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一种基于浓度调节的改进型量子遗传算法

华东理工大学学报（自然科学版） 2016年第5期42卷 690-695页

作者：胡小祥刘漫丹华东理工大学化工过程先进控制和优化技术教育部重点实验室上海200237

针对量子遗传算法(QGA)优化多峰函数时存在收敛速度慢、容易陷入局部最优的缺陷,提出了改进型量子遗传算法(IQGA)。引入个体浓度的概念,在量子门更新之前对种群进行筛选并剔除高浓度个体和劣个体,并用新的个体代替它们,增强了量子遗传... 详细信息

针对量子遗传算法(QGA)优化多峰函数时存在收敛速度慢、容易陷入局部最优的缺陷,提出了改进型量子遗传算法(IQGA)。引入个体浓度的概念,在量子门更新之前对种群进行筛选并剔除高浓度个体和劣个体,并用新的个体代替它们,增强了量子遗传算法全局搜索能力。通过典型复杂连续函数的对比测试,验证了该改进型量子遗传算法的可行性和有效性。

关键词：量子遗传算法浓度改进型量子遗传算法对比测试

小儿解表颗粒HPLC指纹图谱研究及多指标成分定量分析

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药物分析杂志 2020年第8期40卷 1355-1364页

作者：何艳胡小祥湘南学院药学院郴州423000 郴州市食品药品检验检测中心郴州423000

目的:建立小儿解表颗粒的HPLC指纹图谱,并同时测定葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、牛蒡苷4个指标性成分的含量。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,... 详细信息

目的:建立小儿解表颗粒的HPLC指纹图谱,并同时测定葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、牛蒡苷4个指标性成分的含量。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长326、250、278 nm;分别对15批小儿解表颗粒的指纹图谱和4个指标性成分的含量进行研究。结果:建立了小儿解表颗粒的HPLC指纹图谱,共确定了21个共有峰,与混合对照品比较,指认了其中12个指标成分,分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、牛蒡苷、汉黄芩苷和黄芩素,利用相似度软件对15批样品指纹图谱进行分析,各批样品相似度均在0.98以上。在建立的色谱条件下,定量分析的4个成分分离度良好,方法精密度和重复性的RSD均<1.5%,供试品溶液在36 h内稳定,各成分具有良好的线性关系和较宽的线性范围,加样回收率在96.1%~100.3%之间,RSD在0.74%~2.4%之间;15批小儿解表颗粒中葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、牛蒡苷的含量范围分别为0.853~1.130、0.246~1.655、4.861~6.932、2.690~3.859 mg·g-1。结论:所建立的HPLC指纹图谱方法和多指标成分测定方法可有效地评价小儿解表颗粒的质量。

关键词：小儿解表颗粒高效液相色谱法指纹图谱葛根素连翘酯苷A 黄芩苷牛蒡苷质量控制

HPLC法同时测定骨折挫伤胶囊中7种成分的含量

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中药新药与临床药理 2020年第2期31卷 224-228页

作者：胡小祥何艳郴州市食品药品检验检测中心湖南郴州423000 湘南学院药学院湖南郴州423000

目的建立HPLC法同时测定骨折挫伤胶囊中羟基红花黄色素A、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。方法采用ZORBAX Eclipse Plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:1... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定骨折挫伤胶囊中羟基红花黄色素A、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量。方法采用ZORBAX Eclipse Plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^-1,柱温:35℃,检测波长:403、440、254 nm。结果羟基红花黄色素A、血竭素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚质量浓度分别在2.111~21.11μg·mL^-1(r=0.999 1)、1.483~14.83μg·mL^-1(r=0.999 3)、1.180~11.80μg·mL^-1(r=0.999 7)、0.8182~8.182μg·mL^-1(r=0.999 7)、1.011~10.11μg·mL^-1(r=0.999 7)、1.075~10.75μg·mL^-1(r=0.999 6)和1.045~10.45μg·mL^-1(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为100.30%(RSD=2.24%)、97.42%(RSD=1.63%)、96.21%(RSD=0.92%)、101.17%(RSD=2.74%)、95.84%(RSD=1.31%)、97.71%(RSD=2.49%)和95.50%(RSD=1.15%)。结论该方法准确度高、重复性好,可为骨折挫伤胶囊的质量控制提供参考。

关键词：骨折挫伤胶囊羟基红花黄色素A 血竭素芦荟大黄素大黄酸大黄素大黄酚大黄素甲醚高效液相色谱法

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大豆、榨菜的组织培养及遗传转化研究

大豆、榨菜的组织培养及遗传转化研究

作者：胡小祥浙江大学

学位级别：硕士

本论文研究了大豆的离体再生和根癌农杆菌介导的遗传转化及榨菜的离体培养。大豆子叶、下胚轴培养在不同激素的B5培养基中，只能诱导出愈伤组织，难分化芽。但子叶节却能诱导出丛生芽，在2mg／L BA+0.2mg／L IBA的B5培养基上再生... 详细信息

本论文研究了大豆的离体再生和根癌农杆菌介导的遗传转化及榨菜的离体培养。大豆子叶、下胚轴培养在不同激素的B5培养基中，只能诱导出愈伤组织，难分化芽。但子叶节却能诱导出丛生芽，在2mg／L BA+0.2mg／L IBA的B5培养基上再生频率达41.9％。以榨菜子叶、真叶为外植体进行离体培养，用BA、CPPU、TDZ和KT等细胞分裂素和生长素NAA、IBA组合诱导子叶、真叶再生不定芽试验。结果表明，供试细胞分裂素中，诱导活性大小为TDZ＞CPPU＞BA＞KT，BA、CPPU、TDZ和KT诱导子叶不定芽再生的最佳浓度分别为4、0.4、1、1.5 mg／L。1 mg／LTDZ和1 mg／L NAA配合对子叶再生具有极强的诱导作用，再生率最高，达到67.9％，平均每外植体不定芽数达35个。在培养基中添加AgNO对于叶离体再生有明显促进作用，以8mg／L AgNO的效果最好，再生频率达56.7％，比对照提高了23.4％。对子叶、真叶、下胚轴、根系四种外植体在附加1 mg／LTDZ+0.5mg／L NAA的MS培养基上的再生能力进行了比较，发现子叶再生频率最高，真叶次之，下胚轴只分化愈伤组织，少数分化出绿色芽点，根系最差，既不能分化愈伤，也不能分化芽。通过从重组质粒pBI121上切下S基因(连同35 S启动子)片段，将该片段定向克隆到pCAMBIA1305.1质粒的多克隆位点HindⅢ、BamHⅠ之间，构建了一种植物表达载体。经双酶切鉴定证实S基因克隆到载体pCAMBIA1305.1上。用三亲交配法将重组克隆导入根癌农杆菌EHA105，获得了含pCAMBIA1305.1重组质粒的EHA105根癌农杆菌菌株。通过根癌农杆菌介导对传染性支气管炎病毒纤突蛋白S基因在大豆中的遗传转化进行了研究。以子叶节为外植体，在抗性筛选培养基上大多白化死亡，有少数生长出芽，转化频率最高为6.7％

关键词：大豆根癌农杆菌遗传转化植株再生榨菜

极光螺杆菌丙氨酸脱氢酶的酶学性质研究、改造及应用

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极光螺杆菌丙氨酸脱氢酶的酶学性质研究、改造及应用

作者：胡小祥江南大学

学位级别：硕士

丙氨酸脱氢酶(ADH;EC.1.***.1.1)属于氧化还原酶类,该酶可以利用NAD(P)和NAD(P)H作为辅酶,催化丙氨酸和丙酮酸之间的相互转化。它在细菌、真菌和植物中普遍存在,是糖代谢和氨基酸代谢过程中非常重要的酶,在食品、医药、生物技术领域已被... 详细信息

丙氨酸脱氢酶(ADH;EC.1.***.1.1)属于氧化还原酶类,该酶可以利用NAD(P)和NAD(P)H作为辅酶,催化丙氨酸和丙酮酸之间的相互转化。它在细菌、真菌和植物中普遍存在,是糖代谢和氨基酸代谢过程中非常重要的酶,在食品、医药、生物技术领域已被广泛应用。本研究对致病菌Helicobacter aurati的基因序列进行分析,发现它存在两个潜在的ADH蛋白序列,我们将其命名为HaADH1和HaADH2,采用不同拷贝数的质粒在分子伴侣蛋白的协助下促进其可溶性表达,以丙酮酸为底物,发现HaADH1能够催化丙氨酸和丙酮酸之间的相互转化,但HaADH2对丙氨酸和丙酮酸都没有显示出催化活力。对HaADH1的酶学性质进行研究,得到其最适温度为55℃,还原反应的最适p H为8.0,在p H 5.0的时候只有最大活力的17%,但其比酶活却有45.6 U·mg,氧化反应的最适p H为9.0。所有测定的金属离子对HaADH1都有不同程度的抑制,说明这个酶属于非金属依赖型的酶。在还原反应中,HaADH1对丙酮酸表现出最高的底物亲和力(K=0.56 m M,k/K=364.1 s·m M),与丙酮酸相比,HaADH1对草酰乙酸,3-氟丙酮酸,α-酮戊二酸,乙醛酸的相对活性分别为93.3%,5.6%,2.6%,2.5%,而氧化反应只对丙氨酸具有氧化活性。对丙酮酸、3-氟丙酮酸、丙氨酸、NH的K值分别为0.6、15.0、2.3、31.0 m M,k/K值分别为364.1、0.6、8.1、7.1 s·m M。系统发育树分析表明HaADH1与他人已报道的丙氨酸脱氢酶的序列相似性较低,说明这是一种新型的丙氨酸脱氢酶。将HaADH1与葡萄糖脱氢酶连接到p RSFDuet-1载体上,转化进大肠杆菌中进行共表达,通过全细胞催化50 m M的3-氟丙酮酸,12 h的转化率达到98.3%。与以往已经报道的丙氨酸脱氢酶进行序列比对,发现Arg 15,Lys 74,His 95,Asp 268这四个位点是非常保守的,对这四个保守氨基酸进行定点突变,发现突变体均丧失了活性,并且有文献报道这四个位点是催化中心,因此推测在HaADH1中这四个位点可能也是催化中心。利用同源建模得到的模型结构对底物周围5(?)范围内的氨基酸进行丙氨酸扫描,发现只有Y93A对丙酮酸的催化活力上升,上升为野生型(Wild type,WT)的106%。对丙氨酸侧链甲基所在疏水口袋的三个氨基酸Tyr 93、Leu 128、Met 131进行饱和突变,发现Y93R和Y93K对丙酮酸的还原反应酶活力分别上升为野生型的164.5%和155.0%,半衰期由野生型的2.5 h分别提高到3 h和3.4 h,对3-氟丙酮酸的k/K值由野生型的0.6 s·m M分别提升至2.5和1.8 s·m M。

关键词：丙氨酸脱氢酶酶学性质 3-氟丙氨酸饱和突变极光螺杆菌

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HPLC法同时测定小儿解表颗粒中6种成分

中成药 2020年第2期42卷 305-308页

作者：何艳胡小祥湘南学院药学院湖南郴州423000 郴州市食品药品检验检测中心湖南郴州423000

目的建立HPLC法同时测定小儿解表颗粒(金银花、连翘、牛蒡子等)中葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、牛蒡苷、汉黄芩苷、黄芩素的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈⁃0.2%... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定小儿解表颗粒(金银花、连翘、牛蒡子等)中葛根素、连翘酯苷A、黄芩苷、牛蒡苷、汉黄芩苷、黄芩素的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈⁃0.2%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长250、278、326 nm。结果6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9992),平均加样回收率98.8%~101.4%,RSD 0.58%~1.6%。结论该方法准确,重复性好,可用于小儿解表颗粒的质量控制。

关键词：小儿解表颗粒葛根素连翘酯苷A 黄芩苷牛蒡苷汉黄芩苷黄芩素 HPLC

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HPLC法同时测定杜仲平压片中6种成分

中成药 2020年第1期42卷 41-44页

作者：何艳胡小祥湘南学院药学院湖南郴州423000 郴州市食品药品检验检测中心湖南郴州423000

目的建立HPLC法同时测定杜仲平压片(杜仲叶)中京尼平苷酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁的含有量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Thermo Hypersil Gold C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定杜仲平压片(杜仲叶)中京尼平苷酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、芦丁的含有量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Thermo Hypersil Gold C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长238、324、354 nm。结果 6种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 8),平均加样回收率98.07%~100.34%,RSD 1.03%~1.96%。结论该方法准确可靠,重复性好,可用于杜仲平压片的质量控制。

关键词：杜仲平压片京尼平苷酸新绿原酸绿原酸隐绿原酸咖啡酸芦丁 HPLC

高效液相色谱指纹图谱结合化学模式识别评价伤风停胶囊的质量

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中药新药与临床药理 2021年第10期32卷 1513-1518页

作者：何艳刘冠琼胡小祥湘南学院药学院湖南郴州423099 郴州市食品药品检验检测中心湖南郴州423002

目的建立伤风停胶囊高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别技术对其进行质量评价。方法采用Thermo Acclaim C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%NH4Cl)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1)... 详细信息

目的建立伤风停胶囊高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别技术对其进行质量评价。方法采用Thermo Acclaim C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%NH4Cl)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),柱温为30℃,检测波长为210、254 nm,进样量:10μL,建立伤风停胶囊的HPLC指纹图谱。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012.130723版)建立指纹图谱共有模式和计算相似度,结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)以及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对伤风停胶囊进行质量评价和差异分析。结果建立了伤风停胶囊的HPLC指纹图谱,共确定23个共有峰,指认了盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、橙皮苷、甘草酸、欧前胡素和异欧前胡素6个共有峰;14批样品相似度均大于0.988,CA、PCA和OPLS-DA结果显示14批样品按照生产年份分为2类,并筛选出5个质量差异性标志物。结论所建立的方法简单、准确,可用于伤风停胶囊批次间稳定性控制和质量评价。

关键词：伤风停胶囊高效液相色谱法指纹图谱化学模式识别差异性标志物

HPLC法同时测定感冒止咳颗粒中10种成分

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中成药 2020年第4期42卷 849-852页

作者：何艳胡小祥王庆湘南学院药学院湖南郴州423000 郴州市食品药品检验检测中心湖南郴州423000

目的建立HPLC法同时测定感冒止咳颗粒(柴胡、山银花、葛根等)中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX SB-C18... 详细信息

目的建立HPLC法同时测定感冒止咳颗粒(柴胡、山银花、葛根等)中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的含有量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;检测波长250、278、326 nm。结果 10种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 4),平均加样回收率为98.05%~101.95%,RSD为0.45%~2.28%。结论该方法简便准确,重复性好,可用于感冒止咳颗粒的质量控制。

关键词：感冒止咳颗粒化学成分 HPLC