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蛇床子素上调miRNA-107减少APP_(595/596)转基因神经元Aβ的生成

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中国药理学通报 2017年第8期33卷 1079-1085页

作者：肖洪贺教亚男闫宇辉李红艳杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的考察蛇床子素(osthole,Ost)对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元的保护作用,并探讨其作用机制。方法原代培养小鼠神经元,转染APP_(595/596)基因构建AD细胞模型;采用CCK-8法检测神经元存活率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydro... 详细信息

目的考察蛇床子素(osthole,Ost)对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元的保护作用,并探讨其作用机制。方法原代培养小鼠神经元,转染APP_(595/596)基因构建AD细胞模型;采用CCK-8法检测神经元存活率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量,评价神经元的损伤程度;TUNEL染色法检测神经元凋亡;免疫荧光化学法检测β-淀粉样蛋白(beta-amyloid peptide,Aβ)和β-分泌酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)的蛋白表达;RT-PCR检测miRNA-107的表达。结果与模型组比较,Ost干预组神经元的存活率明显升高,LDH释放量明显降低,凋亡率明显降低,Aβ和BACE1的蛋白表达均明显降低,而miRNA-107的表达明显升高。结论 Ost对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元具有良好的保护作用,其机制可能与上调miRNA-107表达,抑制BACE1表达,进而减少Aβ生成有关。

关键词：独活蛇床子素阿尔茨海默病神经保护 β-淀粉样蛋白 miRNA-107

淫羊藿次苷Ⅱ改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的研究

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长春中医药大学学报 2023年第12期39卷 1339-1345页

作者：闻彩名肖洪贺田雨李贺赵宇萌田晋明杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116000

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的作用。方法将30只7月龄APP/PS1小鼠随机分为模型对照组和ICSⅡ给药组,每组15只;另取15只同龄C57BL/6小鼠作为空白对照组。ICSⅡ给药组灌胃10 mg·kg^(-1)ICSⅡ,空白对照... 详细信息

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的作用。方法将30只7月龄APP/PS1小鼠随机分为模型对照组和ICSⅡ给药组,每组15只;另取15只同龄C57BL/6小鼠作为空白对照组。ICSⅡ给药组灌胃10 mg·kg^(-1)ICSⅡ,空白对照组和模型对照组给予等量羧甲基纤维素钠(CMC-Na),每天1次,连续28 d。给药第20天,采用筑巢实验检测小鼠日常生活能力,然后采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能;苏木素-伊红(H&E)染色法及尼氏(Nissl)染色法检测小鼠海马皮层、CA3区和DG区脑组织病理损伤情况;免疫荧光染色法检测小鼠皮层及海马区Aβ淀粉样蛋白沉积情况、星形胶质细胞和小胶质细胞激活情况:分别采用TBA法、羟胺法检测小鼠脑内的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与模型组比较,ICSⅡ能明显改善APP/PS1小鼠日常生活能力和认知功能,减轻脑组织病理损伤、增加神经元细胞数量,减少Aβ淀粉样蛋白沉积,抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的过度活化,提高脑内SOD活性,降低脑内MDA的水平。结论ICSⅡ能通过调节多种病理机制改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能。

关键词：阿尔茨海默病淫羊藿次苷Ⅱ 认知功能

人参皂苷Rg1通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制H_(2)O_(2)细胞氧化应激损伤的研究

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现代中药研究与实践 2022年第1期36卷 26-31页

作者：赵宇萌陈吉聪肖洪贺田雨李贺田晋明杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的探究人参皂苷Rg1对H_(2)O_(2)诱导的N2a细胞的保护作用及机制。方法实验分为对照组、模型组、给药组,通过500μmol/L H_(2)O_(2)孵育5 h构建体外细胞损伤模型,给药组给予50μmol/L Rg1。采用CCK-8法检测细胞存活率,运用Hoechst 3325... 详细信息

目的探究人参皂苷Rg1对H_(2)O_(2)诱导的N2a细胞的保护作用及机制。方法实验分为对照组、模型组、给药组,通过500μmol/L H_(2)O_(2)孵育5 h构建体外细胞损伤模型,给药组给予50μmol/L Rg1。采用CCK-8法检测细胞存活率,运用Hoechst 33258染色法及免疫荧光化学法检测细胞凋亡率,选用试剂盒检测各组细胞LDH、SOD和MDA水平,利用免疫荧光化学法和Western Blot法检测Nrf2和HO-1蛋白的表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞的存活率降低(P<0.01),凋亡率、LDH、MDA水平升高(P<0.01),SOD水平和Nrf2、HO-1蛋白表达量下降(P<0.05或P<0.01);而给予50μmol/L Rg1预保护24 h后,存活率明显升高(P<0.05),凋亡率、LDH、MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01),SOD水平和Nrf2、HO-1蛋白表达量明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可通过激活Nrf2/HO-1信号通路,减轻H_(2)O_(2)诱导的N2a细胞的氧化应激损伤,发挥神经保护作用。

关键词：人参皂苷Rg1 阿尔茨海默病 Nrf2/HO-1信号通路神经保护

淫羊藿次苷Ⅱ对H_(2)O_(2)诱导N2a细胞损伤的保护作用研究

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现代中药研究与实践 2022年第2期36卷 38-43页

作者：田雨肖洪贺陈吉聪赵宇萌李贺田晋明杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的探究淫羊藿次苷Ⅱ对H_(2)O_(2)损伤的小鼠神经瘤母细胞(N2a)的保护作用及其作用机制。方法构建H_(2)O_(2)-N2a细胞模型,使用CCK-8法检测细胞存活率;微板法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量;TBA法检测丙二醛(Malomdia... 详细信息

目的探究淫羊藿次苷Ⅱ对H_(2)O_(2)损伤的小鼠神经瘤母细胞(N2a)的保护作用及其作用机制。方法构建H_(2)O_(2)-N2a细胞模型,使用CCK-8法检测细胞存活率;微板法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量;TBA法检测丙二醛(Malomdialdehvde,MDA)含量;羟胺法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况;免疫荧光化学法检测Caspase 3的表达情况;Western Blot法检测Bax/bcl-2和Caspase 3蛋白的表达情况。结果成功建立H_(2)O_(2)-N2a细胞模型;与对照组比较,模型组细胞存活率下降,凋亡率上升,LDH、MDA水平升高,SOD活性降低,Bax/bcl-2、Caspase 3蛋白表达量上升(P<0.01)。而给予0.25μmol/L ICSⅡ预保护24 h后,与模型组比较,给药组细胞存活率上升,凋亡率下降,LDH、MDA水平下降,SOD活性升高,Bax/bcl-2、Caspase 3蛋白表达量下降(P<0.01或P<0.05)。结论淫羊藿次苷Ⅱ能抑制Caspase 3/Bax/bcl-2信号通路减少H_(2)O_(2)诱导的N2a细胞的凋亡。

关键词：淫羊藿次苷Ⅱ 细胞凋亡神经瘤母细胞 Caspase 3/Bax/bcl-2信号通路

参枣健脑口服液促进神经干细胞向神经元分化的作用机制研究

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现代中药研究与实践 2022年第3期36卷 25-30页

作者：李贺肖洪贺陈吉聪赵宇萌田雨田晋明杨静娴辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的探究参枣健脑口服液(SZJN)对神经干细胞(NSCs)分化的影响及其作用机制。方法原代培养海马NSCs,构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型。CCK-8法检测AD细胞模型(APP-NSCs)细胞活力,微量酶标法检测乳酸脱氢酶释放量,神经球形成实验检测APP-NSC... 详细信息

目的探究参枣健脑口服液(SZJN)对神经干细胞(NSCs)分化的影响及其作用机制。方法原代培养海马NSCs,构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型。CCK-8法检测AD细胞模型(APP-NSCs)细胞活力,微量酶标法检测乳酸脱氢酶释放量,神经球形成实验检测APP-NSCs细胞增殖能力,免疫荧光染色检测APP-NSCs细胞分化情况,NSCs迁移实验检测神经元迁移距离,Western blot法检测Wnt/β-catenin通路关键蛋白的表达情况。结果SZJN能够有效提高APP-NSCs细胞活力,减轻APP-NSCs损伤,增加神经球直径和神经球数量,促进NSCs和APP-NSCs向神经元方向分化,增加NSCs和APP-NSCs神经元迁移距离,提高Wnt-3a和β-catenin蛋白表达量,促进GSK-3β磷酸化。结论SZJN可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进NSCs向神经元分化。

关键词：参枣健脑口服液阿尔茨海默病神经干细胞 Wnt/β-catenin信号通路

人参二醇对APP-SH-SY5Y细胞中Tau蛋白磷酸化及Fyn/GluN2B信号通路的影响

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中国药房 2021年第12期32卷 1485-1491页

作者：梁喜才蔺莹肖洪贺孔亮杨静娴辽宁中医药大学实验动物中心沈阳110847 辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿... 详细信息

目的:研究人参二醇(PD)对转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y(APP-SH-SY5Y)中Tau蛋白磷酸化的影响及其作用机制。方法:采用分子对接技术验证PD与非受体酪氨酸激酶Fyn的靶向性。在体外培养SH-SY5Y细胞,构建APP-SH-SY5Y细胞模型和绿色荧光蛋白(GFP)-SH-SY5Y细胞模型(对照细胞),通过检测细胞中β淀粉样蛋白(Aβ1-42)的表达来验证APP-SH-SY5Y细胞模型是否构建成功。以GFP-SH-SY5Y细胞为对照,采用CCK-8法检测5、10、20、30、40μmol/L的PD和125、250、500、1000、2000 nmol/L的PP2(Fyn抑制剂,阳性对照)作用24 h对APP-SH-SY5Y细胞存活率的影响,以确定最佳给药浓度。以APP-SH-SY5Y细胞为对象,分别检测最佳浓度PD、PP2作用24后细胞中Ca2+浓度及磷酸化Tau蛋白(p-Tau)/Tau、磷酸化非受体酪氨酸激酶Src(p-Src)/Fyn、磷酸化谷氨酸受体2B(p-GluN2B)/GluN2B比值。结果:分子模拟对接结果显示,PD可靶向结合Fyn蛋白。与GFP-SH-SY5Y细胞比较,APP-SH-SY5Y细胞中Aβ1-42蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。PD和PP2的最佳作用浓度分别为20μmol/L和500 nmol/L。20μmol/L PD、500 nmol/L PP2均可显著升高细胞的存活率,显著降低细胞中Ca2+浓度以及p-Tau/Tau、p-Src/Fyn、p-GluN2B/GluN2B比值。结论:PD可通过抑制Fyn/GluN2B信号通路来降低APP-SH-SY5Y细胞中Ca2+浓度及Tau蛋白的磷酸化水平。

关键词：人参二醇转染APP基因的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y Tau蛋白磷酸化非受体酪氨酸激酶Fyn/谷氨酸受体2B信号通路

半夏白术天麻汤有效部位对H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞损伤保护作用研究

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现代中药研究与实践 2023年第6期37卷 29-33,38页

作者：岳德琼赵晨阳崔鹤蓉张晗李昶肖洪贺李红艳辽宁中医药大学药学院辽宁大连116600 北京中医药大学中药学院北京100029

目的探讨半夏白术天麻汤(BBTD)不同有效部位对H_(2)O_(2)损伤的海马神经元(HT22)细胞的保护作用。方法采用系统溶剂法对BBTD水煎液进行萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及萃余水相部位,构建H_(2)O_(2)诱导损伤的HT22... 详细信息

目的探讨半夏白术天麻汤(BBTD)不同有效部位对H_(2)O_(2)损伤的海马神经元(HT22)细胞的保护作用。方法采用系统溶剂法对BBTD水煎液进行萃取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及萃余水相部位,构建H_(2)O_(2)诱导损伤的HT22细胞模型,使用MTT法检测细胞存活率,筛选BBTD最佳有效部位;通过试剂盒检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、线粒体膜电位,Western Blotting法检测Caspase 3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果建立H_(2)O_(2)诱导损伤的HT22细胞模型;对BBTD有效部位进行筛选,其中,0.8 mg/mL乙酸乙酯部位促进细胞存活最显著(P<0.01);模型组ROS、MDA、LDH水平升高,SOD活性降低,线粒体膜电位下降,Caspase 3、Bax/Bcl-2蛋白表达上升(P<0.01,P<0.05),给药组细胞存活率上升,ROS、MDA、LDH水平下降,SOD活性升高,线粒体膜电位上升,Caspase 3及Bax/Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01,P<0.05)。结论BBTD乙酸乙酯部位对H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞损伤具有保护作用,其机制与抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2信号通路有关。

关键词：半夏白术天麻汤神经保护抗氧化 HT22细胞

葛根汤HPLC指纹图谱及多指标成分定量分析

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中国实验方剂学杂志 2015年第15期21卷 47-52页

作者：肖洪贺闫艳乐心逸柴程芝余伯阳中国药科大学中药复方研究室南京211198 山西大学中医药现代研究中心太原030006 中国药科大学江苏省中药评价与转化重点实验室南京211198

目的:建立葛根汤HPLC-DAD指纹图谱,对14个指标成分进行定量分析,为葛根汤水提液的质量评价提供方法。方法:采用Agela Venusil MP-C18色谱柱,以乙腈-水(含0.1%甲酸)梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长207,230,254,275 nm。结... 详细信息

目的:建立葛根汤HPLC-DAD指纹图谱,对14个指标成分进行定量分析,为葛根汤水提液的质量评价提供方法。方法:采用Agela Venusil MP-C18色谱柱,以乙腈-水(含0.1%甲酸)梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,柱温30℃,检测波长207,230,254,275 nm。结果:指纹图谱中标定了38个共有峰,指认了10个共有峰,11批葛根汤水提液的指纹图谱相似度均≥0.978,不同批次间差异较小;11批葛根汤水提液中14个指标成分的含量均一、稳定,样品制备方法稳定、质量可控。结论:指纹图谱结合定量测定更能全面地反映葛根汤的质量,可作为葛根汤水提液质量控制的有效方法。

关键词：葛根汤指纹图谱高效液相色谱法质量评价原发性痛经

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中药药理学实验教学中思维导图教法探索

广东职业技术教育与研究 2021年第3期 126-128页

作者：肖洪贺杨静娴辽宁中医药大学辽宁大连116600

本文以“枳实对麻醉家兔血压和肠管的影响实验”为示范,采用思维导图教法进行中药药理学的实验教学。通过比较2个连续学年的中药学专业学生的实验课成绩和创新思维,评价思维导图教法在实验教学中的效果。结果显示,思维导图教法能够提高... 详细信息

本文以“枳实对麻醉家兔血压和肠管的影响实验”为示范,采用思维导图教法进行中药药理学的实验教学。通过比较2个连续学年的中药学专业学生的实验课成绩和创新思维,评价思维导图教法在实验教学中的效果。结果显示,思维导图教法能够提高学生实验课成绩,促进学生发散性思维,并迅速搭建知识体系,从而有效提高实验教学质量,值得在其他实验教学中推广。

关键词：思维导图中药药理学实验教学