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利用酶与微生物降低梗膏中果胶和蛋白质的研究

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中国烟草学报 2024年

作者：周乐周桂园胡巍耀龚嘉蕾马婷婷田丽君黎娟殷沛沛湖南农业大学农学院云南中烟工业有限责任公司技术中心江西中烟工业有限责任公司湖北中烟工业有限责任公司

【背景和目的】梗膏中含有大量果胶和蛋白质，为提升梗膏及再造烟叶品质。【方法】采用单因素实验与响应面优化法相结合，探究利用酶（酸性蛋白酶和果胶酶）和微生物（微杆菌和芽孢杆菌）降解梗膏中果胶和蛋白质的最佳试验条件，并分析... 详细信息

【背景和目的】梗膏中含有大量果胶和蛋白质，为提升梗膏及再造烟叶品质。【方法】采用单因素实验与响应面优化法相结合，探究利用酶（酸性蛋白酶和果胶酶）和微生物（微杆菌和芽孢杆菌）降解梗膏中果胶和蛋白质的最佳试验条件，并分析酶、微生物以及两者互配对梗膏化学成分、香气物质及感官质量的影响。【结果】（1）通过响应面法得到酶最佳酶解条件为：果胶酶浓度233.5U/g，酸性蛋白酶235.8U/g，温度50℃，时间2h；微生物最佳发酵条件为：菌液添加量9.2%（微杆菌：芽孢杆菌=1:1），温度29℃，时间34h。（2）酶处理可有效降低梗膏中果胶和蛋白质、增加总糖和还原糖含量；微生物处理有利于提升梗膏感官质量。（3）酶与微生物互配过程中以先酶后微生物处理的方法更有利于果胶降解、香气物质含量增加及感官质量改善。【结论】采用先酶后微生物的方法处理梗膏，对梗膏品质提升效果最佳。

关键词：复合酶微杆菌芽孢杆菌梗膏果胶蛋白质酶与微生物互配

造纸法再造烟叶萃取液可溶性固形物含量的快速测定方法研究

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造纸技术与应用 2024年第2期52卷 24-29页

作者：吴丽君王磊张文军陈宸吕恒锐刘馨芮彤段如敏殷沛沛胡巍耀刘静云南中烟工业有限责任公司云南昆明650106 郑州烟草研究院河南郑州450001 中烟施伟策(云南)再造烟叶有限公司云南玉溪653100

为准确、统一、快速地测定造纸法再造烟叶萃取液中固形物含量(质量分数)。利用折光法测定萃取液中可溶性固形物含量,同步采用经典气相色谱法测定固含量,通过标准曲线的制定、方法的重复性、方法中间精密度、共同验证实验及再造烟叶企业... 详细信息

为准确、统一、快速地测定造纸法再造烟叶萃取液中固形物含量(质量分数)。利用折光法测定萃取液中可溶性固形物含量,同步采用经典气相色谱法测定固含量,通过标准曲线的制定、方法的重复性、方法中间精密度、共同验证实验及再造烟叶企业产品测定,建立了造纸法再造烟叶萃取液固形物含量的快速测定方法。方法的重复性实验相对标准偏差RSD<1.00%,中间精密度相对标准偏差RSD小于1.02%,不同地点测定的固形物含量的RSD在4.99%~5.60%之间,不同仪器对萃取液固形物含量测定的绝对差值均小于1.50%,折光法测定一个样品时间<20s。该方法的重复性好,同时不受人员操作限制,方法具有较好的可操作性、可靠性和再现性,适用于造纸法再造烟叶萃取液可溶性固形物含量的快速测定。

关键词：再造烟叶萃取液固形物含量快速测定

利用PVMV侵染性克隆研究自身编码蛋白-6K1及异源病毒蛋白-aHCPro的功能作用

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利用PVMV侵染性克隆研究自身编码蛋白-6K1及异源病毒蛋白-aHCPro...

作者：胡巍耀海南大学

学位级别：硕士

侵染性克隆是重要的病毒学研究工具,常被用于研究病毒侵染机制、表达外源基因以及基因沉默。马铃薯Y病毒科(Potyviridae)是第一大植物RNA病毒科,包括多种农业和经济上重要的病毒种类。该科病毒+ss RNA基因组编码的融合蛋白在3种病毒蛋白... 详细信息

侵染性克隆是重要的病毒学研究工具,常被用于研究病毒侵染机制、表达外源基因以及基因沉默。马铃薯Y病毒科(Potyviridae)是第一大植物RNA病毒科,包括多种农业和经济上重要的病毒种类。该科病毒+ss RNA基因组编码的融合蛋白在3种病毒蛋白酶(P1,HC-Pro和NIa-Pro)酶解作用下产生11或12种成熟蛋白,其中包含两个低分子量病毒蛋白-6K1和6K2。先前研究发现马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒6K1蛋白在病毒侵染的细胞中形成点状内含物,与病毒复制复合体核心组份共定位,但6K1蛋白确切的生物学功能及作用机制尚不明确。因此本研究以甜椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)黄灯笼辣椒分离物(HNu)为研究对象,成功构建其侵染性克隆(pHNu与pHNu-GFP),利用其侵染性克隆,我们开展了PVMV自身编码的6K1蛋白的生物学功能研究。另外,为了探究pHNu的应用潜能,我们将其改造为植物病毒表达载体,以解析益智花叶病毒(Alo MV)编码的单一前导蛋白酶HCPro抑制寄主RNA沉默的机理。主要研究结果如下:(1)PVMV-HNu侵染性克隆的构建本研究首次完成PVMV-HNu的全基因组序列测定(共9795 nt,Gen Bank登录号:MN082715)及基因组注释。随后我们成功构建PVMV-HNu的全长cDNA克隆(pHNu),侵染性测定证明该克隆能高效侵染本氏烟和黄灯笼辣椒。基于pHNu,我们在PVMV NIb和CP蛋白间融合了GFP标签,构建了GFP标记的病毒克隆(pHNu-GFP),侵染性测定证明该克隆在本氏烟和黄灯笼辣椒中有与pHNu相似的侵染活性,并能在紫外灯下示踪病毒的侵染。(2)PVMV自身编码蛋白6K1的生物学功能研究利用PVMV侵染性克隆,我们发现P3-6K1接合位点可被NIa-Pro高效加工,但成熟6K1蛋白难以检测。突变P3-6K1接合位点(以使NIa-Pro无法识别/切割)废除了病毒的侵染活性,暗示6K1蛋白对病毒侵染至关重要并且存在某种蛋白降解通路能靶标6K1蛋白。进一步研究证明病毒侵染过程中6K1蛋白由细胞自噬通路降解。我们在Potyvirus病毒6K1蛋白序列中发现了17个保守的氨基酸位点,单氨基酸点突变实验证明其中15个氨基酸位点是PVMV侵染本氏烟和黄灯笼辣椒必需的。为了明确与6K1蛋白生物学功能相关的保守氨基酸位点,我们将含点突变的6K1蛋白分别整合至野生型病毒克隆的NIb和CP蛋白间,以干扰病毒自身6K1蛋白的功能。侵染测定表明:顺式表达其中5个氨基酸点突变(位于Lys/Arg-rich motif)的6K1蛋白能显著推迟病毒的侵染,另外我们发现这5个氨基酸点突变能拮抗6K1蛋白的自噬降解。本研究揭示了potyvirus病毒侵染的新机制:利用6K1蛋白的自噬降解正调控病毒侵染。(3)PVMV侵染性克隆作为植物病毒表达载体的应用探究:aHCPro抑制基因沉默机理本研究在益智植株中鉴定到一种新病毒,益智花叶病毒(Alpinia oxyphylla mosaic virus,Alo MV),并完成其全基因组序列的测定(共8213 nt,Gen Bank登录号:MG978107)。基因组序列注释和系统发育进化分析表明Alo MV是Potyviridae、柘树属病毒属(Macluravirus)的新成员。大部分的potyvirids编码串联的P1(丝氨酸蛋白酶)与HCPro(半胱氨酸蛋白酶)作为其前导蛋白酶,然而macluraviruses仅编码单一的小分子量HCPro作为其前导蛋白酶,这一类HCPro的生物学功能尚未报道。本研究证明aHCPro具有抑制寄主RNA沉默的功能,但aHCPro与potyviral HCPro相比具有多处截短,进而发现aHCPro抑制寄主RNA沉默通路中dsRNA的合成阶段。为了明确其抑制寄主RNA沉默机理,本研究将pHNu作为表达载体,在本氏烟中高表达aHCPro,并利用亲和纯化/质谱分析研究aHCPro与dsRNA合成相关蛋白的关联性。最后,本研究发现aHCPro能抑制dsRNA合成相关基因RDR2、RDR6、SGS3、SDE5的转录。本研究验证了PVMV侵染性克隆作为病毒表达载体的潜力,并首次揭示macluraviral HCPro抑制寄主RNA沉默的功能及作用机制。

关键词：侵染性克隆马铃薯Y病毒科马铃薯Y病毒属柘橙病毒属甜椒脉斑驳病毒益智花叶病毒 6K1 HCPro 自噬基因沉默黄灯笼辣椒

摩加夫芽孢杆菌产酶条件优化及对烟叶品质的影响

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中国烟草科学 2023年第3期44卷 69-76页

作者：李正风张鹏王萝萍胡巍耀端凯高丽伟张忠锋夏玉珍云南中烟工业有限责任公司昆明650201 中国农业科学院烟草研究所青岛266101

纤维素、果胶、淀粉和蛋白质是烟叶中含量较高的生物大分子,对烟叶品质的影响较为显著。本研究对烟叶醇化过程中的微生物进行筛选,并对其产酶条件和作用效果进行研究,旨在发掘对烟叶品质有促进效果的功能微生物资源。研究筛选得到2-4A菌... 详细信息

纤维素、果胶、淀粉和蛋白质是烟叶中含量较高的生物大分子,对烟叶品质的影响较为显著。本研究对烟叶醇化过程中的微生物进行筛选,并对其产酶条件和作用效果进行研究,旨在发掘对烟叶品质有促进效果的功能微生物资源。研究筛选得到2-4A菌株,能够同时分泌淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和蛋白酶,经鉴定为摩加夫芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。对2-4A菌株的发酵时间、发酵温度、培养基pH及接种量进行优化后,该菌株的淀粉酶、果胶酶、纤维素酶和蛋白酶的活力分别增加至41.36、3.64、5.14和72.13U/mL。用发酵液处理烟叶,能够对烟叶中的4种大分子物质进行降解,其中蛋白质的降解率达到37.8%,淀粉的降解率超过30%,果胶和纤维素的降解率均超过10%。经过2-4A菌株发酵液处理,烟叶中酮类、酸类、酯类、杂环类、醇类和醛类等香气物质的含量在整体上均得到提升,酸类和醇类物质提升最多。就单种致香物质而言,对烟叶香气有较大影响的茄尼酮含量比发酵前提高了0.51百分点,叶绿醇含量提高了15.83百分点,3-甲基丁酸含量提高了6.85百分点。摩加夫芽孢杆菌在协调烟叶化学组分和增加致香物质含量方面具有较好的效果,在提升烟叶品质方面具有应用潜力。

关键词：芽孢杆菌降解酶烟叶品质改善烟叶醇化

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产香真菌分离代谢及其在烟叶醇化中的应用

食品工业 2013年第3期34卷 154-159页

作者：朱东来谢俊秋胡巍耀颜克亮红云红河烟草(集团)有限责任公司昆明650202

以提升醇化烟叶品质为目的,从烟叶表面分离到一株产香真菌,对代谢成分进行分析,并将该菌代谢物调配成相应的醇化剂进行烟叶醇化的初步应用。结果表明:该菌经分子鉴定为Fusarium ***-1,同时,该菌能产果香类物质,其代谢产物主要为酮类及醇... 详细信息

以提升醇化烟叶品质为目的,从烟叶表面分离到一株产香真菌,对代谢成分进行分析,并将该菌代谢物调配成相应的醇化剂进行烟叶醇化的初步应用。结果表明:该菌经分子鉴定为Fusarium ***-1,同时,该菌能产果香类物质,其代谢产物主要为酮类及醇类,其中3-羟基-2-丁酮及4-庚醇含量较高。将配制的醇化剂应用于上部烟叶的烟叶醇化过程中,能有效的提升烟叶香气量及其丰富性。

关键词：产香真菌代谢烟叶醇化

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岩溶地区隧道施工要点与对策研究

工程技术研究 2019年第10期4卷 49-50页

作者：胡巍耀柳州市城市投资建设发展有限公司

岩溶区地质问题是公路隧道建设的难题,近年来随着公路建设向西部和南部的山区推进,在岩溶地区修建公路的情况越来越多,面临的难题也日益复杂,岩溶问题严重影响公路隧道的建设和运营安全。文章结合工程实例,介绍岩溶区隧道建设常见的问... 详细信息

岩溶区地质问题是公路隧道建设的难题,近年来随着公路建设向西部和南部的山区推进,在岩溶地区修建公路的情况越来越多,面临的难题也日益复杂,岩溶问题严重影响公路隧道的建设和运营安全。文章结合工程实例,介绍岩溶区隧道建设常见的问题以及成因,以及岩溶区隧道建设中常用的加固措施,最后以工程实例介绍岩溶隧道施工的步骤及要点。

关键词：公路隧道岩溶施工加固

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城市道路施工过程中的工程质量控制

跨世纪 2008年第6期16卷 125-126页

作者：胡巍耀柳州市城市投资建设发展有限公司广西柳州545001

本文就将从工程质量的内涵谈起，分析道路工程质量的影响因素，并提出了控制和管理城市道路工程质量的对策和措施。

关键词：城市道路工程质量控制对策

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低温处理对卷烟烟气水分和CO的影响

烟草科技 2010年第7期43卷 26-28页

作者：徐安传王超胡巍耀红云红河烟草(集团)有限责任公司技术中心昆明市北郊上庄650202

为研究低温处理对卷烟烟气水分和CO的影响,将生产线上刚加完香的成品烟丝分别在0,-5,-10,-15和-20℃下放置10,20和30min,测定了处理烟丝卷烟主流烟气中的水分和CO。结果表明:①与对照相比,处理后的卷烟烟气水分均有所提高、CO均有所降低... 详细信息

为研究低温处理对卷烟烟气水分和CO的影响,将生产线上刚加完香的成品烟丝分别在0,-5,-10,-15和-20℃下放置10,20和30min,测定了处理烟丝卷烟主流烟气中的水分和CO。结果表明:①与对照相比,处理后的卷烟烟气水分均有所提高、CO均有所降低;②相同的低温处理时间内,卷烟烟气水分随处理温度的降低呈先升高后降低的趋势,最大提高幅度为7.66%;CO则随处理温度的降低呈先降低后升高的趋势,最大降幅为7.58%;③相同的处理低温下,卷烟烟气水分随处理时间的延长呈先升高后降低的趋势,CO则随处理时间的延长而逐渐降低。在适当低温条件下处理烟丝,有助于提高卷烟烟气水分含量,降低CO含量。

关键词：低温处理主流烟气水分 CO

烟叶内含糖类和多酚类组分对其主流烟气水分的影响

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食品工业 2013年第1期34卷 46-48页

作者：徐安传胡巍耀段俊杰张晓龙红云红河烟草(集团)有限责任公司技术中心昆明650202 云南瑞升烟草技术(集团)有限公司昆明650106

采用灰色关联分析方法确定烟叶内含糖类和多酚类组分对主流烟气水分的影响及其程度。研究结果表明:(1)果糖、单糖、还原糖、麦芽糖、葡萄糖、蔗糖/麦芽糖、蔗糖、双糖对主流烟气水分起削弱作用,其作用依次减小,而单双糖之比和果糖/葡萄... 详细信息

采用灰色关联分析方法确定烟叶内含糖类和多酚类组分对主流烟气水分的影响及其程度。研究结果表明:(1)果糖、单糖、还原糖、麦芽糖、葡萄糖、蔗糖/麦芽糖、蔗糖、双糖对主流烟气水分起削弱作用,其作用依次减小,而单双糖之比和果糖/葡萄糖对主流烟气水分起增进作用,其增进作用依次增大;(2)莨菪亭对烟气水分的增进作用大于芸香苷,而绿原酸对烟气水分起削弱作用。

关键词：内含糖组分多酚组分主流烟气水分灰色关联分析