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LncRNA PVT1对大鼠盆底韧带成纤维细胞的影响及调控机制初探

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LncRNA PVT1对大鼠盆底韧带成纤维细胞的影响及调控机制初探

作者：胡新明郑州大学

学位级别：硕士

盆腔器官脱垂(Pelvic Organ Prolapse,POP)是指由各种原因引起的盆底支撑组织薄弱,导致盆腔器官下垂移位,最终导致器官位置和功能异常的疾病。临床检查发现,在绝经妇女中该病发生率高达40%。POP可严重损害生活质量,降低劳动力生产率,增... 详细信息

盆腔器官脱垂(Pelvic Organ Prolapse,POP)是指由各种原因引起的盆底支撑组织薄弱,导致盆腔器官下垂移位,最终导致器官位置和功能异常的疾病。临床检查发现,在绝经妇女中该病发生率高达40%。POP可严重损害生活质量,降低劳动力生产率,增加受影响妇女和卫生保健系统的成本,困扰全球中老年女性身心健康。POP的发病原因是复杂的,其由环境及遗传因素共同作用,POP发生的病理生理改变则与盆底组织薄弱、盆底韧带组织的支撑能力下降有关。成纤维细胞不仅是构成盆底筋膜韧带的主要细胞,而且在盆腔器官脱垂的发生、发展和修复中也发挥着重要作用。Lnc RNA PVT1在POP中存在差异性表达,可参与POP的发病过程,本研究主要针对Lnc RNA PVT1在盆腔器官脱垂的机制作用进行研究。目的研究长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1(Lnc RNA PVT1)对大鼠盆底韧带成纤维细胞的影响,探讨其在盆腔器官脱垂疾病(POP)发病机制中的可能作用。本实验通过改变大鼠盆底韧带成纤维细胞中Lnc RNA PVT1的表达量,观察成纤维细胞的生物学活性及行为的改变情况,以及检测TGF-β1、Smad2/3、c-Myc的表达情况,研究之间的相关性。材料与方法1组织标本的收取和分离。河南省动物实验中心选择购买同一批次8周龄雌性SD大鼠,SPF级。选取其盆底韧带组织。因细胞类型不同在传代后贴壁时间存在差异的特性,分离出所需的成纤维细胞。随后进行原代培养、纯化、传代及冻存。利用免疫组化鉴定培养的成纤维细胞。2将获得的成纤维细胞随机分为5组并进行相应的转染。分别为:Lnc RNA PVT1基因过表达组、过表达阴性对照组、Lnc RNA PVT1基因敲减组、敲减阴性对照组、空白对照组。使用RT-PCR试验验证各组转染效率。3分别对以上5组进行镜检、MTT试验、细胞划痕试验、流式细胞仪检测成纤维细胞的形态、增殖、迁移和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot检测TGF-β1、Smad2/3、c-Myc的m RNA、蛋白相对表达情况。结果1显微镜观察,发现成纤维细胞呈梭形及纺锤型,细胞边界清晰,胞体大,胞浆透明,核仁大,多呈椭圆形,符合典型成纤维细胞的基本形态特征。经免疫荧光化学染色后,荧光显微镜下观察波形蛋白抗体标记的成纤维细胞中波形蛋白呈现出弥漫绿色荧光。2构建慢病毒后转染成纤维细胞,免疫荧光显微镜下观察转染的细胞组别中大部分均表达出强弱不等的绿色荧光,说明慢病毒包装转染成功。RT-PCR进行转染效率鉴定。干扰组的m RNA表达量显著小于Control组,同时三组慢病毒靶点组别对比,筛选出si-PVT1-1组的敲减效率最高,选择出该组为最有效的干扰靶点组。过表达的RT-PCR结果结果显示,PVT1组的m RNA相对表达量显著高于Control组(p<0.01),提示过表达组感染效率验证成功。3分组镜检观察各组成纤维细胞形态变化。发现Control组中成纤维细胞排列规则,细胞形态呈长梭形。相比Control组,si-PVT1组中成纤维细胞则排列较为凌乱,细胞间彼此排列疏松,成纤维细胞的数量偏少,且部分细胞发生肿胀变形。而PVT1组中成纤维细胞排列规则,呈平行排列。细胞间更为紧密,细胞数量增多。MTT试验结果显示Lnc RNA PVT1过表达时可显著促进成纤维细胞的增殖,而该基因表达受到干扰时时,细胞增殖则受到抑制。细胞划痕试验检测各组成纤维细胞的迁移情况,培养48h后将五组的迁移率进行比较,结果表明当lnc RNA PVT1在成纤维细胞中的表达受到抑制时,细胞的修复愈合能力减弱。流式细胞学检测各组成纤维细胞的凋亡比率,结果分析发现当lnc RNA PVT1低表达时,促进成纤维细胞的凋亡。当其过表达时,成纤维细胞的凋亡率将大大降低。RT-PCR检测TGF-β1、Smad2/3、c-Myc的m RNA表达情况。Lnc RNA PVT1过表达时可促进c-Myc、TGF-β1、Smad2和Smad3的m RNA相材料与方法对表达,Lnc RNA PVT1低表达时则显著抑制c-Myc和TGF-β1的m RNA表达,而对Smad2和Smad3两种基因的抑制效果不显著。Western-blot检测TGF-β1、Smad2/3、c-Myc的相对蛋白表达,结果说明Lnc RNA PVT1过表达时可促进四种因子的蛋白表达,而Lnc RNA PVT1被干扰时,以上各因子的蛋白表达量则显著下降。结论Lnc RNA PVT1高表达时,TGF-β1/Smad2/3表达增高,c-Myc的表达量增高,反之表达量下降。Lnc RNA PVT1可通过TGF-β1/Smad2/3通路来调控cMyc的表达量,进而影响大鼠盆底韧带组织中成纤维细胞的形态和生物学功能,从而可能对盆底韧带的弹力及张力造成影响,该研究或为患有盆腔器官脱垂疾病患者的诊断和治疗提供新思路。

关键词： LncRNA PVT1 盆腔器官脱垂成纤维细胞 c-Myc TGF-β1

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胡新明作品

美与时代（创意）（上） 2019年第3期 F0002-F0002页

作者：胡新明广东海洋大学

心系“国之大者”守好“湖北粮仓” 为保障国家粮食安全贡献湖北力量

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中国粮食经济 2022年第4期 24-27页

作者：胡新明湖北省粮食局

2021年,在国家粮食和物资储备局的支持指导和湖北省委、省政府的坚强领导下,湖北省粮食行业以庆祝建党100周年为契机,攻坚克难,砥砺前行,粮食安全责任进一步压实,储备体制机制进一步优化,收储供应能力进一步提升,粮食流通监管进一步加强... 详细信息

2021年,在国家粮食和物资储备局的支持指导和湖北省委、省政府的坚强领导下,湖北省粮食行业以庆祝建党100周年为契机,攻坚克难,砥砺前行,粮食安全责任进一步压实,储备体制机制进一步优化,收储供应能力进一步提升,粮食流通监管进一步加强,基础设施建设进一步提速,产业发展动能进一步转换,全面从严治党进一步深化,各项工作取得显著成绩,实现了“十四五”良好开局。

关键词：粮食行业物资储备供应能力国家粮食安全基础设施建设砥砺前行粮食安全责任流通监管

探索揭榜挂师模式强化科技人才支撑统筹推进粮食高质量发展和高水平安全

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中国粮食经济 2022年第7期 12-14页

作者：胡新明湖北省粮食局

6月28日,习近平总书记在湖北省武汉市考察时强调,科技自立自强是国家强盛之基、安全之要。近年来,湖北粮食行业完整、准确、全面贯彻新发展理念,把创新摆在突出位置,发挥粮食资源和科教大省优势,认真落实国家局“科技兴粮”“人才兴粮... 详细信息

6月28日,习近平总书记在湖北省武汉市考察时强调,科技自立自强是国家强盛之基、安全之要。近年来,湖北粮食行业完整、准确、全面贯彻新发展理念,把创新摆在突出位置,发挥粮食资源和科教大省优势,认真落实国家局“科技兴粮”“人才兴粮”重要部署,统筹推进粮食高质量发展和高水平安全。

关键词：粮食行业自立自强新发展理念统筹推进科技兴粮科技人才支撑高质量发展全面贯彻

基于迭代均值组合近似模型和序贯优化与可靠性评估法的船舶结构优化设计

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上海交通大学学报 2017年第2期51卷 150-156页

作者：胡新明王德禹上海交通大学海洋工程国家重点实验室高新船舶与深海开发装备协同创新中心上海200240

针对传统可靠性优化方法不能同时保证大型船舶结构计算效率与精度的问题,在船舶结构优化设计中考虑设计变量的不确定性,通过迭代均值组合(ER)近似模型和粒子群算法(PSO)提高序贯优化与可靠性评估(SORA)法的计算效率和精度,建立了改进的... 详细信息

针对传统可靠性优化方法不能同时保证大型船舶结构计算效率与精度的问题,在船舶结构优化设计中考虑设计变量的不确定性,通过迭代均值组合(ER)近似模型和粒子群算法(PSO)提高序贯优化与可靠性评估(SORA)法的计算效率和精度,建立了改进的可靠性优化设计流程并解决了多用途船舱段的可靠性优化问题.其中:SORA法将可靠性分析与优化过程解耦,并提高了可靠性优化效率;PSO保证了SORA法优化所获全局最优解的计算效率;ER近似模型能够以最少的采样点建立满足精度要求的近似模型,并代替最有可能的失效点(MPP)和优化过程中耗时的有限元计算.多用途船舱段的可靠性优化结果表明:可靠性优化相较于确定性优化更有实际意义;改进的可靠性优化设计流程在保证计算精度的同时能够显著降低计算成本.

关键词：船舶结构迭代均值组合近似模型序贯优化与可靠性评估粒子群算法可靠性优化

长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1参与盆腔器官脱垂的机制

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中国组织工程研究 2023年第5期27卷 669-675页

作者：胡新明乔艳华王肖帆李林玉赵冰郑州大学第三附属医院妇产科河南省郑州市450000 郑州枫杨外国语学校教务处河南省郑州市450000

背景:作者所在课题组前期通过高通量测序结果发现长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1在盆腔器官脱垂患者子宫主韧带中表达明显降低,转化生长因子β1信号通路也是相关通路之一。目的:观察长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1对盆底... 详细信息

背景:作者所在课题组前期通过高通量测序结果发现长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1在盆腔器官脱垂患者子宫主韧带中表达明显降低,转化生长因子β1信号通路也是相关通路之一。目的:观察长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1对盆底韧带成纤维细胞的影响,探讨其在盆腔器官脱垂疾病发病机制中的可能作用。方法:提取大鼠盆底韧带组织标本,分离成纤维细胞,进行原代培养。慢病毒构建长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰和过表达载体加入成纤维细胞中。通过免疫荧光、MTT、细胞划痕实验、流式细胞术来检测成纤维细胞的形态、增殖、迁移和凋亡情况;RT-PCR和Western-blot检测转化生长因子β1、smad2/3、c-Myc的mRNA及蛋白表达情况。结果与结论:①长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时可显著促进成纤维细胞的增殖,提高细胞的迁移能力,抑制成纤维细胞凋亡;长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1干扰时结果相反;②此外,长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1过表达时细胞中的c-Myc、转化生长因子β1、smad2/3的mRNA和蛋白相对表达量均明显增加,其干扰时则显著抑制c-Myc和转化生长因子β1的表达;③提示长链非编码RNA浆细胞瘤变异性易位基因1能够影响成纤维细胞的形态和生物学功能,可能与转化生长因子β1/smad2/3/c-Myc通路有关;该研究可为盆腔器官脱垂患者的临床诊断和治疗提供新思路。

关键词：长链非编码RNA 浆细胞瘤变异性易位基因1 盆腔器官脱垂成纤维细胞过表达干扰

论Wald、LR和LM检验不一致时的选择依据

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数量经济技术经济研究 2010年第5期27卷 153-160,F0003页

作者：胡新明广东商学院

Wald、LR和LM检验的结果往往会出现不一致,对此很多学者采用Wald≥LR≥LM的结论,取较小统计量作为显著性检验判断的依据。但事实上,上述不等式的成立是有前提条件的,漠视前提条件而盲目采取这种作法可能导致检验结果错误。本文的研究结... 详细信息

Wald、LR和LM检验的结果往往会出现不一致,对此很多学者采用Wald≥LR≥LM的结论,取较小统计量作为显著性检验判断的依据。但事实上,上述不等式的成立是有前提条件的,漠视前提条件而盲目采取这种作法可能导致检验结果错误。本文的研究结果表明:(1)只有在假定干扰项服从多元正态分布、估计模型为线性模型、待检验问题为线性约束形式和大样本的前提条件下,才能采用这样的选择依据;(2)对于一般性的检验模型,当Wald、LR和LM检验结果出现不一致时,基于现有这三个统计量的构造思想和原理,我们在理论上无法对这三个统计量进行选取。

关键词： Wald检验 LR检验 LM检验线性模型线性约束

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学龄前视障儿童盲文入门训练玩教具系统设计

山东工艺美术学院学报 2023年第2期 11-17页

作者：胡新明徐伶俐陈红情广东海洋大学

针对学龄前视障儿童玩教具匮乏的现实困境,基于设计伦理和人性关爱的视角展开学龄前视障儿童盲文前训练玩教具系统设计研究,以期为盲文预备性学习活动提供配套产品与服务。通过分析盲文教学基本概况,梳理学前视障儿童初学盲文时遇到的... 详细信息

针对学龄前视障儿童玩教具匮乏的现实困境,基于设计伦理和人性关爱的视角展开学龄前视障儿童盲文前训练玩教具系统设计研究,以期为盲文预备性学习活动提供配套产品与服务。通过分析盲文教学基本概况,梳理学前视障儿童初学盲文时遇到的问题和困难,以盲字认知特点为根本、以产品系统设计中整合优化解决问题的思想为指导,提炼出盲文导入—认知—巩固—运用的设计思路,同时贯穿功能系统性、过程科学性和认知合理性的设计原则进行设计实践,最终构建出一套整体连贯的产品系统。玩教具促进视障儿童学前教育早期干预的时效性和可行性,确保学前视障儿童平等地享受玩乐和教育的权利。

关键词：学龄前视障儿童盲文入门训练玩教具系统设计