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C1GALT1基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌BGC-823细胞生物学行为的影响

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临床与实验病理学杂志 2024年第6期40卷 603-608页

作者：乔沐川李俊儒罗玲夏童陈艳华胡梦龙谢海龙南华大学衡阳医学院肿瘤研究所/湖南省肿瘤细胞分子病理学重点实验室衡阳421009 南华大学附属第二医院肿瘤内科衡阳421009

目的探讨C1GALT1在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞BGC-823生物学行为的影响。方法采用生物信息学、qRT-PCR和Western blot法分析C1GALT1 mRNA和蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织、胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达,以C1GALT1 cDNA序列... 详细信息

目的探讨C1GALT1在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞BGC-823生物学行为的影响。方法采用生物信息学、qRT-PCR和Western blot法分析C1GALT1 mRNA和蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织、胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的表达,以C1GALT1 cDNA序列为靶点设计siRNA瞬时转染BGC-823细胞,采用Transwell实验检测C1GALT1-siRNA对胃癌BGC-823细胞迁移和侵袭能力的影响。运用Western blot法检测BGC-823细胞在转染C1GALT1-siRNA后上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达。结果C1GALT1在胃癌组织和细胞(BGC-823、SGC-7901、MGC-803)中呈高表达(P<0.05);干扰BGC-823细胞中C1GALT1表达后,BGC-823细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.05),上皮细胞标志物E-cadherin和Claudin-1蛋白表达水平均升高,间充质细胞标志物vimentin和Slug蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论C1GALT1在胃癌组织和细胞中高表达,C1GALT1基因沉默后能抑制胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,其机制可能与EMT相关。

关键词：胃肿瘤 C1GALT1 侵袭迁移上皮-间充质转化

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连字句中“连”后成分习得研究

连字句中“连”后成分习得研究

作者：胡梦龙黑龙江大学

学位级别：硕士

连字句是现代汉语中一个常用的特殊句式,也是对外汉语教学中的一个重点内容。由于连字句的语法意义、句法结构多样,对留学生而言学习难度较大,本文选择从“连”后成分入手,分析汉语母语使用者以及汉语二语学习者“连”后成分的使用情况... 详细信息

连字句是现代汉语中一个常用的特殊句式,也是对外汉语教学中的一个重点内容。由于连字句的语法意义、句法结构多样,对留学生而言学习难度较大,本文选择从“连”后成分入手,分析汉语母语使用者以及汉语二语学习者“连”后成分的使用情况,对比两者差异,分析两者差异原因。并对汉语二语学习者的使用偏误进行分析。通过对汉语二语学习者的使用情况以及偏误情况进行分析整理,通过相对使用频率以及相对正确使用频率,构拟出汉语二语学习者可能的习得顺序。最后,综合以上分析结果,尝试构拟出连字句的教学顺序,按照施事句、受事句——动词句——修饰句——补充说明句的顺序进行分层次的教学。施事句、受事句主要结合定中短语类、名词类以及“一+量+名”类’“连”后成分进行教学;动词句主要结合动词类、动宾短语类“连”后成分进行教学;修饰句主要结合句子结构类、介词短语类“连”后成分进行教学;补充说明句则结合量词短语类“连”后成分进行教学,在讲解过程中使用语言对比,减少可能产生的语迹间负迁移。

关键词：连字句 “连”后成分教学顺序

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微通道平板回路热管可视化及热传输性能研究

微通道平板回路热管可视化及热传输性能研究

作者：胡梦龙广东工业大学

学位级别：硕士

科技发展日新月异,电子元器件的微型化和集成化程度越来越高,导致电子元器件在狭小空间内的产热量巨大,严重影响电子元器件的工作效率、运行稳定性。微通道平板回路热管作为一种高效的被动式传热装置,被广泛用于电子设备的冷却。为了提... 详细信息

科技发展日新月异,电子元器件的微型化和集成化程度越来越高,导致电子元器件在狭小空间内的产热量巨大,严重影响电子元器件的工作效率、运行稳定性。微通道平板回路热管作为一种高效的被动式传热装置,被广泛用于电子设备的冷却。为了提高微通道平板回路热管的传热性能,必须要从微通道平板回路热管的传热机理出发,重点研究微通道平板回路热管内部工作流体的流动沸腾特征、气泡生长、变化行为以及热传输性能。本文设计并搭建具有可视化功能的微通道平板回路热管系统,该实验系统打破了传统热管的材料限制,使用高透光率的石英玻璃作为蒸发端的上表面,加工有微槽道的铜板作为蒸发端的底部,既实现了可视化的目的,又保留了蒸发端本身金属材质所特有的性质。在实验研究过程中,通过改变工作流体的质量流率、输入的热流密度以及微通道平板回路热管的蒸发端倾斜角度,借助高速摄像机,捕捉到了工作流体在蒸发端内流动沸腾进程中的气泡的生长变化、发展行为以及流型变化的典型图像;并将气泡生长变化行为与热管的热传输性能、临界传热特性结合起来,分析了微通道平板回路热管的热传输性能和临界传热特性,为探究微通道平板回路热管蒸发端内的气泡生长变化及相态变化、热传输性能和临界传热特征提供了实验以及理论依据支持。研究结果显示:微通道平板回路热管蒸发端内气泡的生长变化过程可以分为6个阶段:单相流阶段、气泡孤立生长阶段、气泡合并阶段、拉长气泡阶段、环状流阶段、干涸流阶段。工作流体质量流率过大或者过小都不利于气泡的生长变化,热流密度越大,对气泡的生长越有利,倾斜角度不是气泡生长变化的直接影响因素。在单相流和两相流两种状态下,工作流体的质量流率和热流密度越大,蒸发端内的表面传热系数h越大,倾斜角度不是影响蒸发端内传热系数变化快慢的直接因素。本实验中,微通道平板回路热管蒸发端内水的沸腾特性曲线与大空间内水的沸腾特性曲线不同,本实验中蒸发端内工作流体到达局部干涸状态后,不会立刻到达临界热流密度,依旧可以承受更大一些的热流密度。当质量流率相对较小,在70-161.7kg/m2 s范围内,临界热流密度q临随着质量流率呈指数速度增长,当质量流率相对较大,在161.7-345.8kg/m2 s范围内,临界热流密度q 临随着质量流率呈线性增长。

关键词：微通道平板回路热管可视化热传输性能临界传热

不同剪切场下无规共聚聚丙烯/聚苯乙烯共混物体系的结构调控与性能研究

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不同剪切场下无规共聚聚丙烯/聚苯乙烯共混物体系的结构调控与性...

作者：胡梦龙四川大学

学位级别：硕士

共混改性是一种常用于聚合物的简单高效的改性方式。为了改善无规共聚聚丙烯(PPR)的结晶行为和拉伸性能,有许多的研究通过向PPR中添加刚性填料,增加异相成核位点,使PPR结晶能力与拉伸性能得到提升,但PPR原有的良好冲击韧性通常无法保留... 详细信息

共混改性是一种常用于聚合物的简单高效的改性方式。为了改善无规共聚聚丙烯(PPR)的结晶行为和拉伸性能,有许多的研究通过向PPR中添加刚性填料,增加异相成核位点,使PPR结晶能力与拉伸性能得到提升,但PPR原有的良好冲击韧性通常无法保留。所以,在增加PPR拉伸强度的同时,又不过分牺牲掉其原有的良好冲击韧性,一直以来都是一个非常值得探究的问题。我们知道,聚合物在剪切场作用下形成的高度取向结构(如shish-kebab,柱晶等)可以起到自增强效果,能有效避免刚性填料加入带来的冲击韧性降低,这为增强PPR的同时尽量保持其较好的冲击韧性提供思路。此外,粘度比满足一定条件的不相容两相共混体系在剪切场作用下,分散相可以实现原位成纤增强作用,从而使共混体系的强度与模量得到显著提高,同时也能保留一部分基体材料的抗冲击性能。综上,在PPR基体中通过熔融共混的方法添加了一定量聚苯乙烯(PS)以增加材料的强度与模量。随后,利用本课题组研发的多次熔体流动振动注塑成型(MFVIM)技术与三层复合旋转共挤技术所施加的不同剪切场,成功制备了含有丰富取向结构的试样。同时利用模拟分析软件对试样在加工过程中经历的复杂剪切场进行分析,为试样结构与形貌的调控提供了依据。最终,本研究通过调控PPR/PS的结构,改善了材料的拉伸强度与模量,并保留了基体材料PPR的一部分抗冲击性能,为拓宽PPR在工业和日常生活中的应用提供了新的思路。本课题主要研究结果如下:(1)使用模拟分析软件Moldflow,成功地模拟了具有不同熔体流动次数的MFVIM过程。模拟结果能够将不同熔体流动次数下型腔内的剪切场变化规律进行数值化表示。分析结果表明,靠近模具壁附近的熔体迅速冷却固化,以至于随后的几次熔体流动对该位置的材料不再发生剪切作用;而其余部分的熔体则能够保持较高温度,能够在振动压力下实现多次流动。随着熔体流动次数的增加,试样受剪切作用的时间增加,剪切作用的强度也有所增加。(2)通过向PPR基体中添加一定量的PS,使PPR的结晶速率有所提高,且有部分PPR的熔点T向高温偏移。在添加PS的基础上,引入强烈的剪切作用能够促进PPR形成更多的取向结构,熔融峰高温区肩峰现象更为明显。由于PPR与PS两相不相容,随着PS含量的提高,普通注塑(CIM)试样的拉伸强度逐渐降低,模量有所提高但幅度有限,并且试样的冲击强度下降明显。采用多次熔体流动振动注塑(MFVIM)成型技术,此过程引入了强烈的剪切作用。从SAXS、SEM以及偏振红外光谱的结果中可以看到,剪切流动促使基体PPR分子链伸直排列,从而形成了高度取向的shish-kebabs结构,同时分散相PS形成原位微纤维并吸附周围PPR分子链形成杂化串晶。力学性能测试结果表明,当PS含量低于20%时,PPR的shish-kebabs结构与PS的微纤维结构有利于拉伸性能的提高。但PS含量达到一定值时,材料性能不再提高,甚至出现劣化。(3)对于80PPR/20PS试样,通过调节多次熔体流动振动注塑(MFVIM)成型参数,成功制备了具有不同剪切层厚度的样品。从SAXS、SEM以及偏振红外光谱的结果可以发现,试样在受强烈剪切作用的位置有高度取向的串晶和杂化串晶结构形成。最终试样的拉伸强度、模量和冲击强度随着剪切层厚度的增加而提高。(4)POLYFLOW模拟分析了三层复合旋转共挤过程,结果表明,施加周向剪切场能降低了挤出压力,有利于管材的挤出。同时,随着转速的提高,旋转区域熔体的环向速度分量提高,沿环向旋转路径和圈数增加。环向-径向截面上的剪切速率分析结果表明,径向上各处的剪切速率均会随转速的增加而增大。(5)采用三层复合旋转共挤技术,施加不同的旋转速度,管材中间层的分子链沿旋转施加未出现明显的取向。这是由于挤出的过程中处在高温加工的时间较长且因管壁较厚而使冷却速度较慢,使分子链的取向未能及时定构而松弛,因此分子链的取向对力学性能的影响较小。对中间层为80PPR/20PS的管材而言,在周向剪切作用下PS相被拉伸变形并偏离轴向,PS相的偏离角与旋转速度有关,当旋转速度从0 rpm增加到20 rpm时,轴向偏离角发生明显的增加,管材的环向拉伸强度有所提高,而随后偏离角随旋转速度的增加变化不明显,环向拉伸强度也不再增加。

关键词：无规共聚聚丙烯聚苯乙烯振动注塑三层复合旋转共挤串晶原位成纤力学性能

C1GALT1在胃癌发生发展中作用及分子机制初步研究

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C1GALT1在胃癌发生发展中作用及分子机制初步研究

作者：胡梦龙南华大学

学位级别：硕士

目的:检测核心1β1,3-半乳糖基转移酶(Core 1β1,3-Galactosyltransferase,C1GALT1)在胃癌组织中的表达水平,通过沉默MGC-803胃癌细胞的C1GALT1,观察对其恶性生物学功能的影响。本研究旨在确定C1GALT1表达在胃癌演进过程中的作用。方法... 详细信息

目的:检测核心1β1,3-半乳糖基转移酶(Core 1β1,3-Galactosyltransferase,C1GALT1)在胃癌组织中的表达水平,通过沉默MGC-803胃癌细胞的C1GALT1,观察对其恶性生物学功能的影响。本研究旨在确定C1GALT1表达在胃癌演进过程中的作用。方法:1.通过荧光定量PCR反应验证了C1GALT1反应特异性。2.运用RT-PCR和Western blot检测方法,分别检测46例胃癌组织及其对应的癌旁组织中C1GALT1 mRNA和C1GALT1蛋白的表达状况。3.运用RT-PCR和Western blot分别检测胃癌细胞系SGC-7901,MGC-803,BGC-823及正常胃黏膜细胞系GES-1中C1GALT1 mRNA和C1GALT1蛋白的表达状况。4.利用C1GALT1-siRNA序列转MGC-803细胞,设置C1GALT1-siRNA转染组、质粒空载体组及空白对照组,用Western blot检测各组C1GALT1蛋白的表达状况,并运用MTT实验、体外细胞迁移实验、体外细胞侵袭实验明确各组MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果:1.荧光定量PCR反应后制作的C1GALT1溶解曲线图显示在90度附近有一单一峰,这表明PCR反应特异性高,产物单一,无引物二聚体等杂质生成。***-PCR结果显示:(1)36例C1GALT1mRNA在胃癌组织中表达较配对癌旁组织增高(foldchange=3.91±3.61),10例无差异(foldchange=0.95±0.34)。(2)利用卡方分析结果显示χ2=2.504,P=0.114,结果表明C1GALT1 mRNA在淋巴结转移及未转移胃癌组织中的表达无明显差异。(3)使用spearman双变量相关性分析C1GALT1mRNA表达与胃癌临床分期的关系,结果显示,r=0.761,P3.2,P1.73,P<0.05)。4.利用特异性C1GALT1-siRNA序列转染MGC803细胞,FAM荧光提示转染率达90%以上。5.设置C1GALT1-siRNA转染组、质粒空载体组及空白对照组,经Western blot检测转染组中C1GALT1蛋白表达显示灰度为0.432+0.0413,明显低于Ctrl-siRNA组(0.812+0.0221)与未转染组(0.853+0.0132)(P<0.05)。***、体外细胞迁移与侵袭实验:与对照组相比,MGC803细胞经C1GALT1-siRNA转染后,增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:1.胃癌组织中C1GALT1 mRNA表达明显高于对应癌旁组织,并可能与胃癌的临床分期呈正相关。2.胃癌组织中C1GALT1蛋白表达明显高于对应癌旁组织,并与胃癌的临床分期呈正相关。3.C1GALT1可能促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭等生物学行为。

关键词： C1GALT1 MGC-803胃癌细胞胃癌

基于模型认知的化学教学设计与实践研究 ——以选修三为例

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基于模型认知的化学教学设计与实践研究 ...

作者：胡梦龙广西师范大学

学位级别：硕士

当今国际社会正处于高速发展阶段,对人才的需求量日益增大。为适应社会发展需要,提升国家竞争力水平,培养全面发展的社会主义现代化人才,教育部启动了普通高中课程修订工作。2017年,教育部颁发了普通高中课程标（2017版）,要求发展学生... 详细信息

当今国际社会正处于高速发展阶段,对人才的需求量日益增大。为适应社会发展需要,提升国家竞争力水平,培养全面发展的社会主义现代化人才,教育部启动了普通高中课程修订工作。2017年,教育部颁发了普通高中课程标（2017版）,要求发展学生的核心素养,从此核心素养作为学科引领,指导着教学过程稳步进行。证据推理与模型认知是高中化学核心素养五个维度之一。模型认知作为一个组合词汇,首次在核心素养中出现,可以将其理解为对模型的认知或基于模型的认知。模型认知在化学核心素养下被划分为四个水平,由最简单的识别模型到理解和描述模型,再到评价和改进模型,再到建造模型解决问题,层层递进。模型认知的四种不同水平反映到教学过程中即表现为学生的模型认知能力,同样其也具有四种能力水平,分别为认知力,理解力,评价力和建构力。高中化学选修三的内容以微观、抽象著称,其蕴含着多种模型思维和技巧,是培养学生模型认知能力的“主阵地”。在对选修三教材进行深度研究,以及对选修三的课程目标深入解读之后,笔者围绕模型认知能力的提升对选修三的部分章节进行教学设计。该教学设计依旧是以教材内容为基础,但不同于常规教学,笔者将课堂内容中所蕴含的模型观念细化,提炼为课堂的主线索,通过引导学生认识、理解模型,以及利用笔者所设计的模型来解决实际问题,来加强课堂学习效果,同时塑造学生的模型认知能力。教学设计在部分实验班级实施前后,笔者也设计了相对应的前后测问卷及访谈题目,目的在于测量教学前后学生模型认知能力的变化情况和对目标知识的掌握情况,同时克服选修三的部分学习障碍,提高学生的模型认知能力。在教学前后,笔者以问卷和访谈等形式来测量学生的知识水平和模型认知能力维度。分析调查结果发现,基于模型认知能力设计的教学过程确实对于知识的掌握和学生模型认知能力的提升有一定的效果。在“分子的性质”教学过程中,笔者所设计的“电负性的向量模型”成功的帮助学生理解了分子的极性与化学键的极性的关联,教会了学生如何正确的判断某个分子是否具有极性;“氢键链模型”也能很好的帮助学生理解氢键的实际意义,以及它的存在对物质性质的影响机理。同时这种效果在不同水平层次的学生群体中不尽相同,基于模型认知的教学设计,在教学过程中对于基础相对较好的学生能起到锦上添花的作用,帮助其理解和解决选修三更深层次的问题;对于化学基础相对薄弱的学生,它也是一种良好的解决问题的工具,可以将选修三的复杂问题简单化,提高学生的解题效率与准群性。同时也发现,学生在选修三阶段的学习效果与学生所在的模型认知能力层次呈显著的正相关性,而且选修三阶段的学习深入过程会带动学生模型认知能力的提升,学生模型认知能力的提升也反过来促进选修三的学习效果。两者相辅相成。

关键词：核心素养模型认知化学教学教学设计物质结构与性质

电子商务背景下现行市价法在二手畅销车价值评估中的应用研究

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电子商务背景下现行市价法在二手畅销车价值评估中的应用研究

作者：胡梦龙重庆理工大学

学位级别：硕士

近年来,我国的新车市场发展脚步逐年放缓,虽然汽车保有量屡创新高,但产销量的增幅却在逐年降低。与之相对应的二手车市场则持续火爆,不仅维持着高速的发展态势,更是与电子商务模式充分结合,形成了我国二手车市场“电商化”的新趋势。但... 详细信息

近年来,我国的新车市场发展脚步逐年放缓,虽然汽车保有量屡创新高,但产销量的增幅却在逐年降低。与之相对应的二手车市场则持续火爆,不仅维持着高速的发展态势,更是与电子商务模式充分结合,形成了我国二手车市场“电商化”的新趋势。但我国二手车市场“电商化”的道路并不平坦,在搭建二手车信息平台和肃清行业乱象等方面还有诸多不足,消费者难以充分信赖二手车电商在网上发布的二手车信息,许多二手车线上估值系统的参考性也较低。基于以上背景,本文站在消费者的视角,对电子商务模式下现行市价法在二手畅销车评估模型中的应用,进行了讨论和研究。首先,本文通过文献研究法,分三个方向,研究了与电子商务模式、二手车市场和二手车评估相关的文献和网站,总结了研究现状。其次,比较了应用4种常见二手车评估方法的前提条件、适用范围、优势和缺点,分析了现行市价法在当前市场背景下的适用性。再次,利用SWOT分析模型,对当前电商模式下二手车价值评估的评估环境进行分析,得出我国二手车评估模型的改进方向应该体现在智能化、便捷性和公允性这三个方面。然后,再根据这三个改进方向,讨论了我国二手畅销车评估中存在的问题,并对其成因进行了分析。接着,基于平衡便捷性和公允性的考量,运用层次分析法,在yaahp软件的辅助下,筛选出了现行市价法应用中比较重要的几个可比因素,并根据筛选的因素,对二手车线上估值模型进行了改进,创新性地在线上估值模型中引入了技术性指标因素。最后,通过在“瓜子网”上搜集到的案例,对改进的估值模型进行验证,并与权威的二手车在线估值平台的评估值进行对比,证明了此方法具备一定的参考性。

关键词：现行市价法二手车评估层次分析法电子商务 SWOT分析模型

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构建高效利用纤维二糖酿酒酵母的研究

构建高效利用纤维二糖酿酒酵母的研究

作者：胡梦龙天津大学

学位级别：硕士

同步糖化发酵在纤维素乙醇的生产中被广泛应用，但是在同步糖化发酵的过程中存在两个瓶颈问题：酶解过程中产生的纤维二糖抑制纤维素酶的活性;酿酒酵母的最适发酵温度与纤维素酶的最适温度不匹配。在本研究中，表达纤维二糖转运蛋白（... 详细信息

同步糖化发酵在纤维素乙醇的生产中被广泛应用，但是在同步糖化发酵的过程中存在两个瓶颈问题：酶解过程中产生的纤维二糖抑制纤维素酶的活性;酿酒酵母的最适发酵温度与纤维素酶的最适温度不匹配。在本研究中，表达纤维二糖转运蛋白（CDT）和β-葡萄糖苷酶（BGL）的基因被整合到酵母质粒pRS426上，将所得质粒pRS426-cdt-1-gh1-1导入到工业酿酒酵母SyBE001601中获得菌株SyBE001602。对菌株SyBE001602进行进化工程改造后得到菌株SyBE001603。与SyBE001602相比，SyBE001603的糖耗速率提高了1.8倍，达到2.35g/L/h，乙醇产率提升了3.9倍，达到1.17g/L/h，CDT的基因表达量提升了5.74倍，BGL的基因表达量提升了0.21倍。将CDT与BGL的基因在五个实验室底盘菌株中进行过表达以研究CDT与BGL的基因表达量对菌株纤维二糖利用能力的影响，发现过表达CDT与BGL的基因都会提高菌株的纤维二糖利用能力，但是提高的程度与底盘菌株的基因背景有关。对菌株SyBE001603的发酵性能进行表征，发现菌株在38°C条件下纤维二糖利用速率与30°C条件下利用速率基本一致，在34°C条件下菌株具有最高的发酵速率，在42°C条件下依然可以在30小时内将糖耗完。当纤维二糖浓度为80g/L时，在34°C条件菌株的纤维二糖消耗速率可以达到3.67g/L/h，在38°C条件仍可达到3.04g/L/h。在pH为4.5的环境中菌株仍然可以正常生长，当pH大于5时菌株具有较快的生长速率。将菌株SyBE001603应用于同步糖化发酵中，可以发现同步糖化发酵过程中纤维二糖的积累被消除，纤维二糖对纤维素酶的抑制作用被解除，乙醇的产率显著提高，最终乙醇的得率提高了23%。菌株SyBE001603对纤维素水解液中的抑制剂也具有一定的耐受能力。在纤维二糖作为单一碳源的条件下，菌株可以分别耐受3g/L糠醛、1.5g/L苯酚、4g/L乙酸以及含有2g/L糠醛、0.8g/L苯酚、1.5g/L乙酸的复合抑制剂，有望应用于工业生产中。

关键词：纤维素乙醇纤维二糖工业菌株同步糖化发酵合成生物学

CKS2过表达与肺腺癌的进展及不良预后的相关性研究

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CKS2过表达与肺腺癌的进展及不良预后的相关性研究

作者：胡梦龙郑州大学

学位级别：硕士

肺癌是癌症患者死亡的首要原因。近年来,中国的肺癌发病率持续上升。非小细胞肺癌是肺癌中最常见的组织学亚型,其中肺腺癌是非小细胞肺癌中最常见的类型。尽管肺癌相关的诊断与治疗技术取得了很多进展,但肺癌患者的预后仍然不理想。因此... 详细信息

肺癌是癌症患者死亡的首要原因。近年来,中国的肺癌发病率持续上升。非小细胞肺癌是肺癌中最常见的组织学亚型,其中肺腺癌是非小细胞肺癌中最常见的类型。尽管肺癌相关的诊断与治疗技术取得了很多进展,但肺癌患者的预后仍然不理想。因此,寻找可靠的肺腺癌预后标志物与治疗靶点至关重要。细胞周期蛋白依赖性激酶亚基2(Cyclin-dependent kinase subunit 2,CKS2),位于染色体9q22上,与细胞周期的调控密切相关。许多研究发现,CKS2在多种恶性肿瘤中存在异常表达,并与这些恶性肿瘤的发生、进展和转移密切相关。目前CKS2在肺腺癌中的具体作用尚不明确。本研究旨在探讨CKS2在肺腺癌组织中的表达情况,并评估CKS2过表达对肺腺癌患者的预后及在肿瘤进展方面的影响。第一部分肺腺癌中CKS2的生物信息学分析目的利用公共数据库,分析CKS2在肺腺癌中的表达情况及其与肺腺癌患者预后的关系。通过富集分析及免疫浸润分析,探究CKS2在肺腺癌中涉及的生物学功能与通路。方法(1)从TCGA数据库和GEO数据库肺腺癌数据集GSE68465下载肺腺癌患者的RNA测序数据及对应的临床数据。(2)通过TIMER 2.0 网站和TCGA数据库,分析CKS2 mRNA在肺腺癌组织及癌旁组织中的表达情况。(3)采用生存分析、COX风险回归及卡方检验,分析TCGA数据库和GSE68465数据集中CKS2的表达水平与肺腺癌患者临床病理参数及预后的关系。(4)使用在线网站LinkedOmics筛选出TCGA数据库中CKS2的共表达基因,并对CKS2及其共表达基因进行GO富集分析和KEGG通路分析。(5)基于TCGA数据库,使用GSEA分析来探索CKS2在肺腺癌中涉及的生物学通路。(6)使用TIMER 2.0 网站,探究CKS2与不同类型的免疫细胞浸润水平之间的关系,并探究CKS2是否通过影响免疫细胞的浸润水平来影响肺腺癌患者的预后。结果(1)CKS2mRNA在肺腺癌组织中过表达:CKS2mRNA在肺腺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织,且随着肿瘤分期、T分期和N分期的进展而上调;(2)CKS2与肺腺癌患者的不良预后有关:生存分析显示,CKS2高表达组中肺腺癌患者的总体生存期(Overall Survival,OS)显著低于低表达组。多因素COX回归分析显示CKS2是影响肺腺癌患者OS的独立预后因子;(3)CKS2与临床病理参数的相关性:在TCGA数据库中,CKS2高表达与肺腺癌患者较晚的T分期(P<0.001)和N分期(P=0.016)有关;在GSE68465中,CKS2高表达与肺腺癌患者较晚的T分期(P<0.001)有关;(4)CKS2与细胞周期调控密切相关:GO功能富集分析、KEGG通路分析及GSEA分析显示,CKS2在肺腺癌中参与细胞周期调控相关的生物学功能与通路;(5)CKS2的表达与肺腺癌微环境中免疫细胞的浸润水平有关:CKS2的表达水平与骨髓来源的抑制性细胞(Myeloid-derived suppressor cell,MDSC)、Th1细胞和Th2细胞的浸润水平呈正相关,与自然杀伤(Natural killer,NK)细胞的浸润水平呈负相关(P<0.05)。此外,CKS2可能通过影响MDSC的浸润水平从而影响肺腺癌患者的预后。结论(1)CKS2mRNA在肺腺癌中过表达,且与肺腺癌的进展相关;(2)CKS2与肺腺癌患者的不良预后有关,可作为独立的危险因素;(3)CKS2可能通过促进细胞周期进程而在肺腺癌的发生发展过程中发挥重要作用;(4)CKS2可能通过影响肺腺癌微环境中免疫细胞的浸润水平从而促进肺腺癌的进展与转移,并影响肺腺癌患者的预后。第二部分CKS2过表达的验证及其对肺腺癌细胞生物学行为的影响目的验证CKS2在肺腺癌组织中的过表达及其对肺腺癌患者预后的影响,并探究CKS2过表达对肺腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集2013年01月至2017年12月在郑州大学第二附属医院实施手术且病理确诊为肺腺癌的90例患者的肿瘤样本及69例匹配的癌旁组织样本,完善对应的临床病理信息。采用免疫组化染色检测肺腺癌组织和癌旁组织中CKS2蛋白的表达情况。根据半定量评分标准,将免疫组化染色的结果进行评分。根据免疫组化评分结果,比较肺腺癌组织和癌旁组织中CKS2蛋白表达的差异,并探究CKS2蛋白在肺腺癌不同组织学亚型之中的表达情况。统计分析CKS2蛋白的表达水平与肺腺癌患者临床病理参数和预后的关系。随后,构建CKS2过表达质粒载体,选取肺腺癌细胞系A549,瞬时转染CKS2过表达载体。使用Western Blot验证转染细胞中CKS2蛋白的表达情况。采用CCK-8实验检测CKS2过表达对肺腺癌细胞增殖的影响,采用Transwell实验检测CKS2过表达对

关键词：肺腺癌 CKS2 侵袭迁移预后