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作者：胡金川第三军医大学

学位级别：硕士

肽抗生素(peptide antibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽，是生物体天然免疫的重要组成部分。在已分离的800多种肽抗生素中，绝大多数具有良好的抗菌活性和抗菌广谱性，在临床病原菌对传统抗生素耐药性日... 详细信息

肽抗生素(peptide antibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽，是生物体天然免疫的重要组成部分。在已分离的800多种肽抗生素中，绝大多数具有良好的抗菌活性和抗菌广谱性，在临床病原菌对传统抗生素耐药性日益严重的今天，肽抗生素作为一种新型的抗感染制剂，其研究倍受人们关注。本室曾用简并引物从人皮肤角质形成细胞中克隆到一人β型肽抗生素，称hPAB-β，并根据hPABβp的特性设计并筛选到了一个承载分子PaP3.30(16.7kD)，利用该分子能使hPAB-β融合蛋白在大肠杆菌中的表达量达到菌体总蛋白的40％。然而，由于目标蛋白hPAB-β(4.3kD)在整个融合蛋白分子(23.6kD)中只占约1／6，其实际表达量占菌体总蛋白的比率(表达率)仅约7％，产量依然低下。为实现hPAB-β的高效率制备，本研究首先利用同尾酶法设计并构建了hPAB-β多拷贝串联体重组质粒，并从得到的串联体基因工程菌(工程菌)中筛选出最佳工程菌，对其发酵条件进行了优化，经过对表达产物的纯化，最终得到了具有抗菌活性的目标肽抗生素hPAB-β。主要研究内容和结果如下： 1．hPAB-β多拷贝串联体的设计、构建与表达：根据hPAB-β基因序列设计1对引物，在上游引物5’端引入BamHI、AvaⅢ酶切位点和羟胺裂解位点(Asn Gly)编码序列，在下游引物5’端引入HindⅢ、PstⅠ酶切位点和Asn-Gly编码序列，将PCR扩增的hPAB-β1拷贝片段克隆到pUCm-T载体中，再经BamHI／HindⅢ双酶切后亚克隆到pQE-31质粒中，转化大肠杆菌JM109，即可获得hPAB-β1拷贝工程菌。利用AvaⅢ(ATGCA T)与Pstl(C7GCA G)互为同尾酶的特性，二酶切割后的粘性末端均为TGCA，可以进行连接，但连接后的新序列ATGCAG不被二酶再识别，采用XhoⅠ(DQE31质粒上有该酶酶切位点)／AvaⅢ和XhoⅠ／PstⅠ分别双酶切1拷贝重组质粒，回收大片段pQE-hPAB-β(1)和小片段hPAB-β(1)，进行连接，转化JM109后，即可得到hPAB-β2拷贝串联体工程菌。同理，构建了3～8拷贝串联体工程菌。对构建的重第三军医大学硕士学位论文组质粒进行BamHFHindlH双酶切鉴定和核普酸测序，结果表明，从1一8拷贝重组质粒中可分别切出大小约为154bp、292bp、430bp、568bp、706bp、844bp、982bp和1120bp 的片段，与预期结果相符，核营酸测序证实其序列和阅读框完全正确。卜8拷贝重组质粒在JM 1 09中可分别表达分子量约为6，7kD、1 1 .6kD、16.4kD、ZI.3kD、26.2kD、 31.okD、 35.9kD和4o.skD的蛋白质，与预期结果相符，采用抗h队B一p合成肤多克隆抗体进行western blotting分析，进一步证实了各拷贝菌均可表达具有正确抗原性的相应大小蛋白质。 2.多拷贝串联体工程菌的筛选:采用Quaniity One软件分析l一8拷贝工程菌中目标蛋白表达率分别为2.6%、19.7%、27.8%、28.0%、24.5%、10.2%、7.9%和5.7%，选择表达率较高的2一5拷贝工程菌，从细菌产量、融合蛋白表达形式、包涵体溶解性、亲和层析效果等方面进行比较分析。结果表明，各菌湿菌产量分别为2.1929几、 3.】539几、1.7479几和2.4249几;目标蛋白均以包涵体形式存在，其中2、3拷贝菌包涵体在含smol/L尿素溶液中可完全溶解，通过Ni一Nl’A亲和层析可完全捕获目标融合蛋白，轻胺可将融合蛋白裂解为hPAB一p单体，而4、5拷贝菌包涵体不能完全溶解，降低了目标蛋白的得率;用hPAB一p合成肚兔抗血清对基因工程表达的hPAB一p3拷贝融合蛋白进行westem blotting鉴定，结果为阳性，表明重组表达蛋白的抗原性正确。综合上述实验，确定3拷贝菌为制备重组hPAB一p的最佳工程菌。 3.3拷贝串联体工程菌发酵条件的优化:采用摇瓶对发酵培养基、发酵温度、IPTG 诱导时机、IPTG诱导浓度、IPTG诱导时间、发酵培养基中葡萄糖初始浓度、微量元素初始浓度、菌种接种量等条件进行摸索;在此基础上，采用3.7L发酵罐对发酵pH 值、溶氧条件(POZ)和补料一分批发酵的补料时机、方式等参数进行优化，最终确定了 3拷贝菌的发酵罐发酵条件为:采用含0.1%葡萄糖和10一7mol/L微量元素的改良Mg一cA 培养基，接种7%种子菌，在37oC，pH7.4，Po:为300;0一400;0条件下培养4h:(A6。。:Inl七 2.2)，以连续加速方式补料至对数后期(Po:由下降转为上升)，加终浓度为100林mol/L 的 IPTG诱导表达shr。按此条件，取ZL培养基发酵，以初速度o.7ml

关键词：肽抗生素 hPAB-β 串联体基因克隆同尾酶融合蛋白发酵蛋白质纯化亲和层析反相层析蛋白复性分子筛层析抗菌活性

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基于S7系列PLC的全氢罩式炉控制系统设计

基于S7系列PLC的全氢罩式炉控制系统设计

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作者：胡金川大连理工大学

学位级别：硕士

全氢罩式炉是目前应用最为广泛的冷轧产品退火设备,其主要特点是生产、运营、维护成本低,退火产品品质高,设备具有非常好的灵活性和延伸性。攀钢集团钢钒有限公司冷轧厂目前拥有39座全氢罩式炉,由于投用时间比较早,整个系统的控制部分... 详细信息

全氢罩式炉是目前应用最为广泛的冷轧产品退火设备,其主要特点是生产、运营、维护成本低,退火产品品质高,设备具有非常好的灵活性和延伸性。攀钢集团钢钒有限公司冷轧厂目前拥有39座全氢罩式炉,由于投用时间比较早,整个系统的控制部分已严重老化,设备和自动控制系统已经不能满足企业的实际发展需要,且关键控制技术从德国劳益公司引进,严重制约了企业罩式炉生产自动化的自我提升。为了使全氢罩式炉能在以后的生产中充分发挥产能,不断提高冷轧产品的退火品质,本文对攀钢冷轧厂全氢罩式炉整个系统的控制部分重新进行设计。本课题以攀钢冷轧厂的工艺流程为研究对象,在查阅了罩式炉相关资料的基础上,全面系统的介绍了罩式炉自动控制系统的近况以及发展趋势。通过探索和研究符合企业实际情况的基础自动化系统,结合企业罩式炉实际生产工艺需求,利用工业网技术、自动化控制电气原理、PLC技术进行设计。基于过程控制级、基础自动化级以太网及设备级现场总线,控制层采用西门子S7系列PLC,现场采用ET200M远程I/O。通过硬件、网络组态和程序设计,完成了罩式炉密封性测试、气体置换、氢气流量监控、温度控制、安全连锁及重启控制。此外,研析和总结了控制系统的运行及调试情况。本课题的研究设计严格遵循了实用、可靠及环保的原则,保证了设备和控制系统的高度自动化和可持续性。系统投入生产运行后,自动化程度高,产品质量好,生产稳定,故障率大幅下降,取得了满意的控制效果,达到了企业罩式炉生产高速化、全自动化的目的,提升产品的市场竞争力。该项目的自动化设计方案为工业自动化企业提供了一套较为实用的、可供借鉴的方法和模式。

关键词：全氢罩式炉退火 PLC 自动控制 PROFIBUS

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尿微量蛋白联合尿酶诊断肾脏轻微损害

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临床荟萃 2001年第11期16卷 511-512页

作者：胡金川颜妍杨琪杨丹中国人民解放军第281医院北京军区肾脏病中心北戴河066105

目前肾脏疾病的实验室诊断多以尿蛋白、血尿素氮、血肌酐、尿红细胞形态作为主要指标，但难以发现轻微肾损害。尿微量白蛋白(mALB)、转铁蛋白(TRF)、视黄醇结合蛋白(RBP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的单项或两项检测在以往报道... 详细信息

目前肾脏疾病的实验室诊断多以尿蛋白、血尿素氮、血肌酐、尿红细胞形态作为主要指标，但难以发现轻微肾损害。尿微量白蛋白(mALB)、转铁蛋白(TRF)、视黄醇结合蛋白(RBP)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的单项或两项检测在以往报道中多见，三项检测偶见，尿mALB、TRF、RBP对糖尿病早期肾病［1～3］，mALB、TRF对高血压患者早期肾损害诊断已有报道［4，5］，但这四项指标联合检测诊断肾脏轻微损害尚未见报道。我们采用尿mALB、TRF、RBP、NAG联合检测法，以诊断肾脏轻微损害。

关键词：肾脏疾病尿微量蛋白 mALB 转铁蛋白 TRF 尿酶临床诊断

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肾综合征出血热致慢性肾脏病一例

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中华内科杂志 2005年第10期44卷 786-787页

作者：贺发贵齐卡潘涛胡金川马路杨琪解放军第281医院肾病中河北省秦皇岛市066105 解放军第281医院肾病中心河北省秦皇岛市066105

肾综合征出血热致慢性肾脏病一例

关键词：肾综合征出血热慢性肾脏病眼球结膜充血精神不振皮肤潮红入院时出血点叩击痛双下肢水肿

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先天性女性尿道下裂(附3例报告)

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中华泌尿外科杂志 1990年第1期 17页

作者：朱刚张文胡金川刘才朱春赵殿荣锦州医学院朝阳分院泌尿外科朝阳市第一医院泌尿外科

我院于1984～1988年收治3例先天性女性尿道下裂,报告如下。 3例年龄8～25岁。已婚2例,儿童1例。症状:3例中2例尿失禁,生后分次排尿后阴道滴尿,活动及婚后加重,并逐年进展。另1例分次排尿。3例均由阴道口排尿及溢尿,其中已婚2例有下腹部...

我院于1984～1988年收治3例先天性女性尿道下裂,报告如下。 3例年龄8～25岁。已婚2例,儿童1例。症状:3例中2例尿失禁,生后分次排尿后阴道滴尿,活动及婚后加重,并逐年进展。另1例分次排尿。3例均由阴道口排尿及溢尿,其中已婚2例有下腹部持续性疼痛,逐日加重,婚后腹痛剧烈伴发烧,性交剧痛伴有尿液外流;1例儿童自觉排尿困难,排尿时阴道前壁膨出一囊性肿物。体征:均女性体态,膀胀区饱满,阴蒂正常;外阴均发育不良,前庭无尿道外口,尿道外口位于阴道前壁;3例均阴道狭小,内有少量尿液;2

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细菌内毒素检测方法的研究进展

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医学综述 2000年第5期6卷 222-224页

作者：胡金川解放军第281医院北戴河066105

19世纪,Pfeiffer首先提出“内毒素”一词,是指革兰阴性细菌培养滤液中具有生物活性的热稳定物质。后来几十年的化学研究表明,内毒素的主要成分是脂多糖(lipopolysaccharidle,LPS),多存在于革兰阴性杆菌和球菌细胞壁中,是一个复杂的大分... 详细信息

19世纪,Pfeiffer首先提出“内毒素”一词,是指革兰阴性细菌培养滤液中具有生物活性的热稳定物质。后来几十年的化学研究表明,内毒素的主要成分是脂多糖(lipopolysaccharidle,LPS),多存在于革兰阴性杆菌和球菌细胞壁中,是一个复杂的大分子,含有与多糖共价结合的脂类,即类脂A。类脂A是LPS的“毒力中心”,在生物活性中起关键作用。内毒素是许多疾病的病因,其中败血性休克最为常见。由于侵袭性医疗程序和免疫抑制剂应用的增多。

关键词：细菌内毒素检测化学结构

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血清胱蛋白酶抑制剂C评价狼疮性肾炎患者肾小球病理损害程度的价值

血清胱蛋白酶抑制剂C评价狼疮性肾炎患者肾小球病理损害程度的价值

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：胡金川解放军总医院生化科

目的探讨狼疮性肾炎患者血清胱蛋白酶抑制剂C(cystatin C)在评价肾小球病理损害程度中的价值。方法选择狼疮性肾炎患者93例,男16例,女77例,年龄(30.80±12.48)岁。入院后测定血清cystatin C,并行肾穿刺活检,对肾小球病理进行评分。肾小球

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“集中与分散结合”银企对账模式问题初探

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中国农村金融 2014年第4期 57-59页

作者：胡金川浙江宁波市区联社内审管理部

近年来,随着金融业务外包范围的逐步扩大以及银企对账管理方式的不断探索,不少农村合作金融机构逐步形成了以邮政对账、自行对账共同组合的"集中与分散结合"的银企对账模式.

关键词：银企对账对账单退信农村合作金融机构集中与分散

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人肽抗生素hPABβ重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

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解放军医学杂志 2004年第2期29卷 113-115页

作者：胡金川饶贤才黎庶金晓琳汪正清胡福泉第三军医大学微生物学教研室重庆400038

目的　构建人肽抗生素hPAB β重组质粒 ,并在大肠杆菌中进行表达 ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法　通过PCR将hPAB β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解 ,将修改的目标片段克隆到pFAST HTa质粒中 ,挑取阳性重组子 ,酶切出目标片段... 详细信息

目的　构建人肽抗生素hPAB β重组质粒 ,并在大肠杆菌中进行表达 ,为大量制备hPAB β奠定基础。方法　通过PCR将hPAB β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解 ,将修改的目标片段克隆到pFAST HTa质粒中 ,挑取阳性重组子 ,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32 CP中 ,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳分析 ,进一步以亲和层析纯化融合蛋白 ,用羟胺裂解分析。结果　构建的pFAST hPAB β重组质粒经酶切可得到约 2 30bp的片段 ,与预期大小相符 ,测序结果表明其序列正确 ;构建的pQE32 CP hPAB β重组表达质粒酶切亦可切出 2 30bp的片段 ,测序结果表明序列和阅读框均正确 ;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约2 7× 10 3 大小的蛋白 ,表达量约占细菌总蛋白的 4 3% ,该融合蛋白以包涵体形式存在 ,通过亲和层析可获得该蛋白 ,纯度为 80 4 % ,该融合蛋白经羟胺裂解 1h即可得到与合成肽大小相符的小肽。结论　本研究成功构建了含hPAB β重组质粒的工程菌 ,为进一步研究和大量制备hPAB β创造了前提。

关键词：抗生素类肽 HPAB-β 融合表达大肠杆菌质粒裂解位点

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T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值及CD4、CD8编码基因单核苷酸多态性与系统性红斑狼疮的关联研究

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标记免疫分析与临床 2022年第7期29卷 1135-1141页

作者：胡金川陈松楠张立敏郭广宏李岩田亚平中国人民解放军联勤保障部队北戴河康复疗养中心河北秦皇岛066100 中国人民解放军总医院第一医学中心北京100853

目的分析T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值及CD4、CD8编码基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的关联。方法检测119例SLE患者及117例健康人T细胞亚群水平及CD4、CD8A、CD8B基因14个标签SNP位点基因型,比较组间T细胞亚群及各基因型、等位基因的分布差异,计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI)。结果SLE组CD4^(+)T细胞低于对照组(P>0.05),CD8^(+)T细胞高于对照组(PT/CT基因型(OR:2.280,95%CI:1.261~4.123,PT/TT基因型(OR:8.661,95%CI:1.066~70.378,PG/AG基因型(OR:2.046,95%CI:1.055~3.967,PT、CD8B rs13400210C>T和CD8B rs4832054A>G与SLE发病有关联,rs1055141 CT、rs13400210 TT、rs4832054 AG基因型和rs1055141、rs13400210 T等位基因是SLE发病的危险因子。

关键词：系统性红斑狼疮 T细胞CD4^(+)/CD8^(+)比值 CD4基因 CD8A基因 CD8B基因单核苷酸多态性

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