室下室表面的细胞数为42．40±1．14、66．00±1．58和67．80±1．92，转染组明显低于空载体组（t=-27．0711，P〈0．01）和未转染组（t=一25．4，P〈0．01）。而转染组、空载体组和未转染组的细胞增殖能力（A值）分别为0．644±0．027、O．669±0．022和0．678±0．027，转染组略低于空载体组（t=一1．60371，P〉0．05）和未转染组（t=-1．97828，P〉0．05）}同时，转染组较空载体组和未转染组未出现明显的G1期阻滞和S期阻滞，也未出现明显的凋亡峰。结论KISS-1表达虽不影响肝癌细胞的体外增殖能力，但可抑制其黏附、侵袭和运动能力，提示KISS-1可作为一个候选的肝细胞癌转移抑制基因，可望成为肝癌侵袭转移治疗的新靶点。

关键词：癌,肝细胞细胞增殖基因,肿瘤抑制