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乌鳢水泡病毒(SHVV)巢式PCR检测方法的建立与应用

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科学养鱼 2024年第1期 57-59页

作者：娄剑锋公翠萍肖自东刘晓丹胡大雁劳顺健湖州市南浔区农业技术推广服务中心浙江南浔313009 湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 湖州市农业种质资源创新与应用重点实验室浙江湖州313000 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225000

巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系... 详细信息

巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系的建立和反应程序的优化,建立一种检测乌鳢水泡病毒的方法,为及时发现并快速诊断乌鳢水泡病毒提供一项重要的技术手段。

关键词：巢式PCR 病毒基因反应程序乌鳢快速诊断普通PCR 杂交鳢检测方法

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湖州市稻渔综合种养产业发展情况

科学养鱼 2024年第2期 2-3页

作者：公翠萍王曙张圆琴张金鹏胡大雁劳顺健湖州市农业科学研究院浙江湖州313000 湖州市农业种质资源创新与应用重点实验室浙江湖州313000

2018年以来,湖州市农业农村部门将发展稻渔综合种养作为农业增效、农民增收、农村增绿的重要抓手,大力推广“稻-小龙虾”“稻-鳖”“稻-青虾”等稻渔综合种养模式,综合效益显著。截至2023年12月,全市稻渔综合种养面积达20.29万亩,严格... 详细信息

2018年以来,湖州市农业农村部门将发展稻渔综合种养作为农业增效、农民增收、农村增绿的重要抓手,大力推广“稻-小龙虾”“稻-鳖”“稻-青虾”等稻渔综合种养模式,综合效益显著。截至2023年12月,全市稻渔综合种养面积达20.29万亩,严格规范稻渔共生种养模式,重点鼓励稻渔轮作种养模式,培育省级稻渔综合种养重点示范县5个,在浙江省率先实现全覆盖,其中南浔区、长兴县通过省级第一批验收,创建省级稻渔综合种养示范基地38个,数量位居全省第一。

关键词：南浔区种养模式小龙虾农民增收农业增效示范基地稻渔综合种养长兴县

基于iTRAQ技术分析2种典型养殖模式下大口黑鲈肌肉蛋白组表达差异

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江苏农业科学 2022年第17期50卷 174-180页

作者：周聃王曙周冬仁盛鹏程胡大雁周志金农业农村部淡水渔业健康养殖重点实验室/浙江省淡水水产研究所浙江湖州313001 浙江省湖州市农业科技发展中心浙江湖州313001

池塘内循环水养殖(IPRA)模式下的大口黑鲈与池塘养殖相比,其鱼肉品质有一定提升,但缺乏机制研究。采用iTRAQ技术对2种养殖模式下大口黑鲈鱼肉中蛋白质表达进行定量及生物信息学分析。结果显示,IPRA养殖与传统池塘养殖相比,共有差异蛋白... 详细信息

池塘内循环水养殖(IPRA)模式下的大口黑鲈与池塘养殖相比,其鱼肉品质有一定提升,但缺乏机制研究。采用iTRAQ技术对2种养殖模式下大口黑鲈鱼肉中蛋白质表达进行定量及生物信息学分析。结果显示,IPRA养殖与传统池塘养殖相比,共有差异蛋白152个,其中,上调蛋白数98个,下调蛋白数54个;筛选得鱼肉品质密切相关的28个目标差异蛋白,主要分成6类,分别为肌动蛋白细胞骨架调节(8个)、糖酵解(8个)、柠檬酸循环(5个)、氧化磷酸化(3个)、钙信号通路(3个)和热休克(1个),主要影响鱼肉的纤维组成、色泽、嫩度等方面。与传统池塘养殖模式相比,IPRA养殖的大口黑鲈肌肉中糖酵解、TCA循环、氧化磷酸化、钙离子结合及抗应激能力均有显著加强,表明IPRA养殖通过加强一定的运动,提高鱼体代谢,从而改善鱼肉营养和品质。

关键词：大口黑鲈池塘内循环水养殖池塘养殖蛋白质组学 iTRAQ

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36种天然植物提取物抗多子小瓜虫活性研究

浙江农业科学 2023年第5期64卷 1246-1250页

作者：胡少军胡大雁杭州市富阳区农业技术推广中心浙江杭州311400 湖州市农业科技发展中心浙江湖州313000

研究36种天然提取物对多子小瓜虫的体外和体内杀虫活性。利用水提法和醇提法制备36种天然植物的提取物,构建体外和体内杀小瓜虫药效模型,研究36种天然植物提取物抗小瓜虫的活性。实验结果表明,牛蒡子、小果博落回、丁香、博落回、大黄等... 详细信息

研究36种天然提取物对多子小瓜虫的体外和体内杀虫活性。利用水提法和醇提法制备36种天然植物的提取物,构建体外和体内杀小瓜虫药效模型,研究36种天然植物提取物抗小瓜虫的活性。实验结果表明,牛蒡子、小果博落回、丁香、博落回、大黄等7种天然植物提取物可100%杀灭小瓜虫的掠食体和包囊。其中,大黄乙醇提取物杀虫效果最佳,其浓度达到10.0 mg·L^(-1)时,可100%抑制小瓜虫包囊的分裂孵化;其浓度为5.0 mg·L^(-1)时,可100%杀灭小瓜虫掠食体。浸泡使用30.0 mg·L^(-1)大黄乙醇提取物后,草鱼鱼体感染小瓜虫的数量显著减少,存活率可达65.8%,而对照组存活率仅为30.0%。大黄乙醇提取物对多子小瓜虫具有较好的杀灭作用。

关键词：天然植物多子小瓜虫杀虫活性博落回

我国保险领域冷静期制度发展现状、检视与展望

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西南金融 2014年第11期 31-35页

作者：胡大雁西南政法大学重庆401120

冷静期制度是在金融消费者权益倾斜性保护背景下赋予金融消费者的一项重要权利制度。近年来,保险消费者投诉数量每年递增,所涉及的潜在损失金额较大,对消费者影响较深。目前,在我国保险领域,立法、司法、保险产品层面对冷静期均有所涉及... 详细信息

冷静期制度是在金融消费者权益倾斜性保护背景下赋予金融消费者的一项重要权利制度。近年来,保险消费者投诉数量每年递增,所涉及的潜在损失金额较大,对消费者影响较深。目前,在我国保险领域,立法、司法、保险产品层面对冷静期均有所涉及,不同层面上冷静期的适用有所联系,域外在保险领域对冷静期的规定有较多经验。本文通过借鉴域外关于冷静期的规定,比较现实中不同层面的冷静期制度并加以完善,使其更好地为保险消费者权益保护服务。

关键词：冷静期消费者权益保护保险产品

云南汉族系统性红斑狼疮与补体C3基因的相关性研究

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云南汉族系统性红斑狼疮与补体C3基因的相关性研究

作者：胡大雁昆明医学院

学位级别：硕士

目的:1、通过研究系统性红斑狼疮(Systemic LupusErythematosus,SLE)患者C3基因中是否存在外显子39发生点突变,来探讨SLE的发病机制是否与C3的基因突变相关。2、并进一步探讨血浆中补体C3、C4和免疫球蛋白水平与SLE临床表现及病情的相... 详细信息

目的:1、通过研究系统性红斑狼疮(Systemic LupusErythematosus,SLE)患者C3基因中是否存在外显子39发生点突变,来探讨SLE的发病机制是否与C3的基因突变相关。2、并进一步探讨血浆中补体C3、C4和免疫球蛋白水平与SLE临床表现及病情的相关性。方法:1、利用免疫比浊法测定92例SLE患者的补体C3、C4水平。2、利用RT-PCR(逆转录聚合酶联反应)测定92例SLE患者和54例正常人血中补体C3mRNA序列。并进行DNA测序。结果:1、本组SLE临床症状和体征从高到低依次为关节炎(54.35%)、蝶形红斑(53.26%)、肾损害(50%)、盘状红斑(34.78%)、光敏感(10.87%)、浆膜炎(6.52%)、神经系统改变(5.43%)、口腔溃疡(1.09%)。并发症由高到低依次是细菌感染、高血压、真菌感染、带状疱疹、出血、药疹、股骨头坏死。2、92例SLE患者治疗后SLEDAI评分较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P=0.00)。3、不同SLEDAI评分组血浆中C3及免疫球蛋白水平均无统计学差异(P＞0.05)。SLEDAI评分0-5分组与SLEDAI评分5-10分组、SLEDAI评分＞10分组比较C4的水平,后二者C4水平明显降低,且有统计学差异(P=0.001、P=0.003)。4、不同系统损害的SLE患者组间C3、C4、免疫球蛋白水平均无统计学差异(P＞0.05)。5、RT-PCR结果表明65名SLE患者不存在补体C3exon39点突变。结论:①大部份SLE患者补体C3不存在ex39的点突变,不能证实补体C3ex39的点突变为SLE患者的易感基因;本研究资料中未明确发现云南汉族SLE患者携带遗传性C3缺乏。②静止期患者补体C3水平大致正常,随着病情活动增加,补体C3水平低于正常,呈逐渐降低的趋势。病情活动与C3水平明显相关。③血浆中补体C3、C4及免疫球蛋白水平与不同的脏器损伤无明显相关性。④根据SLEDAI评分、补体C3、C4及免疫球蛋白水平综合评价SLE的病情活动、疗效具有重要意义。

关键词：系统性红斑狼疮补体C3 补体C4 RT-PCR 免疫球蛋白低补体血症

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金融交易冷静期规则:制度比较与借鉴

南方金融 2014年第4期 87-90,16页

作者：胡大雁西南政法大学市场经济法治研究中心重庆401120

在全球金融市场高度融合化的当下,我国尚无关于金融消费者保护的完善立法,我国金融业也在摸索中前进发展,随之而来的金融交易中的消费者权益保护问题也愈来愈受关注。2013年10月新修订的《中华人民共和国消费者权益保护法》(以下简称"... 详细信息

在全球金融市场高度融合化的当下,我国尚无关于金融消费者保护的完善立法,我国金融业也在摸索中前进发展,随之而来的金融交易中的消费者权益保护问题也愈来愈受关注。2013年10月新修订的《中华人民共和国消费者权益保护法》(以下简称"新消法")关于冷静期的规定赋予了金融交易中的网购消费者一项新的独立权利——后悔权,以期降低消费者非理性交易的几率,体现一定的合理性和公平性。在金融交易中引入冷静期规则对其他领域消费者权益的保护也起到了很好的导向作用。本文通过对金融交易中冷静期规则的分析、借鉴各国关于冷静期规则的规定,探讨我国关于冷静期规则的现状和不足,提出构建我国金融交易冷静期规则的路径,从而切实维护金融交易中消费者的权益。

关键词：金融交易消费者权益保护冷静期规则

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金融交易中买者自负原则的适用与展望

征信 2014年第8期32卷 69-73页

作者：胡大雁西南政法大学经济法学院重庆401120

买者自负原则产生由来已久,其深受古典经济学理论的影响,最初应用于不动产领域。如今在新制度经济学的背景下,买者自负原则扩展到金融消费领域。在金融市场高度发展的今天,法律逐步强调对金融消费者的倾斜性保护,买者自负原则在我国的... 详细信息

买者自负原则产生由来已久,其深受古典经济学理论的影响,最初应用于不动产领域。如今在新制度经济学的背景下,买者自负原则扩展到金融消费领域。在金融市场高度发展的今天,法律逐步强调对金融消费者的倾斜性保护,买者自负原则在我国的一些效力层级较低的法律规范之中的体现显得无关紧要。买者自负原则作为市场经济的一个基本原则,其适用条件和责任分配在金融消费者权益保护方面可以起到积极的作用。通过对买者自负原则的研究,使其可以在金融市场高度发展的今天更好的为金融消费者服务。

关键词：古典经济学买者自负原则金融消费者权益保护新制度经济学

浙江余杭中华鳖暴发性疾病主要病原及诊断技术研究

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浙江余杭中华鳖暴发性疾病主要病原及诊断技术研究

作者：胡大雁华中农业大学

学位级别：硕士

中华鳖养殖业是我国水产养殖业的重要组成部分,也是水产养殖业中经济效益较高的养殖种类。但随着中华鳖养殖规模不断扩大,各种病害也日趋增多,暴发性传染病更是引起人们的关注。2006年5—7月,杭州市余杭区某中华鳖养殖场生态鳖养殖池出... 详细信息

中华鳖养殖业是我国水产养殖业的重要组成部分,也是水产养殖业中经济效益较高的养殖种类。但随着中华鳖养殖规模不断扩大,各种病害也日趋增多,暴发性传染病更是引起人们的关注。2006年5—7月,杭州市余杭区某中华鳖养殖场生态鳖养殖池出现中华鳖急性发病并出现大量死亡,死亡中华鳖脖子肿大,底板发白,咽喉腮状组织群毛突起、充血糜烂,胃肠粘膜严重充血,脾脏紫黑色,肝脏肿大呈花斑状。作者对发病中华鳖进行了细菌分离和病毒病原研究:从发病中华鳖肝脏、脾脏、肾脏分离到气单胞菌等细菌,对正常中华鳖进行感染试验,以1×10～8cfu/ind攻毒不能使中华鳖发病;取典型症状的发病中华鳖内脏匀浆上清除菌过滤后,以1:50-1:5000稀释后以0.5mL/ind肌肉注射健康中华鳖,5d后陆续发病死亡,死亡中华鳖出现脖子肿大、咽喉及胃肠粘膜严重充血、脾脏紫黑色、肝脏肿大呈花斑状等自然发病中华鳖相似症状;取人工感染发病中华鳖组织匀浆除菌后继续感染健康中华鳖,已成功在健康中华鳖中重复感染5代,均可复制出相同症状,人工感染发病鳖内脏中未分离到细菌;取发病中华鳖组织经2.5%戊二醛固定、磷钨酸染色后超薄切片电镜观察,从肠组织中发现大量的球状病毒,病毒颗粒大小为127±4nm。为进一步研究病毒特性,作者以中华鳖肾组织、胚胎为材料,用组织块培养法进行原代肾细胞和胚胎细胞培养,采用15%胎牛血清及12%新生牛血清的DMEM培养基分别用于原代培养和传代细胞培养,建立了中华鳖肾细胞株PsK-0612和胚胎细胞株PsE-0612。目前两个建株细胞分别传代80余代及70余代,均为上皮样细胞,生长和传代稳定;传代细胞冻存后,复苏状态良好,最适培养温度为28-30℃。对两个建株细胞的生长指数、分裂指数进行了测定,绘制了生长曲线和分裂指数曲线,结果PsK-0612与PsE-0612的生长呈缓慢-快速-稳定的趋势;分裂指数分别于接种后第4天和第2天达到高峰;分别对50个第49代分裂中期PsK-0612细胞和第37代分裂中期PsE-0612细胞进行分析表明,PsK-0612与PsE-0612染色体数目为2n=66±2。将典型症状发病中华鳖组织匀浆滤液接种作者建立的中华鳖肾细胞株PsK-0612和胚胎细胞株PsE-0612;其中,接种后的PsK-0612在30℃培养4—6d后可出现细胞病变,表现为细胞颗粒明显增多、出现大量空洞,随后大量脱落,对照细胞培养相同时间后未见明显病变;用第4代出现病变细胞的悬液以0.5mL/ind注射健康中华鳖,对照为第4代出现病变细胞的悬液在56℃灭活30 min,6d后,中华鳖发病死亡,对照中华鳖未发病:PsE-0612未出现明显的病变。病毒分类有关工作还在进行中。从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608,该菌株毒力较强,是重要的继发病原。取T0608福尔马林灭活菌体注射免疫新西兰兔,制备了高价免疫血清,血清的菌体凝集效价可达1/1 280;用G蛋白亲和层析纯化兔IgG,将IgG用生物素标记,建立了生物素—亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA-ELISA);该法的最低检出限为2.5×10～3 cfu,相当于0.5 ng菌体蛋白,其检测灵敏度为ABC-ELISA(4.0×10～4 cfu)和间接ELISA(4.0×10～4 cfu)的16倍;本法对鱼类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应,有良好的特异性。用BA-ELISA法对湖州市龟鳖养殖场的水样、中华鳖和巴西龟肝、肠道内容物进行检测,结果表明本法可用于直接检测发病中华鳖肝、肠中的嗜水气单胞菌,可较好应用于发病中华鳖的病原早期快速诊断及养殖中华鳖的病原检测。

关键词：中华鳖病毒细胞株生物素—亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法嗜水气单胞菌检测