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基于转录组挖掘‘云香’水仙萜类合成基因及NaIDI的克隆

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西北植物学报 2019年第8期39卷 1379-1388页

作者：李琳肖瑶宇李科李欢陈晓静福建农林大学园艺学院福州350002 福建农林大学园艺植物遗传育种研究所福州350002 厦门大学环境与生态学院福建厦门361102

为深入挖掘中国水仙转录组中萜类合成相关基因,了解中国水仙萜类代谢途径和分子调控机制,该研究以‘云香’水仙为材料,在其盛花期花瓣与副冠转录组测序的基础上,筛选已注释的萜类合成途径基因并利用NCBI blastn进行再注释,通过对部分候... 详细信息

为深入挖掘中国水仙转录组中萜类合成相关基因,了解中国水仙萜类代谢途径和分子调控机制,该研究以‘云香’水仙为材料,在其盛花期花瓣与副冠转录组测序的基础上,筛选已注释的萜类合成途径基因并利用NCBI blastn进行再注释,通过对部分候选基因的表达量与生物信息分析进一步筛选出代表基因,采用RT-PCR技术克隆了水仙异戊烯基焦磷酸异构酶基因NaIDI,并对其蛋白序列与特异性表达进行分析。结果表明:(1)Blast比对筛选得到52个与萜类合成上游途径相关的Unigenes,二次筛选获得11个显著差异表达的代表基因。(2)NaIDI基因开放阅读框(ORF)长度为858 bp,编码285个氨基酸,其氨基酸序列与‘金盏银台’水仙相似度97.19%;亚细胞定位预测显示该基因定位在叶绿体;系统进化分析表明其与芦笋亲缘关系比较近。(3)实时荧光定量分析结果表明,NaIDI基因在水仙开花的不同时期和不同组织器官中差异表达显著,且在盛花期时副冠中的表达量最高,与中国水仙挥发性萜类化合物在开花不同时期和不同组织器官中的表达规律一致,表明NaIDI在萜类代谢中发挥着一定作用。

关键词： '云香’水仙转录组萜类代谢异戊烯基焦磷酸异构酶

基于转录组的‘黄花2号’水仙ARF基因家族分析

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应用与环境生物学报 2019年第3期25卷 687-694页

作者：李全超刘洋肖瑶宇李琳杨征帆陈晓静福建农林大学园艺学院

生长素反应因子(Auxin response factors,ARFs)在植物生长发育过程调节生长素响应基因表达中发挥着重要的作用.为了解多花水仙ARF家族,基于转录组数据,通过NR、NT、Swiss-Prot和PFAM 4个数据库、NCBI网站和在线软件SMART的注释筛选,利用... 详细信息

生长素反应因子(Auxin response factors,ARFs)在植物生长发育过程调节生长素响应基因表达中发挥着重要的作用.为了解多花水仙ARF家族,基于转录组数据,通过NR、NT、Swiss-Prot和PFAM 4个数据库、NCBI网站和在线软件SMART的注释筛选,利用ExPASy-ProtParam tool、SOPMA、Prot Comp、MEME、MAGA和Heml软件进行氨基酸理化性质、蛋白二级结构、亚细胞定位、保守基序、系统进化树和小鳞茎萌发不同时期的表达模式分析.共筛选得到21个ARF家族基因,生物信息学分析12个全长基因蛋白长度在193-1 096 aa之间,预测的分子量(Mr)为20.46-122.2,等电点为5.19-7.97,全部为不稳定的亲水蛋白,亚细胞定位预测均位于细胞核中.进化树和基序分析表明,21个NtARF蛋白分为3个大组,GlassⅢ进一步被分为3个亚组,分支相近的ARF转录因子具有相同或相近的基序. NtARF8、NtARF13、NtARF15、NtARF17和NtARF21都展现较高的表达模式,可能是通过正向调节生长素的含量来促进小鳞茎的萌发.本研究表明,NtARF家族可能在多花水仙扦插繁殖过程中发挥着重要作用,结果可为将来深入研究多花水仙ARF基因家族的功能奠定基础.

关键词：水仙转录组测序 ARF家族生物信息学分析表达分析

‘云香’水仙NtNAC1基因的克隆及功能分析

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热带作物学报 2019年第5期40卷 913-921页

作者：肖瑶宇李琳李全超刘洋陈晓静福建农林大学园艺植物遗传育种研究所福建福州350002

本研究利用RT-PCR技术从‘云香’水仙的根中克隆得到了NtNAC1基因,并通过qRT-PCR技术分析了该基因的时空表达模式以及在逆境和逆境相关激素处理下的表达变化,结合分析过表达该基因的转基因烟草植株的表现等解析了该基因的功能。结果显示... 详细信息

本研究利用RT-PCR技术从‘云香’水仙的根中克隆得到了NtNAC1基因,并通过qRT-PCR技术分析了该基因的时空表达模式以及在逆境和逆境相关激素处理下的表达变化,结合分析过表达该基因的转基因烟草植株的表现等解析了该基因的功能。结果显示:NtNAC1基因全长1083 bp,其ORF为918 bp,编码306个氨基酸,N端含有NAM保守结构域,聚分在SNAC1亚组,与香蕉MusaSNAC1、小麦TaNAC47亲缘关系较近。实时荧光定量分析显示,NtNAC1的表达水平随花器官花瓣和副冠的发育呈先上升后下降趋势,始花期达到峰值;NtNAC1在根和叶中高表达,受ABA、MeJA、SA、H_2O_2、NaCl、PEG诱导上调,推测该基因可能参与‘云香’水仙花器官的形态建成及响应非生物胁迫。进一步构建表达载体转化烟草,获得9株转基因植株。在高盐和干旱胁迫处理下,转基因植株根系发达、长势更好、存活率高,表明水仙NtNAC1过表达能提高烟草对高盐、干旱的耐受性,在抗逆中起正向调控作用,可作为提高水仙抗性的优良遗传基因资源。

关键词： '云香’水仙 NAC转录因子非生物胁迫功能分析

‘云香’水仙NtNAC2基因的克隆及功能分析

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西北植物学报 2018年第11期38卷 1975-1985页

作者：肖瑶宇刘洋李全超李琳陈晓静福建农林大学园艺学院福州350002

该研究选用多花水仙新品种‘云香’为材料,采用RT-PCR技术克隆得到NtNAC2,其开放阅读框为936bp,编码311个氨基酸。生物信息学分析显示,NtNAC2在N端含有NAM保守结构域,与单子叶植物芦笋、番红花和石斛等具有较近的进化关系。实时荧光定... 详细信息

该研究选用多花水仙新品种‘云香’为材料,采用RT-PCR技术克隆得到NtNAC2,其开放阅读框为936bp,编码311个氨基酸。生物信息学分析显示,NtNAC2在N端含有NAM保守结构域,与单子叶植物芦笋、番红花和石斛等具有较近的进化关系。实时荧光定量检测显示,花瓣和副冠中NtNAC2基因的表达量随花器官发育逐渐上升,衰败期达到峰值;在ABA、MeJA、SA、H_2O_2、50℃、NaCl和PEG胁迫处理下,水仙根和叶中NtNAC2基因的表达量上调,且表现出时空表达特异性。为进一步鉴定其功能,构建植物表达载体转化烟草,获得10株转基因烟草,经半定量RT-PCR检测NtNAC2在转基因植株中过表达。高盐和干旱胁迫处理后转基因植株根长为野生型的2～3倍,叶片失水率低于30%,存活率高于60%。研究表明,‘云香’水仙NtNAC2的过量表达提高了转基因烟草的抗旱性和耐盐性,可作为水仙抗逆分子育种的重要候选基因。

关键词： '云香’水仙 NAC转录因子非生物胁迫功能分析

盐胁迫对多花水仙部分生理特性和叶绿素荧光参数的影响

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福建农林大学学报（自然科学版） 2019年第2期48卷 161-167页

作者：李全超刘洋肖瑶宇李琳胡邵彬陈晓静福建农林大学园艺学院福建农林大学园艺植物遗传育种研究所福建福州350002

以‘云香’、‘黄花2号’、白花Ⅰ号和白花Ⅱ号4种多花水仙为材料,测定盐胁迫(NaCl浓度分别为0、50、100、150、200和250 mmol·L^(-1))7 d后水仙叶片叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性及叶绿素荧光参数的变化,研究多... 详细信息

以‘云香’、‘黄花2号’、白花Ⅰ号和白花Ⅱ号4种多花水仙为材料,测定盐胁迫(NaCl浓度分别为0、50、100、150、200和250 mmol·L^(-1))7 d后水仙叶片叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性及叶绿素荧光参数的变化,研究多花水仙的耐盐性.结果表明,盐胁迫下,4种水仙叶片的叶绿素含量均有所下降,当NaCl浓度增大到100 mmol·L^(-1)时,白花Ⅰ号和白花Ⅱ号的叶绿素含量比‘云香’和‘黄花2号’下降得更为显著. MDA含量随着盐浓度的增大而上升,白花Ⅰ号和白花Ⅱ号的MDA含量明显高于‘云香’和‘黄花2号’.POD活性随着盐浓度的增大整体有所上升,但‘云香’的POD活性呈先上升后下降的趋势.盐胁迫下,4种水仙的最大荧光产量(Fm)、潜在光化学效率(Fv/Fo)、最大光化学效率(Fv/Fm)、有效光化学效率(Fv′/Fm′)和光化学猝灭系数(qP)下降,初始荧光产量(Fo)上升;随着盐浓度的增大,白花Ⅰ号和白花Ⅱ号各种叶绿素荧光参数的变化比‘云香’和‘黄花2号’更加显著.总之,随着盐浓度的增大,4种水仙叶片叶绿素荧光参数的变化幅度明显小于叶绿素含量、MDA含量和POD活性的变化,表明短期盐胁迫对4种水仙造成一定程度的损伤,但没有对光系统造成不可逆的破坏,说明水仙具备一定的抗盐性.

关键词：多花水仙盐胁迫叶绿素含量过氧化物酶活性丙二醛含量叶绿素荧光参数

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5种水仙属植物的核型分析

福建农林大学学报（自然科学版） 2020年第1期49卷 35-39页

作者：刘洋李全超肖瑶宇李琳何炎森陈晓静福建农林大学园艺学院福建福州350002 福建省农业科学院亚热带农业研究所福建漳州363000

采用常规压片方法,对5种国外引进的水仙体细胞染色体数目和核型进行了分析.结果表明:5种水仙材料中有二倍体1种,三倍体和四倍体各2种,核型公式分别为2n=4x=28=8m+16sm+4st(‘苏娅’)、2n=3x=30=7m+17sm+5st+1t(‘小燕子’)、2n=3x=21=4m... 详细信息

采用常规压片方法,对5种国外引进的水仙体细胞染色体数目和核型进行了分析.结果表明:5种水仙材料中有二倍体1种,三倍体和四倍体各2种,核型公式分别为2n=4x=28=8m+16sm+4st(‘苏娅’)、2n=3x=30=7m+17sm+5st+1t(‘小燕子’)、2n=3x=21=4m+13sm+4st(‘普韦布洛’)、2n=4x=28=8m+15sm+4st+1t(‘胡德山’)和2n=2x=17=1m+9sm+7st(SAT)(‘温斯特丘吉尔’).5种水仙染色体数目和核型分析结果不仅可以为其分类提供细胞学依据,同时也为利用这些品种资源选育新品种提供指导.

关键词：水仙染色体核型

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多花水仙资源植物学性状与生物学特性研究

黑龙江农业科学 2019年第8期 81-87页

作者：刘洋肖瑶宇李全超李琳吴舒捷陈晓静福建农林大学园艺学院

为选育水仙花新品种,本研究共选择15个多花水仙资源材料,于2017年秋季在漳州进行露地栽培,观测其植物学性状及生物学特性。结果表明:15个水仙资源间的叶长、叶宽、花葶长度、每花葶小花数、小花直径、副冠直径、副冠杯深以及花药长度等... 详细信息

为选育水仙花新品种,本研究共选择15个多花水仙资源材料,于2017年秋季在漳州进行露地栽培,观测其植物学性状及生物学特性。结果表明:15个水仙资源间的叶长、叶宽、花葶长度、每花葶小花数、小花直径、副冠直径、副冠杯深以及花药长度等有明显差异。萌芽期为10月底至12月底,抽葶期为11月底至翌年1月底,花期从12月初持续到第二年2月底,盛花期延续81d,开花持续天数27~35d。根据花色可分为4大类型,第一类为两色花类型,含7个资源,即Chinese Sacred Lily、Erlicheer、Galilee、Sol、Winter Sun、金三角、云香;第二类为白色花类型,含3个资源,即Znbal、Ziva、崇明(白);第三类为黄色花类型,含3个资源,即Golden rain、Grand SD’or、彩旺;第四类为其他花色类型,仅绿状元1种。按花期可以分为早、中、晚3种类型。通过观察比较,明确了15个资源的植物学性状和生物学特性。

关键词：多花水仙种质资源物候期观赏性状

中国共产党培养社会主义事业接班人的历史经验——兼论苏联社会主义事业接班人断代的教训

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社会主义核心价值观研究 2025年

作者：陈明凡肖瑶清华大学高校德育研究中心清华大学马克思主义学院

培养社会主义事业接班人是确保中国共产党和人民事业发展后继有人的根本性、长远性大计。中国共产党为培养社会主义事业接班人积淀了丰富的历史经验,如筑牢信仰之基,以马克思主义铸魂育人;坚持敢于斗争,打好应对西方“和平演变”战略的... 详细信息

培养社会主义事业接班人是确保中国共产党和人民事业发展后继有人的根本性、长远性大计。中国共产党为培养社会主义事业接班人积淀了丰富的历史经验,如筑牢信仰之基,以马克思主义铸魂育人;坚持敢于斗争,打好应对西方“和平演变”战略的主动仗;扎根实践之壤,以沸腾的社会实践固本培元;把稳方向之舵,以党的领导统率育人全过程。中国共产党培养社会主义事业接班人的成功实践与苏联社会主义事业接班人断代的悲剧形成鲜明对比,比较剖析二者不同命运的原因并总结经验教训,对于在新时代培养能够劈波斩浪、勇往直前的社会主义事业接班人具有重要的现实意义。

关键词：中国共产党社会主义事业接班人铸魂育人社会实践党的领导

异甘草素改善2型糖尿病所致异常内质网应激机制研究

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药学学报 2025年第1期 130-140页

作者：赖恺怡丁文文张佳瑜杨晓雪高文博肖瑶刘颖北京中医药大学生命科学学院北京中医药大学中药学院

异甘草素(isoliquiritigenin, ISL)是甘草中提取的查尔酮类化合物,具有抗糖尿病、抗癌及抗氧化等多种生物活性。课题组前期研究发现, ISL可降低2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠的血糖水平,改善T2DM引起的糖脂代谢和能量... 详细信息

异甘草素(isoliquiritigenin, ISL)是甘草中提取的查尔酮类化合物,具有抗糖尿病、抗癌及抗氧化等多种生物活性。课题组前期研究发现, ISL可降低2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠的血糖水平,改善T2DM引起的糖脂代谢和能量代谢紊乱,本文拟进一步探究ISL缓解T2DM所致异常内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)的效果并解析其分子机制。体内实验采用8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠,通过饲喂高脂高糖饮食结合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)构建T2DM动物模型,动物福利和实验过程均遵循北京中医药大学实验动物伦理委员会规定(批准号:BUCM-2022021503-1134);体外实验采用人肝癌HepG2细胞,以衣霉素(tunicamycin, TM)诱导ERS细胞模型。利用转录组测序分析ISL对T2DM小鼠肝脏基因转录水平的影响;采用实时荧光定量PCR (real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测ISL对ERS关键基因的调控作用;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blot, WB)以及免疫荧光技术检测ISL对ERS关键蛋白的调控作用。实验结果表明:ISL可显著下调ERS关键基因的表达,降低葡萄糖调节蛋白78 (glucose-regulated protein 78, GRP78)的水平,并抑制蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)的磷酸化,从而缓解T2DM所致异常ERS;同时, ISL可提高胰岛素受体底物(insulin receptor substrate, IRS) 1和IRS2的蛋白水平,促进蛋白激酶B (protein kinase B, Akt)的磷酸化,改善胰岛素敏感性。综上, ISL可通过改善ERS和胰岛素敏感性,缓解T2DM相关症状。

关键词：异甘草素 2型糖尿病内质网应激胰岛素敏感性糖代谢

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