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髓样细胞激活受体2调控氧糖剥夺/复氧模型小鼠小胶质细胞向M2型极化

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解剖学报 2021年第3期52卷 329-336页

作者：胥虹贝罗勇重庆医科大学附属医院神经内科重庆400016 贵州医科大学附属医院神经内科贵阳550004

目的探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制。方法体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型。将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、... 详细信息

目的探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制。方法体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒(LV-TREM2)转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型。将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、OGD/R+LV-scramble组和OGD/R+LV-TREM2组。Real-time PCR检测TREM2 mRNA在OGD/R组细胞复氧72 h内表达情况。免疫荧光染色观察慢病毒LV-scramble和LV-TREM2在正常N9小胶质细胞内转染情况,Real-time PCR和Western blotting验证慢病毒转染效率,Real-time PCR和ELISA检测小胶质细胞M1型标志物肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和诱生型一氧化氮合酶(i NOS)及M2型标志物精氨酸酶1(Arg-1)和IL-10 mRNA和蛋白表达情况。Western blotting检测磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Akt、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-ⅠκBα)和ⅠκBα蛋白含量,免疫荧光分析核因子κB P65(NF-κB P65)蛋白在细胞内分布情况。结果复氧72 h内,OGD/R组细胞TREM-2 mRNA含量明显增加,高峰位于24 h和48 h;慢病毒LV-TREM2可有效促进OGD/R组细胞TREM2 mRNA和蛋白表达(P<0.001,P<0.01)。与OGD/R组相比,OGD/R+LV-TREM2组TNF-α、IL-1β和i NOS mRNA和蛋白明显降低,而Arg-1和IL-10 mRNA和蛋白含量明显升高(P<0.05);此外,OGD/R+LV-TREM-2组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显升高(P<0.05),p-ⅠκBα/ⅠκBα比值显著下降(P<0.001),且NF-κB P65蛋白核转位明显被削弱。结论TREM-2过表达可促进OGD/R模型小胶质细胞向M2型转化从而发挥抗炎作用,该作用与TREM-2调控小胶质细胞PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。

关键词：氧糖剥夺/复氧髓样细胞激活受体2 磷脂酰肌醇-3激酶蛋白激酶B 核因子κB 免疫印迹法小胶质细胞

电针通过PI3K/AKT信号通路促进MCAO/R大鼠脑内血管再生的实验研究

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电针通过PI3K/AKT信号通路促进MCAO/R大鼠脑内血管再生的实验研究

作者：胥虹贝重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:1.观察电针对MCAO/R大鼠神经功能恢复的影响;2.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓及外周血CD34+EPCs数量的影响;3.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓p-AKT蛋白表达的影响;4.探讨电针对MCAO/R大鼠大脑皮质缺血区p-AKT、eNOS、MMP-9表达的影响;5.探... 详细信息

目的:1.观察电针对MCAO/R大鼠神经功能恢复的影响;2.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓及外周血CD34+EPCs数量的影响;3.探讨电针对MCAO/R大鼠骨髓p-AKT蛋白表达的影响;4.探讨电针对MCAO/R大鼠大脑皮质缺血区p-AKT、eNOS、MMP-9表达的影响;5.探讨电针对MCAO/R大鼠大脑皮质区缺血微血管密度、脑梗死体积的影响;6.探讨电针能否通过PI3K/AKT信号通路促进骨髓EPCs动员至外周血,参与MCAO/R大鼠大脑皮质缺血区血管再生。方法:采用改良线栓法制备雄性SD大鼠局灶脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型,120只SD SPF级雄性大鼠随机分为四组:假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+LY294002组(I/REL组)。局灶脑缺血90min后,根据再灌注时间点的不同,将除Sham组以外的各组分为24h、48h、7d三个亚组。取大鼠“百会”穴(GV20)及左侧“四关”穴为电针穴位,于再灌注一小时后进行电针刺激,每次20分钟,每日1次,最长时间为7d。采用zea-longa5分法进行神经功能缺损评分,采用流式细胞术检测骨髓、外周血cd34+epcs的数量变化,采用westernblot检测骨髓p-akt蛋白表达情况,采用westernblot检测大脑皮质缺血区p-akt蛋白表达情况,采用免疫组化检测大脑皮质缺血区enos、mmp-9蛋白、cd34+微血管密度(microvesseldensity,mvd)表达规律,采用荧光定量pcr检测大脑皮质缺血区enosmrna表达情况;ttc染色观察局灶脑缺血灌注后第7d各组别脑梗死体积。结果:1.各组大鼠神经功能缺损评分除sham组无神经功能缺损症状。其余各组大鼠行mcao/r术后,均呈现出不同程度的神经功能缺损症状。i/re组再灌注24h、48h及7d,神经功能缺损症状逐渐改善,与i/r组相比,于再灌注后第7d神经功能缺损评分显著降低(p0.05)。2.电针对mcao/r大鼠骨髓cd34+epcs数量的影响大鼠局灶脑缺血/再灌注后24h、48h,i/r组骨髓cd34+epcs数量较sham组明显升高(p0.05)。电针刺激后,骨髓cd34+epcs于再灌注后各时间点较i/r组明显升高(p<0.05),后随再灌注时间延长而逐渐降低。阻断pi3k作用后,电针刺激未能显著上调骨髓cd34+epcs数量,i/rel组cd34+epcs数量较i/re组显著降低(p<0.05)。3.电针对mcao/r大鼠外周血cd34+epcs数量的影响再灌注后24h、48h,i/r组cd34+epcs数量较sham组显著增多(p<0.01),7d时降至sham组水平。i/re组cd34+epcs数量在再灌注后各时间点较i/r组增多更为显著(p<0.05)。腹腔注射ly-294002干预后,i/rel组的cd34+epcs数量较i/re组显著降低(p<0.05)。4.电针对mcao/r大鼠骨髓p-akt蛋白表达影响sham组p-akt表达较少。i/r组p-akt蛋白随再灌注时间延长而逐渐增多,且明显高于sham组(p<0.01)。i/re组p-akt表达较i/r组明显增高(p<0.05)。在pi3k特异性拮抗剂ly294002作用下,电针刺激未能有效提高p-akt表达,i/rel组p-akt表达明显低于i/re组(p<0.05)。5.电针对mcao/r大鼠大脑皮质缺血区p-akt表达的影响sham组p-akt蛋白表达较少,i/r组大脑皮质缺血区p-akt蛋白表达随再灌注时间延长而逐渐升高,且明显高于sham组(p<0.01),i/re组各时间点p-akt表达较i/r明显增高(p<0.05)。ly294002阻断pi3k作用后下,电针刺激未能有效提高p-akt表达,i/rel组p-akt表达低于i/re组(p<0.05)。6.电针对mcao/r大鼠大脑缺血皮质区enos蛋白和mrna表达的影响i/r和i/re组再灌注后各时间点enos表达均显著高于sham组(p<0.01),i/re组各时间点enos的表达较i/r组增多(p<0.05)。使用ly294002阻断pi3k作用后,i/rel组enos表达较i/re组降低(p<0.05)。7.电针对mcao/r大鼠大脑缺血皮质区mmp-9蛋白表达的影响sham组大脑皮质mmp-9表达很少。与sham组相比,i/r组mmp-9表达于再灌注后24h开始增加(p<0.05),48

关键词： MACO/R 电针内皮祖细胞 PI3K/AKT eNOS/MMP-9 血管再生

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去泛素化酶OTULIN研究进展

中国免疫学杂志 2021年第17期37卷 2170-2174页

作者：胥虹贝罗勇(指导) 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 贵州医科大学附属医院神经内科贵州550004

泛素化是指以泛素为信号分子,与靶蛋白共价结合的一种有序的、多样的翻译后修饰方式,广泛存在于真核生物,对机体生长发育、基因转录、DNA损伤修复、蛋白质翻译、信号传导、细胞增殖、分化等多种细胞生物学功能起重要作用。线性泛素链是... 详细信息

泛素化是指以泛素为信号分子,与靶蛋白共价结合的一种有序的、多样的翻译后修饰方式,广泛存在于真核生物,对机体生长发育、基因转录、DNA损伤修复、蛋白质翻译、信号传导、细胞增殖、分化等多种细胞生物学功能起重要作用。线性泛素链是一种新型泛素化修饰。目前,去泛素化酶OTULIN是唯一可特异性降解线性泛素链的去泛素化酶,参与调节多种细胞生理功能。本文就OTULIN结构和生理作用的研究现状进行综述。

关键词：泛素化线性泛素链 OTULIN

大鼠局灶脑缺血/再灌注后骨髓内皮祖细胞动员轨迹的追踪

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第3A期23卷 229-235页

作者：朱艳含罗勇胥虹贝王盼欣重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆400016

目的观察大鼠局灶脑缺血/再灌注后骨髓内皮祖细胞(EPCs)能否动员至外周血进而归巢到缺血脑区。方法线栓法制备局灶脑缺血/再灌注模型。130只SD雄性大鼠完全随机分为模型+生理盐水组、模型+DIL-acLDL组。荧光共聚焦技术观察1d后骨髓腔内... 详细信息

目的观察大鼠局灶脑缺血/再灌注后骨髓内皮祖细胞(EPCs)能否动员至外周血进而归巢到缺血脑区。方法线栓法制备局灶脑缺血/再灌注模型。130只SD雄性大鼠完全随机分为模型+生理盐水组、模型+DIL-acLDL组。荧光共聚焦技术观察1d后骨髓腔内细胞摄取DIL-acLDL的情况;1d、2d、3d、7d观察骨髓、外周血CD34+DIL-acLDL+双阳性细胞及缺血大脑皮质区DIL-acLDL+阳性细胞情况;免疫组织化学法比较各组大鼠大脑缺血侧及未缺血侧皮质区CD34+血管表达;荧光定量PCR法比较各组大鼠大脑缺血侧及未缺血侧皮质区CD34mRNA表达。结果生理盐水组荧光共聚焦结果为阴性,DIL-acLDL组1d后骨髓腔内观察到红色标记的DIL-acLDL+阳性细胞,并分别于1d、2d、3d、7d后在骨髓及外周血中观察到CD34+DIL-acLDL+双阳性细胞,在缺血大脑皮质区未检测到DIL-acLD L+阳性细胞,但3d、7d缺血大脑皮质侧CD34+血管及CD34m RNA的表达明显高于未缺血侧(P<0.01,P<0.05),且表达量均随时间的推移而增多(P<0.01)。结论DIL-acLDL可标记活体大鼠骨髓腔内细胞,且骨髓腔内EPCs可动员至外周血并促大脑缺血皮质区血管再生。

关键词：局灶脑缺血/再灌注内皮祖细胞 DIL-acLDL CD34

电针介导eNOS动员内源性EPCs促MCAO/R大鼠脑内血管再生

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中国实验动物学报 2015年第3期23卷 291-296页

作者：朱艳含罗勇胥虹贝王盼欣重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆400016

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(e NOS)在电针干预下对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量变化的影响,及其促大鼠脑内血管再生的机制。方法线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,针刺"百会"穴及左侧"四关"穴。100只S... 详细信息

目的探讨内皮型一氧化氮合酶(e NOS)在电针干预下对局灶脑缺血/再灌注大鼠骨髓及外周血中内皮祖细胞(EPCs)数量变化的影响,及其促大鼠脑内血管再生的机制。方法线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,针刺"百会"穴及左侧"四关"穴。100只SD雄性大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+L-NAME组(I/REL组)。除N组外的各组局灶脑缺血1.5 h后分为再灌注1、2、7 d三个亚组,每个亚组10只大鼠。在各时间点采用流式细胞术检测外周血及骨髓中VEGFR2+EPCs数量,荧光定量PCR技术检测缺血皮质区VEGFR2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测缺血皮质区VEGFR2阳性细胞表达及CD34标记的微血管计数。结果与I/R组比较,电针可明显提高骨髓及外周血中EPCs的数量(P<0.01,P<0.05),而I/REL组的VEGFR2+EPCs数量相比于I/RE组则显著降低(P<0.01)。各时间点I/RE组缺血皮质区VEGFR2阳性细胞表达,VEGFR2 mRNA表达及CD34微血管计数明显高于I/R组(P<0.01),而I/REL组与之比较则显著减少(P<0.01)。结论电针可动员局灶脑缺血/再灌注大鼠内源性EPCs促大鼠缺血脑区血管再生,该作用在e NOS被抑制后减弱,推测电针动员EPCs促血管再生的作用与e NOS的激活有关。

关键词：局灶脑缺血/再灌注 EPCs eNOS 电针血管再生脑大鼠

过表达CYLD对氧糖剥夺/复氧大鼠原代皮质神经元中NF-κB信号通路的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第8期41卷 1551-1557页

作者：朱君胥虹贝周雪灵卢文豪罗勇重庆医科大学附属第一医院神经内科

脑卒中是目前导致我国人口寿命缩短的最主要原因之一。在缺血性脑卒中的局灶性缺血/再灌注后,受损脑组织中存在多种复杂的病理生理机制,核因子-κB(nuclear factor kappaB, NF-κB)信号通路参与的炎症反应是重要机制之一。相关研究显示... 详细信息

脑卒中是目前导致我国人口寿命缩短的最主要原因之一。在缺血性脑卒中的局灶性缺血/再灌注后,受损脑组织中存在多种复杂的病理生理机制,核因子-κB(nuclear factor kappaB, NF-κB)信号通路参与的炎症反应是重要机制之一。相关研究显示,头帕肿瘤综合征蛋白(cylindromatosis, CYLD)可以参与NF-κB信号通路的调节。在脑缺血/再灌注损伤中,上调CYLD表达水平,对氧糖剥夺/复氧后NF-κB信号通路是否存在影响?如何影响?尚未见明确报道,这需要我们进一步探究。该研究通过上调CYLD在SD大鼠原代皮质神经元中的表达水平,观察其对氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)后神经元中NF-κB信号通路的影响。使用过表达慢病毒感染体外培养的原代皮质神经元,采用免疫荧光实验鉴定神经元, Western blot及RT-qPCR验证CYLD的过表达情况, CCK-8实验检测细胞活力, Western blot检测p-IκBα的蛋白表达情况, RT-qPCR检测NF-κB p65的mRNA表达情况。结果显示,过表达CYLD慢病毒可有效提高神经元中CYLD的表达水平;过表达CYLD后,较对照组相比,神经元在氧糖剥夺/复氧处理后的活力有所增高, p-IκBα的表达水平有所下降,同时NF-κB p65的m RNA表达水平也明显降低。研究结果表明,在原代皮质神经元中过表达CYLD,能减轻氧糖剥夺/再复氧对神经元的损伤、抑制NF-κB信号通路的激活。

关键词： CYLD NF-κB信号通路原代皮质神经元氧糖剥夺/复氧

电针通过eNOS促进局灶脑缺血/再灌注大鼠脑缺血皮质区血管再生

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第5期23卷 381-387页

作者：胥虹贝罗勇朱艳含李娟王盼欣张莹重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆400016

目的观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区e NOS、MMP-9表达及CD34+微血管密度变化的影响,探讨电针促进大脑缺血皮质区血管再生的机制。方法 120只SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型... 详细信息

目的观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑缺血皮质区e NOS、MMP-9表达及CD34+微血管密度变化的影响,探讨电针促进大脑缺血皮质区血管再生的机制。方法 120只SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组)、模型组(I/R组)、模型+电针组(I/RE组)、模型+电针+e NOS特异性拮抗剂L-NAME组(I/REL组)。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血/再灌注模型,缺血90min后将I/R、I/RE和I/REL组分各为再灌注1d、3d和7d三个亚组。取大鼠"百会"穴(GV 20)及左侧"四关"穴(合谷LI 4/太冲LR 3)为电针穴位,刺激时间为20min/d,最长持续7d。采用免疫组化法检测各组大脑缺血皮质区e NOS、MMP-9和CD34表达,荧光定量PCR技术检测大脑缺血皮质区e NOS mRNA表达。结果与NC组比较,I/R、I/RE与I/REL组大脑缺血皮质区e NOS mRNA及蛋白表达随再灌注时间延长呈进行性增加,与I/R组比较,I/RE组各时间点e NOS mRNA及蛋白表达均显著升高,在L-NAME作用下,I/REL组e NOS mRNA及蛋白表达明显低于I/RE组。再灌注后1d、3d,I/RE组MMP-9表达明显低于I/R和I/REL组,7d时I/RE组MMP-9表达较I/R、I/REL组升高。I/RE组各时间点CD34+微血管密度升高较I/R组显著,I/REL组微血管密度明显低于I/RE组。结论电针可通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠脑缺血皮质区e NOS和MMP-9表达,促进血管再生。

关键词：局灶脑缺血/再灌注电针 L-NAME eNOS MMP-9 血管再生

基于Web of Science数据库的跨文化护理文献计量学分析

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中国护理管理 2015年第9期15卷 1058-1062页

作者：李娟罗勇胥虹贝曾婷重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市400016 贵州省人民医院护理部贵州省人民医院呼吸内科

目的 :分析跨文化护理研究领域的经典文献、重要作者和研究活跃地带,挖掘出该领域的研究热点和未来趋势。方法 :基于Web of Science数据库,应用Hist Cite分析工具及文献计量学方法,检索1950-2015年有关跨文化护理的研究论文进行文献计... 详细信息

目的 :分析跨文化护理研究领域的经典文献、重要作者和研究活跃地带,挖掘出该领域的研究热点和未来趋势。方法 :基于Web of Science数据库,应用Hist Cite分析工具及文献计量学方法,检索1950-2015年有关跨文化护理的研究论文进行文献计量研究。结果 :共检索到3455篇文献;跨文化护理论文量总体呈增长趋势;以美国为首的发达国家在该领域研究成果显著;文章类型以论著数量居第一位;热门关键词集中在文化背景的差异与交融、文化能力和护理质量、跨文化护理评估工具的开发及相关研究方法等方面。结论 :发达国家在本领域研究中居于领先地位,在某些专题上已经取得突破性进展。我国在该领域的研究上仍有较大的上升空间。

关键词：跨文化护理文献计量学

电针上调Cezanne表达抑制NF-κB信号通路介导的大鼠脑缺血/再灌注炎性损伤

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第三军医大学学报 2021年第4期43卷 283-294页

作者：卢文豪周雪灵任义昆王静文朱君胥虹贝李佳妮罗勇重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学附属第二医院神经内科重庆404010

目的探讨电针上调Cezanne的表达及对局灶脑缺血/再灌注大鼠炎性损伤的神经保护作用。方法将SD大鼠按简单随机分组分为假手术(sham)组、电针(EA)组、缺血/再灌注(MCAO/R)组和缺血/再灌注+电针(MCAO/R+EA)组,颅内注射Cezanne沉默慢病毒(LV... 详细信息

目的探讨电针上调Cezanne的表达及对局灶脑缺血/再灌注大鼠炎性损伤的神经保护作用。方法将SD大鼠按简单随机分组分为假手术(sham)组、电针(EA)组、缺血/再灌注(MCAO/R)组和缺血/再灌注+电针(MCAO/R+EA)组,颅内注射Cezanne沉默慢病毒(LV-shCezanne),空载慢病毒(vehicle)作为对照。采用改良线栓法制备右侧大脑中动脉缺血/再灌注模型,电针刺激"百会"穴和病侧"四关"穴("合谷"/"太冲"穴)。缺血2 h后分别再灌注6、12、24、48、72 h和7 d。分别采用Garcia评分、TTC染色、Western blot、细胞计数,免疫荧光检测各组神经功能评分、梗死灶体积、缺血大脑皮质区Cezanne蛋白表达、Cezanne阳性细胞数、Cezanne的细胞分布类型、细胞核与细胞质NF-κB p65蛋白的表达。结果与sham组相比,EA组Cezanne蛋白表达在6 h和48 h增加(P<0.05),MCAO/R组Cezanne蛋白表达在12、24、48、72 h和7 d时增加(P<0.05);与MCAO/R组相比,MCAO/R+EA组Cezanne蛋白表达在12、24、72 h时进一步增加(P<0.05)。相较于sham组,MCAO/R组神经评分降低(P<0.05),Cezanne阳性细胞数、脑梗死体积增加(P<0.05);相较于MCAO/R组,MCAO/R+EA组神经评分升高(P<0.05),Cezanne阳性细胞数增多(P<0.05),脑梗死体积(P<0.05)、p-IκBα/IκBα比值(P<0.05)、细胞核p65/细胞质p65比值降低(P<0.05);免疫荧光显示Cezanne主要分布在缺血大脑皮质区神经元细胞质。结论电针通过上调Cezanne蛋白的表达,抑制大鼠局灶脑缺血/再灌注后NF-κB信号通路的激活,从而发挥神经保护作用。

关键词：电针锌指蛋白Cezanne 脑缺血/再灌注神经炎症 NF-κB信号通路