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γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响

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中华实验外科杂志 2006年第9期23卷 1047-1049,i0001页

作者：胡野荣吴忠仕张明吕卫东李伟刘哲亮胡维新中南大学湘雅第二医院胸心外科长沙410011 中南大学生物科学与技术学院分子生物学研究中心

目的探讨γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响,寻求牛颈静脉管道合适的灭菌和保存方法。方法：将采集、制作好的牛颈静脉拉力条按不同保存方法分为6组：新鲜对照组(A组),冷冻干燥组(B组),溶剂干燥组(C组),深冻组(D组),... 详细信息

目的探讨γ射线消毒对不同保存方法牛颈静脉管道机械性能的影响,寻求牛颈静脉管道合适的灭菌和保存方法。方法：将采集、制作好的牛颈静脉拉力条按不同保存方法分为6组：新鲜对照组(A组),冷冻干燥组(B组),溶剂干燥组(C组),深冻组(D组),PBS缓冲液保存组(E组),60％乙醇保存组(F组)。各组经25 kGyγ射线消毒(A组不进行γ射线消毒)后分别行单轴拉伸试验、细菌培养及组织形态学观察。结果上述5种方法保存的牛颈静脉管道经γ射线消毒后,其最大负荷与极限抗张强度分别为(25．23±15．95)N、(4．6±2．53)Mpa(B组),(35．28±14．66) N、(7．10±2．08)Mpa(C组),(25．44±7．97)N、(5．20±1．43)Mpa(D组),(31．55±12．32)N、(6．20±2．72)Mpa(E组),(32．02±18．44)N、(6．80±2．03)Mpa(F组)。与对照组[(23．43±11．21)N、(5．12±3．06)Mpa]相比,P＞0．05。断裂延伸率分别为(86．08±31．21)％(B组)、(137．99±38-80)％(C组)、(133．39±42．19)％(D组)、(153．23±55．00)％(E组)和(142．09±54．03)％(F组),与对照组(193.80±37．53)％相比,P＜0．05。细菌培养结果全部为阴性。组织切片显示B组和D组组织呈空腔空泡状改变。结论经25 kGyγ射线消毒后,上述五种保存方法处理牛颈静脉管道其最大负荷与极限抗张强度变化不明显,但其断裂延伸率均下降,尤以冷冻干燥保存组为甚。

关键词：颈静脉 γ射线灭菌机械性能保存

紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量及功能变化

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中华胸心血管外科杂志 2008年第1期24卷 21-25页

作者：刘哲亮吴忠仕胡建国陈勇胡野荣李伟中南大学湘雅二医院胸心外科长沙410011 湖南省现代优生技术重点实验室

目的探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）的数量及功能特点。方法选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例，采用Fieoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞，用添加牛脑垂体提取物... 详细信息

目的探讨紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cell，EPC）的数量及功能特点。方法选取法洛四联症及单纯室间隔缺损病人各10例，采用Fieoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞，用添加牛脑垂体提取物和胎牛血清的M199培基进行体外诱导分化培养。用免疫组化和透射电镜行EPC表型鉴定；采用流式细胞仪计数CD133^＋／KDR^＋细胞；采用改良的Boyden小室，黏附能力测定实验和MTT比色法，观察EPC的迁移、黏附及增殖能力。结果紫绀型先天性心脏病病人外周血内皮祖细胞的数量增多[集落记数（14．7±3．1）／100倍视野对（8．2±1．3）／100倍视野；DiI-Acldl^＋／UEA-I^＋细胞数（72．2±9．73），200倍视野对（51．2±3．83）／200倍视野；CD133^＋／KDR^＋细胞百分比（0．66±0．20）％对（0．18±0．08）％，P〈0．01]，其迁移能力[（140．6±9．24）／200倍视野对（91．84±8．58）／200倍视野]、黏附能力[（149．00±11．58）／200倍视野对（112．6±7．02）／200倍视野]及增殖能力（0D值0．34±0．02对0．27±0．01）增强（P〈0．01）。结论紫绀型先天性心脏病病人循环内皮祖细胞的数量增多，其迁移、黏附及增殖能力增强。

关键词：心脏缺损先天性发绀内皮细胞细胞增殖细胞黏附细胞运动

去细胞光氧化牛颈静脉血管片内膜光化学接枝CD34抗体的制备及初步评价

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第2期12卷 319-322页

作者：赵向东吴忠仕胡铁辉胡野荣乔刚中南大学湘雅二医院胸心外科湖南省长沙市410011

目的:用光交联剂SANPAH将不同浓度鼠抗人CD34抗体接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉表面,明确接枝鼠抗人CD34抗体的最佳反应摩尔比和最佳浓度。方法:实验于2006-06/08在中南大学湘雅二医院生物材料实验室完成。按4个不同摩尔比(1∶... 详细信息

目的:用光交联剂SANPAH将不同浓度鼠抗人CD34抗体接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉表面,明确接枝鼠抗人CD34抗体的最佳反应摩尔比和最佳浓度。方法:实验于2006-06/08在中南大学湘雅二医院生物材料实验室完成。按4个不同摩尔比(1∶0,1∶10,1∶20,1∶50),SANPAH和4个不同浓度[0.665μmol/L(100mg/L),1.33μmol/L(200mg/L),6.65μmol/L(1g/L),13.3μmol/L(2g/L)]鼠抗人CD34抗体进行反应后,经紫外线照射光化学接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉上,各组进行快速冰冻切片,滴加FITC标记的羊抗鼠IgG,然后在荧光显微镜下观察不同摩尔比和浓度反应结合的荧光效果,从而初步推断出最佳的反应和结合的摩尔比和浓度。结果:随着鼠抗人CD34抗体的浓度的升高,荧光整体上是越来越强,但是当浓度高于6.65μmol/L时,荧光差别不是很明显;当二者的反应摩尔比为1∶20时,荧光最强。结论:最佳的鼠抗人CD34抗体和SANPAH反映接枝的浓度是6.65μmol/L,最佳的摩尔比是1∶20。

关键词：去细胞光氧化颈静脉管道抗人CD34抗体羊抗鼠IgG SANPAH

带瓣牛颈静脉在治疗复杂先天性心脏病中的应用

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中南大学学报（医学版） 2005年第4期30卷 471-473页

作者：吴忠仕胡建国杨一峰王晖邓又华刘文亮胡野荣杨晓涵中南大学湘雅二医院胸心外科长沙410011

不少复杂先天性心脏病需要应用带瓣管道或带瓣血管片重建右心室流出道方能获得良好根治.同种带瓣管道的临床应用已取得了良好效果.但同种带瓣管道取材困难,尤其适用于小儿的同种带瓣管道更少,根本无法满足临床需要.猪主动脉或肺动脉管... 详细信息

不少复杂先天性心脏病需要应用带瓣管道或带瓣血管片重建右心室流出道方能获得良好根治.同种带瓣管道的临床应用已取得了良好效果.但同种带瓣管道取材困难,尤其适用于小儿的同种带瓣管道更少,根本无法满足临床需要.猪主动脉或肺动脉管道因其易钙化、耐久性差等原因也并非理想材料.最近国外采用经戊二醛(glutaraldehyde,GA)处理的带瓣牛颈静脉(valved bovine jugular vein,VBJV)重建右室流出道取得良好临床效果[1,2].自2003年10月始笔者采用GA固定辛醇改性处理VBJV重建复杂先天性心脏病右室流出道共18例,获良好的早期效果,现报告如下.

关键词：牛颈静脉先天性心脏病右室流出道重建

钠氢交换抑制剂与含钾通道开放剂的超极化停搏保存液合用对移植供心的保护作用

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第二军医大学学报 2009年第6期30卷 663-667页

作者：彭昊李津胡英斌唐浩胡野荣周新民第二军医大学长征医院胸心外科上海200003 中南大学湘雅二医院心胸外科长沙410011

目的:探讨钠氢交换抑制剂(sodium-hydrogen exchange inhibitor,NHEI)能否加强含钾通道开放剂(potassium chan-nel opener,PCO)的超极化停搏保存液对移植供体心脏的保护作用,明确该组合对移植供心的保护程度。方法:在晶体液灌注的Langen... 详细信息

目的:探讨钠氢交换抑制剂(sodium-hydrogen exchange inhibitor,NHEI)能否加强含钾通道开放剂(potassium chan-nel opener,PCO)的超极化停搏保存液对移植供体心脏的保护作用,明确该组合对移植供心的保护程度。方法:在晶体液灌注的Langendorff模型上平衡30min后,兔心被分为4组:(1)Cel组:继续接受另一个30min的平衡灌注,用Celsior液停搏并保存8h然后再灌注1h;(2)Pin组:心脏用pinacidil(一种PCO)超极化液停搏并保存,余同Cel组;(3)Cel+Car组:第二个30min平衡期和再灌注时对心脏使用10μmol/L的cariporide(一种NHEI),余与Cel组相同;(4)Pin+Car组:心脏接受cariporide的处理和PCO超极化停搏并保存,余同Cel组。结果:Pin+Car组供心收缩功能恢复值显著高于Pin组[(87.4±11.9)%vs(69.0±7.2)%,P0.05]。Cel组与Cel+Car组间各项指标均没有显著差异。各组间冠脉流量无显著差别。结论:NHEI能显著提高PCO超极化停搏液对移植供心的保护效果,二者联合使用的保护效果与Celsior液相当。

关键词：钠氢交换抑制剂钾通道开放剂心脏移植心肌保存

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不同处理方法的牛心包生物力学特性测试分析

医用生物力学 2002年第4期17卷 225-230页

作者：王坚刚蒯行成胡野荣任毕乔龚光甫首都医科大学附属安贞医院心外科北京100029 湖南大学工程力学系长沙410012 中南大学湘雅二院心胸外科长沙410011

目的　探索一种理想的牛心包处理方法。方法　观察戊二醛及 2 ,3 -丁二醇改性戊二醛处理后的牛心包热挛缩温度、生物力学特性及超微结构变化。结果　鞣制后心包厚度和僵硬度增加 ,柔韧性降低。丁二醇组的弹性模量 (8.75± 1 .71 )较戊... 详细信息

目的　探索一种理想的牛心包处理方法。方法　观察戊二醛及 2 ,3 -丁二醇改性戊二醛处理后的牛心包热挛缩温度、生物力学特性及超微结构变化。结果　鞣制后心包厚度和僵硬度增加 ,柔韧性降低。丁二醇组的弹性模量 (8.75± 1 .71 )较戊二醛组 (6.5 9± 1 .3 7) (P <0 .0 5 )更近似于正常瓣膜组织 ;且其极限拉伸强度优于戊二醛组。超微结构显示丁二醇组胶原纤维与弹性纤维结构完整 ;戊二醛组胶原纤维和弹性纤维均明显变性 ,结构模糊。结论　 2 ,3 -丁二醇改性处理后的牛心包具有更好的生物力学特性。

关键词：牛心包戊二醛 2,3-丁二醇生物力学特性

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人肺癌组织免疫缺陷鼠移植瘤模型的建立

癌症 2009年第8期28卷 890-893页

作者：胡野荣任泓刘哲亮喻风雷刘文亮周新民中南大学湘雅二医院胸心外科湖南长沙410011 美国Cell Signaling Technology公司马萨诸塞州波士顿01923

背景与目的:目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法:选取BALB/c裸小鼠、SCID小鼠及NOD/scid... 详细信息

背景与目的:目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法:选取BALB/c裸小鼠、SCID小鼠及NOD/scid小鼠各16只,采用套管针四点左边两块、右边一块式接种法,16例患者中每例患者的肿瘤组织标本分别接种于每个鼠种的一只。观察不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间、肿瘤体积倍增时间、自然病亡率及左右两边接种点的成瘤率和头尾部成瘤点处死时大于1cm的比率,并鉴别移植瘤形态结构与来源组织的一致性及鉴定移植瘤是否为上皮来源。结果:总成瘤率为75%,其中4个病例只有SCID小鼠成瘤,2个病例只有BALB/c裸小鼠成瘤,NOD/scid小鼠无一例单独成瘤。不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间和肿瘤体积倍增时间及左右两边接种点的成瘤率差异无统计学意义。SCID小鼠成瘤率最高,为56.25%;NOD/scid小鼠自然病亡率为25%,BALB/c裸小鼠、SCID小鼠在观察期内无一例病亡;处死时头部成瘤点大于1cm的比率(56.52%)与尾部成瘤点大于1cm的比率(25%)相比差异有统计学意义(P=0.037);所有移植瘤苏木精-伊红染色显示其形态结构均与来源组织一致,所有移植瘤角蛋白免疫组化均为阳性,显示移植瘤均为上皮来源。结论:四点两块套管针接种BALB/c裸小鼠和SCID小鼠各一只的方法能很好地建立非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型,头部移植瘤的生长速度明显快于尾部。

关键词：非小细胞肺癌移植瘤免疫缺陷小鼠套管针四点接种动物模型

CS无支架四叶心包二尖瓣设计优化与流体动力学研究

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医学临床研究 2005年第8期22卷 1034-1036,1040页

作者：刘锋龚光甫胡野荣中南大学湘雅二院胸心外科湖南长沙410011

【目的】优化设计CS无支架四叶心包二尖瓣,评价新型瓣膜流体动力学性能。【方法】按照仿生原则,采用牛心包缝制27号CS无支架四叶原型二尖瓣和新型瓣各6枚,分别固定于测试用特制刚性瓣架上,体外测试瓣膜平均跨瓣压差、有效瓣口面积、返... 详细信息

【目的】优化设计CS无支架四叶心包二尖瓣,评价新型瓣膜流体动力学性能。【方法】按照仿生原则,采用牛心包缝制27号CS无支架四叶原型二尖瓣和新型瓣各6枚,分别固定于测试用特制刚性瓣架上,体外测试瓣膜平均跨瓣压差、有效瓣口面积、返流量、回流百分比及流量系数,同时观察和拍摄瓣膜的运动图像。【结果】在模拟心输出量5 L/min时,新型瓣其平均跨瓣压差较原型瓣减少(P<0.05),而流量系数较原型瓣明显增加(P<0.05)。在模拟心输出量为3 L/min和4 L/min时,新型瓣回流百分比较原型瓣显著减少(P<0.005)。在模拟心输出量为3 L/min4、L/min和5 L/min时,新型瓣有效开口面积均较原型瓣膜显著增加(P<0.005),而平均返流量较原型瓣明显减少(P<0.05)。新型瓣后、侧瓣叶开放幅度增大,关闭时各瓣叶对合紧密。【结论】①新型瓣环近似圆形设计,增大了有效瓣口面积,降低跨瓣压差。②新型瓣瓣叶对称性设计,增加瓣膜关闭时瓣缘接触面积和均匀紧密度,减少了瓣膜返流量和回流百分比。③新型瓣血流动力学性能优于原型瓣。

关键词：二尖瓣动力学心脏瓣膜人工

紫绀型先天性心脏病患儿外周血内皮祖细胞的体外分离培养和鉴定

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第47期12卷 9314-9318页

作者：刘哲亮吴忠仕胡建国陈勇胡野荣李伟吴坤中南大学湘雅二医院胸心外科湖南省长沙市410011 湖南省现代优生技术重点实验室湖南省长沙市410008

背景:一些基础研究成果对于新生血管形成和内皮祖细胞的自动募集机制已做出了合理的解释,体外培养的内皮祖细胞可分化为成熟的内皮细胞,有助于血管内皮修复。目的:拟建立从紫绀型先天性心脏病患儿外周血获取内皮祖细胞的方法。设计、时... 详细信息

背景:一些基础研究成果对于新生血管形成和内皮祖细胞的自动募集机制已做出了合理的解释,体外培养的内皮祖细胞可分化为成熟的内皮细胞,有助于血管内皮修复。目的:拟建立从紫绀型先天性心脏病患儿外周血获取内皮祖细胞的方法。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-08/2008-04在中南大学湘雅二医院完成。材料:外周血来源于2007-10/12中南大学湘雅二医院胸外科收治的15例法洛四联症患儿,安静状态下末梢氧饱和度为(78.0±5.0)%。方法:采用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离单个核细胞,以含体积分数为0.2的胎牛血清、4mg/L牛脑垂体提取物、2mmol/L谷氨酰胺、100U/mL氨苄青霉素、100g/L硫酸链霉素的M199培养基进行体外诱导分化,调整细胞密度为2×109L-1,接种至预铺人纤维连接蛋白的6孔培养板,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下,贴壁法纯化培养10d。主要观察指标:细胞形态和生长情况,Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白/FITC标记的荆豆凝集素双荧光染色鉴定结果,vWF、CD34及CD31免疫组化鉴定结果,PE标记CD133抗体与藻蓝蛋白标记KDR抗体免疫荧光鉴定结果,透射电镜观察内皮祖细胞特征细胞器。结果:接种后0.5h细胞贴壁生长,培养第7天形成典型的细胞集落,第14天呈铺路石样外观,细胞数量级可达108。培养第10天,贴壁细胞中70%呈Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白/FITC-UEA-Ⅰ双阳性,为正在分化的内皮祖细胞;vWF、CD34及CD31免疫组化染色均呈阳性表达;PE标记CD133抗体呈红色荧光,藻蓝蛋白标记KDR抗体呈蓝色荧光。透射电镜可见内皮祖细胞特征性幼稚线粒体及Weibel-Palade小体。结论:实验成功从紫绀型先天性心脏病患儿外周血中分离培养并获取高纯度的内皮祖细胞,且在体外稳定快速扩增。

关键词：内皮祖细胞外周血分离培养紫绀先天性心脏病