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黄精多糖抗缺氧诱导的原代新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡研究

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黄精多糖抗缺氧诱导的原代新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡研究

作者：肖移生江西医学院

学位级别：硕士

目的:研究中药黄精多糖抗缺氧诱导的新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护机理。方法:1、采用“Neurobasal加B27 Supplement”进行新生大鼠大脑皮层神经细胞体外无血清培养;2、采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化染色方法鉴定培养6... 详细信息

目的:研究中药黄精多糖抗缺氧诱导的新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护机理。方法:1、采用“Neurobasal加B27 Supplement”进行新生大鼠大脑皮层神经细胞体外无血清培养;2、采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化染色方法鉴定培养6d的神经细胞比例;3、采用Trypan blue拒染法检测不同剂量的黄精多糖对培养4d的神经细胞作用48h后的细胞毒性反应;4、采用Hoechst 33342荧光染色法及Trypan blue拒染法测定培养4d后的神经细胞加入50μg/ml -8mg/ml的黄精多糖预处理10h,再进行缺氧12h复氧48h处理,黄精多糖抗神经细胞凋亡和抗神经细胞坏死的量效关系;5、黄精多糖抗神经细胞凋亡实验分组: ⑴正常对照组:神经细胞正常培养6d;⑵凋亡诱导组:神经细胞正常培养4d后,再缺氧12h,复氧培养48h;⑶缺氧前加黄精多糖干预组:神经细胞正常培养4d后加入终浓度为:①500μg/ml的黄精多糖;②1mg/ml的黄精多糖;③1.5mg/ml的黄精多糖;预处理10h,然后缺氧12h复氧培养48h组;⑷缺氧后加黄精多糖干预组:神经细胞正常培养4d后进行缺氧培养12h,然后加入终浓度为:①500μg/ml的黄精多糖;②1mg/ml的黄精多糖;③1.5mg/ml的黄精多糖;再复氧培养48h组;6、采用Hoechst 33342荧光染色法计数各组神经细胞凋亡率;7、采用DNA琼脂糖凝胶电泳法检测各组凋亡的神经细胞DNA条带;8、采用Annexin V/PI双染色流式细胞测定神经细胞凋亡和坏死;9、采用免疫组化染色法测定神经细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和凋亡蛋白Bax及caspase-3的表达率。结果:1、新生大鼠大脑皮层神经细胞体外无血清培养6d,神经细胞含量为93.36%±1.02%。2、1mg/ml-6mg/ml的黄精多糖对体外无血清培养的新生大鼠大脑皮层神经细胞无明显毒性作用,神经细胞死亡率为7.96%±0.82%-8.42%±0.42%,正常对照组为7.96%±1.25%(P>0.05)。黄精多糖浓度达7mg/ml-20mg/ml时,则表现出明显的毒性作用,神经细胞死亡率为9.72%±

关键词：新生大鼠大脑皮层神经细胞原代培养缺氧复氧黄精多糖凋亡坏死 Bcl-2 Bax Caspase-3 Hoechst 33342 Annexin V/PI

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黄精防治神经系统类疾病的研究进展

中药药理与临床 2021年第6期37卷 236-240页

作者：钱红月肖移生江西中医药大学中医学院南昌330004

我省多地盛产黄精,其药理作用较多,本文综合了近年来国内外有关黄精防治神经系统类疾病的研究报道,对其治疗中枢神经系统疾病的神经保护作用及机制进行分析、归纳和总结,得出黄精可有效改善神经功能症状,提高学习记忆能力,具有清除自由... 详细信息

我省多地盛产黄精,其药理作用较多,本文综合了近年来国内外有关黄精防治神经系统类疾病的研究报道,对其治疗中枢神经系统疾病的神经保护作用及机制进行分析、归纳和总结,得出黄精可有效改善神经功能症状,提高学习记忆能力,具有清除自由基、抗氧化,抗凋亡,降低脑内Aβ含量及减轻Tau蛋白过磷酸化,改善脑内神经递质,恢复脑血流,调控信号通路等重要功能。黄精在防治阿尔茨海默病、帕金森病、脑血管损伤类疾病、抑郁及衰老等研究中显示出较好的药效,这表明其具有较好的神经保护作用,值得深入研究、开发。本综合以期为临床研发疗效确切的神经保护功能中药提供依据和参考,并为扩大我省黄精产量提供理论支持。

关键词：黄精神经系统类疾病神经保护研究进展

黄精丸对学习记忆障碍小鼠海马神经元自噬的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 19-26页

作者：廖可欣姜劼琳肖移生江西中医药大学中医学院南昌330004

目的:观察黄精丸(CHP)对D-半乳糖联合东莨菪碱所致学习记忆障碍小鼠海马神经自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法:将90只8周龄雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组、CHP低、中、高剂量组。除正常组外,前3周各组小鼠每日... 详细信息

目的:观察黄精丸(CHP)对D-半乳糖联合东莨菪碱所致学习记忆障碍小鼠海马神经自噬的影响,探讨其可能的作用机制。方法:将90只8周龄雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组、CHP低、中、高剂量组。除正常组外,前3周各组小鼠每日颈背部皮下注射1次0.14 g·kg^(-1)D-半乳糖、后2周改为每日腹腔注射1次2 mg·kg^(-1)东莨菪碱复制学习记忆障碍小鼠以模拟阿尔茨海默病(AD)。造模开始1周后,多奈哌齐组给予0.65 mg·kg^(-1)多奈哌齐,CHP低、中、高剂量组分别给予1.25、2.5、7.5 g·kg^(-1)CHP提取液,模型组给予生理盐水0.5 mL,每天灌胃1次,连续4周。以水迷宫装置观察各小鼠行为学改变,尼氏染色分析各小鼠海马形态学变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各小鼠海马组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、自噬效应蛋白-1(Beclin-1)及泛素结合蛋白p62(p62)的mRNA表达水平差异,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠海马组织mTOR、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、微管相关蛋白1轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、p62的蛋白表达水平差异,免疫组化探测各组小鼠海马神经元Beclin-1阳性表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠学习记忆障碍、痴呆症状明显,其海马结构紊乱、神经元数量减少(P<0.01),mTOR、Beclin-1的mRNA及蛋白表达水平均显著降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低,p62的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,多奈哌齐组及CHP各组小鼠痴呆症状及学习记忆好转,海马神经结构紊乱有所改善、神经元数量增加(P<0.05,P<0.01),mTOR、Beclin-1的mRNA及蛋白表达水平均明显升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ明显升高,p62的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:CHP能促进海马神经元自噬发挥治疗AD的作用,其机制可能与激活mTOR信号通路有关。

关键词：黄精丸阿尔茨海默病学习记忆障碍自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路

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江西黄精道地性考证

中药材 2023年第7期46卷 1807-1811页

作者：曾雯君董琦肖移生江西中医药大学科技学院江西南昌330004 江西中医药大学中医学院江西南昌330004

黄精为经典的药食两用滋补中药之一,我国多花黄精、黄精、滇黄精三大药用品种资源分布广泛,但不同品种的适宜生长区各有不同,其产地具有道地性。江西自古盛产黄精,但缺乏其道地考证研究。该文从古代江西黄精的名称、产地变迁与分布、形... 详细信息

黄精为经典的药食两用滋补中药之一,我国多花黄精、黄精、滇黄精三大药用品种资源分布广泛,但不同品种的适宜生长区各有不同,其产地具有道地性。江西自古盛产黄精,但缺乏其道地考证研究。该文从古代江西黄精的名称、产地变迁与分布、形态特点、生长环境、炮制加工、应用等记载对江西黄精的道地性进行考证。考证表明,江西黄精的记载最早可追溯到宋代的洪州黄精,其在古代江西各地州府均有分布;古籍之洪州黄精即为现代的多花黄精品种,清代以来多花黄精成为我国的黄精药用主流品种,故江西的多花黄精为我国黄精药用、食用作出了积极贡献,由此得出江西为多花黄精道地产区之一。

关键词：江西黄精道地性考证

补肾活血类中药调控Wnt信号通路防治老年痴呆的研究进展

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中国现代应用药学 2024年第17期41卷 2438-2446页

作者：廖可欣董琦侯吉华肖移生江西中医药大学中医学院南昌330004

Wnt信号通路有Wnt/β-catenin经典通路、Wnt/PCP与Wnt/Ca^(2+)非经典通路,其可调控神经元生长、发育、成熟、分化和增殖等多个过程,与老年痴呆的发生、发展及防治均有着密切联系。目前已有许多关于中药调控Wnt信号通路防治老年痴呆的研... 详细信息

Wnt信号通路有Wnt/β-catenin经典通路、Wnt/PCP与Wnt/Ca^(2+)非经典通路,其可调控神经元生长、发育、成熟、分化和增殖等多个过程,与老年痴呆的发生、发展及防治均有着密切联系。目前已有许多关于中药调控Wnt信号通路防治老年痴呆的研究报道,但尚缺乏总结性分析。作者综合了近年来国内外文献关于淫羊藿、人参、姜黄、西红花、丹参、琥珀等有效成分及黑逍遥散、复方地黄、大补元煎、黄精丸、养血清脑颗粒等中药复方防治阿尔茨海默病、脑血管性痴呆等老年痴呆的研究成果,分析发现这些中药单体或是中药复方均具补肾或活血功效,且均可激活老年痴呆动物脑内Wnt相关信号通路,通过多靶点防治阿尔茨海默病、脑血管性痴呆。因此,调控中枢神经Wnt信号通路可作为当前中药抗老年痴呆的重要策略之一,其研发可围绕具有此类功效的中药或复方进行重点筛选。

关键词：中药 Wnt信号通路老年痴呆研究进展

基于Wnt信号通路的中药治疗脑缺血/再灌注损伤研究进展

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中国药理学通报 2022年第9期38卷 1297-1302页

作者：廖可欣肖爱娇肖移生江西中医药大学中医学院江西南昌330004

Wnt信号通路可以调控神经干细胞增殖与分化、神经细胞生长与发育,与缺血性脑卒中后的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)治疗机制有着密切联系。研究表明,一些具有补肾滋肝、益气养阴、活血行气、祛瘀化痰... 详细信息

Wnt信号通路可以调控神经干细胞增殖与分化、神经细胞生长与发育,与缺血性脑卒中后的脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)治疗机制有着密切联系。研究表明,一些具有补肾滋肝、益气养阴、活血行气、祛瘀化痰等功效的单味中药及中药复方能激活脑内Wnt信号通路发挥治疗CIRI作用,其中医本质是针对CIRI的肝肾阴虚、气血衰少、血瘀痰毒核心病机进行辨证施治。该文总结了枸杞、山茱萸、姜黄、丹参等单味中药及脑络欣通、丹龙醒脑方、益气活血方、补肾生髓方、黄精丸等中药复方通过调控脑内Wnt信号通路治疗CIRI的研究结果,并分析得出中药补肾生髓、益气填精其现代医学实质与激活Wnt信号通路后促进机体脑血管新生与重塑、刺激脑内特定区域神经干细胞增殖分化有着密切相关性,活血祛瘀、化痰清毒则与激活Wnt信号通路后改善脑部血液供应,发挥抗炎、抗自由基、抗氧化等功能有关。

关键词： Wnt信号通路中药治疗脑缺血/再灌注损伤研究进展

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黄精地龙方抗老年痴呆小鼠的研究

中药药理与临床 2013年第2期29卷 152-154页

作者：肖移生曾元凤徐玥璟李青江西中医学院基础医学院南昌330004 江西省人民医院南昌330006

目的:探讨黄精地龙方对老年痴呆小鼠的学习记忆及脑组织酶学指标的影响。方法:采用颈背部皮下注射1%D-半乳糖复制小鼠老年痴呆(AD)模型,再用黄精地龙组方浓缩提取液(2～8g/kg)灌胃AD小鼠,观察该组方对小鼠学习记忆能力、脑组织SOD、MDA... 详细信息

目的:探讨黄精地龙方对老年痴呆小鼠的学习记忆及脑组织酶学指标的影响。方法:采用颈背部皮下注射1%D-半乳糖复制小鼠老年痴呆(AD)模型,再用黄精地龙组方浓缩提取液(2～8g/kg)灌胃AD小鼠,观察该组方对小鼠学习记忆能力、脑组织SOD、MDA、GSH-Px生化指标的影响。结果:黄精地龙组方在2～8g/kg剂量范围内能明显增强AD小鼠学习记忆能力,减少学习记忆错误次数,增加脑组织的SOD、GSH-Px活性,减少MDA含量。结论:黄精地龙方可能对老年痴呆有一定治疗作用。

关键词：黄精地龙方老年痴呆学习记忆抗氧化

黄精地龙提取液对老年痴呆大鼠脑内烟碱型乙酰胆碱受体的影响

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中国实验方剂学杂志 2017年第14期23卷 140-145页

作者：肖移生高萌侯吉华江西中医药大学基础医学院(生命科学学院) 南昌330004

目的:探讨黄精地龙提取液(EPP)对老年痴呆大鼠脑内α3和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α3,α7-nAChR)阳性神经元数量、蛋白及mRNA表达的影响。方法:SD大鼠40只,随机均分为正常组,模型组,脑复康(阳性药物,0.6 g·kg^(-1)·d^(-1))组,EPP(相当... 详细信息

目的:探讨黄精地龙提取液(EPP)对老年痴呆大鼠脑内α3和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α3,α7-nAChR)阳性神经元数量、蛋白及mRNA表达的影响。方法:SD大鼠40只,随机均分为正常组,模型组,脑复康(阳性药物,0.6 g·kg^(-1)·d^(-1))组,EPP(相当生药量4 g·kg^(-1)·d^(-1))组。给大鼠颈背部皮下注射1%D-半乳糖(5 m L·kg^(-1)·d^(-1),连续3周)后,腹腔注射东莨菪碱(2 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续后2周)复制大鼠老年痴呆模型;造模1周后同时对脑复康组及EPP组大鼠每天灌胃给相应实验药物,正常组及模型组大鼠灌胃给生理盐水1 mL。实验结束,处死各组大鼠,取出脑组织,一半置于10%中性甲醛液浸泡固定待组织切片检查,另一半置于冰上匀浆,进行mRNA及蛋白提取;运用尼氏染色、免疫组化观察各大鼠大脑皮层第一躯体感觉区(S1Tr)和海马CA1与CA3区的阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各大鼠大脑内的α3和α7-nAChR mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量显著减少,大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.01);EPP能增加痴呆大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量,能升高痴呆大鼠大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白的表达水平,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:EPP能保护大脑认知学习记忆有关重要区的神经细胞,同时触发α3和α7-n AChR受体效应,提高中枢乙酰胆碱(ACh)含量,进而升高老年痴呆大鼠中枢胆碱能系统活性。

关键词：黄精地龙提取液老年痴呆大鼠大脑皮层海马神经元烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)

缺血/缺氧性神经细胞凋亡与中药黄精药理作用研究进展

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江西医学院学报 2005年第2期45卷 103-104,107页

作者：肖移生江西医学院研究生部 2002级江西南昌330006

缺血/缺氧性脑损伤常见于脑中风、癫、老年性痴呆等脑疾病,其病理损害主要是缺血/缺氧所引发的损伤,即急性期导致神经元坏死及慢性期导致神经元凋亡.缺血性脑损伤时神经细胞凋亡和坏死并存,共同参与梗塞区的形成;凋亡主要位于半暗区,坏... 详细信息

缺血/缺氧性脑损伤常见于脑中风、癫、老年性痴呆等脑疾病,其病理损害主要是缺血/缺氧所引发的损伤,即急性期导致神经元坏死及慢性期导致神经元凋亡.缺血性脑损伤时神经细胞凋亡和坏死并存,共同参与梗塞区的形成;凋亡主要位于半暗区,坏死发生于缺血中心区,抑制半暗区向缺血中心区的发展是缺血性脑血管病治疗的关键,即抑制神经细胞凋亡的发生有利于缺血性脑血管疾病的治疗[1].因此,选择合理、有效的药物抗神经细胞凋亡疗法将成为脑中风等脑血管疾病的新型疗法,也为血管性老年痴呆、癫等脑病的防治提供新思路.……

关键词：缺血缺氧神经细胞凋亡黄精药理作用