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连作条件下玉竹根际微生物及酚酸类物质的变化

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连作条件下玉竹根际微生物及酚酸类物质的变化

作者：肖希斌湖南人文科技学院

学位级别：硕士

玉竹[Polygonatum odoratum(Mill)Druce]为百合科黄精属多年生草本植物,具有较高的药用价值和营养价值,是一种很有开发价值的药用植物。玉竹连作障碍的严重发生,直接影响了农户的收成并制约了玉竹产业的健康可持续发展。土壤微生物对土... 详细信息

玉竹[Polygonatum odoratum(Mill)Druce]为百合科黄精属多年生草本植物,具有较高的药用价值和营养价值,是一种很有开发价值的药用植物。玉竹连作障碍的严重发生,直接影响了农户的收成并制约了玉竹产业的健康可持续发展。土壤微生物对土壤质量的提升有着非常重要的作用,现少有研究涉及玉竹根际微生物及酚酸类分泌物的变化。本文主要采用盆栽试验,研究了连作条件下玉竹生长的变化。采用微生物培养法,研究了连作条件下玉竹根际微生物群落变化。运用高效液相色谱法,测定了根际土壤中的酚酸类化感物质的变化,以及探究了酚酸类化感物质对玉竹根腐病病原菌-腐皮镰孢生长的影响,以期为玉竹连作障碍的研究提供一定的理论基础。主要研究结果如下:(1)连作导致玉竹的出苗时间、齐苗时间、展叶期、花期推迟,株高变矮,叶片数量减少,连作后死亡率达到35.83%,比头茬高出22.50%。(2)连作玉竹根际土壤中可培养的细菌、真菌、放线菌数量均高于头茬玉竹。连作玉竹根际土壤中可培养细菌平均数量为19919.17 CFU/μL,头茬为357.94 CFU/μL。连作玉竹根际土壤中可培养真菌平均数量为211.21 CFU/μL,头茬为44.23 CFU/μL。连作玉竹根际土壤中可培养放线菌平均数量为6528.09 CFU/μL,头茬为5235.42 CFU/μL。(3)连作玉竹根际土壤中五种酚酸物质的含量均高于头茬玉竹。连作玉竹根际土壤中对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸的含量分别为:0.1372μg/g、0.3003μg/g、0.0590μg/g、0.0385μg/g、0.0303μg/g,头茬玉竹根际土壤中对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸、阿魏酸的含量分别为:0.0554μg/g、0.2806μg/g、0.0337μg/g、0.0204μg/g、0.0187μg/g。(4)5种酚酸类物质对腐皮镰孢菌的菌丝生长率和孢子萌发率均有较强的化感作用,表现为低浓度促进生长、高浓度抑制生长。

关键词：玉竹连作障碍根际微生物酚酸高效液相色谱

甲基莲心碱联合mdr-1shRNA对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的影响

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中南大学学报（医学版） 2010年第5期35卷 445-450页

作者：秦群肖希斌谢兆霞中南大学湘雅医院药剂科长沙410008 浙江大学医学院附属二医院血液科杭州310009 中南大学湘雅医院血液科长沙410008

目的:探讨甲基莲心碱(Nef)联合mdr-1shRNA表达的载体对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的影响。方法:采用MTT方法比较Nef,mdr-1 shRNA单独或二者联合对K562/A02细胞增殖的抑制作用;采用RT-PCR和Western印迹法检测mdr-1/P-gp的表达。结果:Nef与mdr-1shRNA联合组对K562/A02细胞的抑制率显著高于mdr-1shRNA,Nef单独处理组(P<0.01);联合组对K562/A02细胞mdr-1/P-gp表达的抑制作用强于单独处理组(P<0.01)。结论:甲基莲心碱能增强mdr-1shRNA表达载体对K562/A02细胞的增殖抑制作用及mdr-1/P-gp表达的抑制作用,逆转mdr-1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。

关键词：甲基莲心碱短发夹RNA 多药耐药

氟达拉滨、米托蒽醌对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226 KM3的增殖抑制作用

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中国肿瘤临床 2008年第24期35卷 1419-1421页

作者：秦群肖希斌谢兆霞中南大学湘雅医院药剂科长沙市410008 浙江大学医学院第二附属医院血液内科湖南省第二人民医院血液肿瘤科

目的:观察氟达拉滨、米托蒽醌对两株不同多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、KM3体外增殖的抑制作用。方法:采用MTT法观察1.25～20μg/ml氟达拉滨及联合应用米托蒽醌处理RPMI8226、KM3细胞后其增殖的变化。结果:氟达拉滨剂量逐渐增大时,对两株... 详细信息

目的:观察氟达拉滨、米托蒽醌对两株不同多发性骨髓瘤细胞RPMI8226、KM3体外增殖的抑制作用。方法:采用MTT法观察1.25～20μg/ml氟达拉滨及联合应用米托蒽醌处理RPMI8226、KM3细胞后其增殖的变化。结果:氟达拉滨剂量逐渐增大时,对两株多发性骨髓瘤细胞抑制率逐渐增强(P<0.01)。氟达拉滨对RPMI8226细胞的IC50为5.26μg/ml,对KM3细胞的IC50为4.93μg/ml。氟达拉滨联合米托蒽醌对RPMI8226、KM3细胞的增殖抑制作用显著强于氟达拉滨或米托蒽醌单独处理组(P<0.01)。结论:氟达拉滨对两种不同性质的多发性骨髓瘤细胞株均有明显的杀伤作用。氟达拉滨联合米托蒽醌能更有效地抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖,为临床治疗多发性骨髓瘤提供实验依据。

关键词：氟达拉滨米托蒽醌 RPMI8226细胞 KM3细胞

三种蒽环类抗肿瘤药物对K562/A02细胞体外抑制作用

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中国肿瘤临床 2005年第7期32卷 407-408页

作者：肖希斌谢兆霞陈宏中南大学湘雅医院血液科长沙市410008

目的:比较表阿霉素,柔红霉素和吡喃阿霉素对多药耐药细胞株K562/A02体外增殖的抑制作用。方法:利用M TT观察7.5～60μg/m l的表阿霉素或柔红霉素或吡喃阿霉素处理K562/A02细胞后细胞增殖的变化。结果:吡喃阿霉素剂量逐渐增大时,抑制率... 详细信息

目的:比较表阿霉素,柔红霉素和吡喃阿霉素对多药耐药细胞株K562/A02体外增殖的抑制作用。方法:利用M TT观察7.5～60μg/m l的表阿霉素或柔红霉素或吡喃阿霉素处理K562/A02细胞后细胞增殖的变化。结果:吡喃阿霉素剂量逐渐增大时,抑制率逐渐增强(P<0.05)。吡喃阿霉素组对K562/A02细胞的抑制率较相同剂量表阿霉素组或柔红霉素组抑制率显著增加(P<0.01)。结论:相同剂量的吡喃阿霉素较表阿霉素或柔红霉素有更强的抑制多药耐药细胞株K562/A02细胞的作用。

关键词：表阿霉素柔红霉素吡喃阿霉素 K562/A02细胞

MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

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中华肿瘤杂志 2006年第6期28卷 422-425页

作者：肖希斌谢兆霞秦群中南大学湘雅医院血液科长沙410008 中南大学湘雅医院药剂科长沙410008

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K56... 详细信息

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化；以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50))；高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%；同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%；同时使K562/ A02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。

关键词： MDR1基因真核表达载体 K562/A02人白血病细胞株 P-糖蛋白多药耐药

甲基莲心碱抑制K562/A02细胞GST-π的表达

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西安交通大学学报（医学版） 2005年第5期26卷 428-430,439页

作者：肖希斌谢兆霞秦群中南大学湘雅医院血液科湖南长沙410008 中南大学湘雅医院药剂科湖南长沙410008

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响。方法应用MTT法测定甲基莲心碱处理的K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的影响。RT-PCR法分析Nef处理后,GST-πmRNA转录的变化。通过Western Blot观察Nef对GST-π蛋... 详细信息

目的探讨甲基莲心碱(Neferine,Nef)对谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)的影响。方法应用MTT法测定甲基莲心碱处理的K562/A02细胞对阿霉素(ADM)敏感性的影响。RT-PCR法分析Nef处理后,GST-πmRNA转录的变化。通过Western Blot观察Nef对GST-π蛋白表达的影响。结果甲基莲心碱对K562/A02的耐药性具有明显的逆转作用。用Nef处理后,对阿霉素药物敏感性的相对逆转效率第1天、第3天和第5天分别为9.6%、41.4%和10.7%;GST-πmRNA转录水平在用药后第3天下调最大,为(50.7±2.3)%。GST-π蛋白的表达于用药后第1天、第3天和第5天分别下降25.57%、48.42%和10.68%。结论甲基莲心碱具有较强的逆转K562/A02细胞多药耐药的作用,其逆转机制可能包括下调K562/A02细胞GST-πmRNA的转录和蛋白的表达。

关键词：白血病多药耐药甲基莲心碱谷胱甘肽S转移酶-π

pEGFP-C1/U6质粒载体介导的表达MDR1shRNA的质粒构建

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中国实验血液学杂志 2006年第2期14卷 384-387页

作者：肖希斌谢兆霞中南大学湘雅医院血液科长沙410008

为了构建pEGFP-C1/U6载体介导MDR1短发卡RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达的质粒,针对MDR1的19碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pEGFP-C1载体(命名为pEGFP-C1/U6),两对DNA双链连接后形成中间由... 详细信息

为了构建pEGFP-C1/U6载体介导MDR1短发卡RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达的质粒,针对MDR1的19碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pEGFP-C1载体(命名为pEGFP-C1/U6),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生MDR1短发卡RNA的质粒。结果表明:经酶切、连接后构建成的质粒(pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B),经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变。结论:成功构建了能表达MDR1shRNA的质粒载体pEGFP-C1/U6/A和pEGFP-C1/U6/B,此项研究结果可能为临床上逆转肿瘤多药耐药提供一种有效的方法。

关键词： pEGFP-C1/U6载体 MDR1 shRNA 质粒

当归多糖促进慢性粒细胞白血病细胞性树突状细胞的诱导生成

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中草药 2004年第5期35卷 531-535页

作者：陈国安肖希斌袁利亚戎吉平江西医学院第一附属医院血液科江西南昌330006 江西省医学科学研究所血液研究室江西南昌330006

目的　探讨当归多糖 (APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞 (DCs)的影响。方法　取慢性粒细胞白血病 (CML )患者骨髓单个核细胞 ,分别予粒 -巨噬集落刺激因子 (GM- CSF) /白介素 - 4 (IL - 4 )培养或GM- CSF/ IL- 4联合各浓度... 详细信息

目的　探讨当归多糖 (APS)对慢性粒细胞白血病细胞诱导生成树突状细胞 (DCs)的影响。方法　取慢性粒细胞白血病 (CML )患者骨髓单个核细胞 ,分别予粒 -巨噬集落刺激因子 (GM- CSF) /白介素 - 4 (IL - 4 )培养或GM- CSF/ IL- 4联合各浓度 APS(5 0 ,10 0 ,2 0 0 mg/ L)培养 ,普通光镜和电镜观察细胞形态 ,台盼蓝拒染法检测细胞成活率 ,流式细胞仪检测 DCs的免疫表型 (CD80 ,CD86 ,CD83) ,自体或异体混合淋巴细胞反应检测 DCs刺激 T淋巴细胞的增殖能力。结果　 GM- GSF/ IL - 4或 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱导培养的慢性粒细胞白血病骨髓单个核细胞均表现出典型的树突状形态而且表达高水平的免疫表型。GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的细胞成活率和增殖能力显著提高 ,CD83,CD80 ,CD86 表达显著升高 ,APS组慢性粒细胞白血病细胞诱导的树突状细胞 (CML - DCs)刺激 T淋巴细胞的增殖能力更强。结论　 GM- CSF/ IL- 4 / APS培养的 DCs的 CD83、CD80 、CD86 表达率明显高于 GM-CSF/ IL - 4组。 GM- CSF/ IL - 4 / APS诱生的 CML - DCs刺激 T淋巴细胞增殖能力强于 GM- CSF/ IL - 4组。 APS能促进 IL- 4和 GM- CSF对 CML- DCs的诱生与成熟。

关键词：当归多糖慢性粒细胞白血病树突状细胞 T淋巴细胞

甲基莲心碱在K562/A02细胞对STI571敏感性中的作用

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中南大学学报（医学版） 2005年第5期30卷 558-561页

作者：肖希斌谢兆霞陈杰秦群祝焱中南大学湘雅医院血液科长沙410008 中山大学药学院临床药理研究所广州510080 中南大学湘雅医院药剂科长沙410008

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1mRNA转录水平及WesternBlot法检测P-gp表... 详细信息

目的:研究甲基莲心碱(Nef)在多药耐药白血病细胞K562/A02对STI571敏感性中的作用,并探讨其逆转耐药的机制。方法:MTT法比较STI571单独或与Nef联合应用对K562/A02细胞的抑制作用;RT-PCR法检测mdr1mRNA转录水平及WesternBlot法检测P-gp表达水平。结果:Nef与STI571联合应用对K562/A02细胞增殖的抑制作用明显增强。单独应用STI571对K562/A02细胞的IC50为3.02μmol/L,加Nef后,IC50为0.689μmol/L,逆转倍数为4.38倍(P<0.05)。STI571与Nef联合应用使mdr1mRNA转录水平下调(45.4±2.5)%(P<0.01),使P-gp的表达下调40.58%(P<0.05)。结论:甲基莲心碱能增强K562/A02细胞对STI571的敏感性,下调其mdr1mRNA的转录和阻断P-gp的表达,从而逆转白血病的多药耐药性。

关键词： STI 571 K562/A02 甲基莲心碱多药耐药基因,bcr/abl