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兔模型中定形状的大体积工程化带蒂脂肪瓣预构：组织工程室两步法

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兔模型中定形状的大体积工程化带蒂脂肪瓣预构：组织工程室两步法

作者：肖小莲南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的临床上,对于先天畸形、外伤、肿瘤切除造成的大体积软组织缺损进行修复一直以来都是整形外科医生面临的重大挑战,这些缺损通常需要复杂的修复重建手术来治疗。吻合血管的自体组织移植是目前最被广泛接受和推荐的治疗。然... 详细信息

研究背景和目的临床上,对于先天畸形、外伤、肿瘤切除造成的大体积软组织缺损进行修复一直以来都是整形外科医生面临的重大挑战,这些缺损通常需要复杂的修复重建手术来治疗。吻合血管的自体组织移植是目前最被广泛接受和推荐的治疗。然而,这种手术有很多技术上的挑战,而且还不可避免地导致供区的缺损畸形。目前一个以解决软组织缺损修复重建的新领域一脂肪组织工程技术,为自体组织瓣移植提供了另一种可能的选择。2007年,研究人员将一个带腹壁浅血管蒂的脂肪瓣插入一个中空的小室中,再植入大鼠的腹股沟皮下,最终导致了腹股沟脂肪瓣的显著增长。这种组织工程室(TEC)技术为组织工程领域提供了新的可能。先前的研究已经表明,TEC技术可以产生大量的脂肪组织。然而,在大动物体内长期的观察表明,植入的脂肪瓣最终不能100%完全填满工程室内的所有空间,这就意味着工程化脂肪瓣的体积没有最大化。我们之前关于大鼠的研究可能可以解释这个现象,我们发现当把TEC小室植入动物体内,新生的组织表面覆盖了一层厚厚的包膜囊。这个包膜囊可能降低了来自脂肪瓣周围的灌注从面限制了脂肪瓣的进一步增长。因此,我们推测包膜囊的形成可能是限制工程化组织瓣达到其最大体积的关键因素之一。另一方面,虽然该包膜囊可以限制脂肪瓣的体积增长,但是它也可以维持TEC所构建脂肪瓣的外形。据先前的报道所知,Morrison团队所构建出的组织瓣大都是单一的半球形。然而面对临床上的形形色色的缺损,我们不禁提出疑问：利用组织工程室技术能否构建出不同形状的脂肪瓣?如何构建接近临床需求的更大体积的脂肪瓣?这些构建出的工程化脂肪瓣的原位远期转归又如何呢?基于以上的观察,我们推测使用TEC可以实现脂肪瓣的形状预构。首先将脂肪瓣放入合适形状的组织工程小室中,当脂肪瓣体积稳定后去除小室,可以促进成形的脂肪瓣的进一步生长。为了检测这个“两步法”技术,我们进行了以下实验：运用兔模型将带蒂脂肪组织瓣置于不同形状的小室中,并观察在此过程中大体和组织学的变化。方法1、组织工程室内大体积带蒂脂肪组织瓣的形状预构在兔背部皮下放置圆形与心形两种形状组织工程室,再将带蒂脂肪瓣放入小室内。在不同时间点(2周、4周、8周)观察构建物的体积、形状、组织学等动态变化的过程。2、构建物二次增长模式的研究在利用组织工程室模型构建稳定的组织瓣后,将小室去除后,4周后再原位观察构建物的变化情况,通过体积测量、组织学的变化来探讨二次增长模式的可行性。3、组织工程室诱导的构建物的原位长期转归的观察利用组织工程室技术构建成熟的脂肪组织瓣后,一侧小室去除另一侧小室保留,并分别观察在小室内的以及去除小室后的构建物在不同时间点(16周、24周)的变化。4、统计学处理数据以均数±标准差(x±s)表示,使用统计软件SPSS 13.0进行数据处理。两组之间同一时间点比较采用Bonferroni’s检验;同组不同时间点的差异采用协方差分析及post-hoc分析的T检验。结果1、不同形状的组织工程室内构建物在2周时外形与小室吻合,但构建物外周以胶样物质填充,脂肪瓣内部组织学出现血管形成伴随着脂肪新生,伴炎性细胞浸润,外周以炎性细胞浸润为主;4周时构建物形状与小室基本吻合,血管化及脂肪化趋于稳定,4周一8周时外形无明显变化但组织学表现为具有标志性脂肪小叶结构的成熟脂肪组织,表面被一以纤维结缔组织成分为主的包膜包裹。2、将小室去除后4周组织瓣体积再一次明显的抬升,实现了二次增长。组织学观察发现与室内第一次诱导新生相似,脂肪瓣内部再次出现血管形成并伴随着脂肪新生,可见炎性细胞浸润,包膜厚度较室内组织瓣变薄。全组织染色检测发现Lectin及Ki67阳性细胞均有增加进一步提示脂肪瓣内部再次出现血管化及细胞增殖。3、去除小室后两种不同形状小室构建物体积在16周时均有轻度增加,到24周达到稳定,24周体积与16周相比无统计学差异。两种不同形状的组织瓣形状仍能维持。一直在小室内的构建物体积在4周时达到相对稳定,一直持续至24周。讨论临床上修复大体积软组织缺损常用的方法是皮瓣转移或脂肪移植来进行修复。皮瓣转移手术塑形困难,供皮的继发损伤较大,自体游离脂肪移植后吸收率高,且远期效果欠佳。2003年提出了“组织工程室”的概念,生物体内的工程化带血管蒂脂肪瓣解决了大体积软组织缺损修复重建的难题。对于修复临床上的缺损,我们很难找到一个带血管的与缺损形状吻合的复杂的组织结构去重建修复。虽然一块带血管蒂的脂肪瓣置入组织工程小室中能构建血管化良好的成熟脂肪组织,但是,之前的研究都不能使小室内的脂肪瓣体积增大到能够完全充满植入小室的容积。在本实验中,我们展示的是一种在兔模型中不添加任何外源性的血管化或脂肪化的生长因子以及生物可降解的细胞外基质支架,而成功构建出与组织工程室形状吻合的大体积血管化脂肪瓣。众所周知,脂肪化分为两个阶段：间充质干细胞先分化成脂肪前体细胞,再从脂肪前体细胞最终分化成成熟脂肪细胞。在脂肪组织工程中,

关键词：组织工程室大体积脂肪瓣形状预构二次增长模式长期转归

先天性巨大黑色素细胞痣早期治疗的可行性探讨

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中华整形外科杂志 2022年第11期38卷 1203-1209页

作者：张佳琦陈程石芬苏正肖小莲张剑陈宸王永振梁伟强张金明中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510000

目的探讨早期治疗先天性巨大黑色素细胞痣(巨痣)的可行性。方法回顾性分析2013年10月至2021年12月, 在孙逸仙纪念医院整形外科应用皮肤软组织扩张术治疗巨痣的患儿临床资料。一期埋置肾形扩张器, 手术方式包括单次扩张和重复扩张。二期... 详细信息

目的探讨早期治疗先天性巨大黑色素细胞痣(巨痣)的可行性。方法回顾性分析2013年10月至2021年12月, 在孙逸仙纪念医院整形外科应用皮肤软组织扩张术治疗巨痣的患儿临床资料。一期埋置肾形扩张器, 手术方式包括单次扩张和重复扩张。二期手术切除巨痣, 行扩张皮瓣转移修复术。随访观察并发症发生情况、患儿的心理健康问题和患儿家长满意度。采用χ2检验比较不同年龄组的组间并发症的发生率以及内置型和外置型扩张器感染率。结果共纳入58例患儿, 男24例, 女34例, 年龄为3个月至3岁, 平均(1.45±0.83)岁。共埋置190个扩张器, 术后随访5~106个月, 平均42.43个月, 扩张器埋置期间发生扩张器伤口感染29个, 扩张器外露41个, 扩张皮瓣血供障碍2个, 扩张器破裂6个, 对症处理后均未影响二期皮瓣转移。3个月~<1岁、1~<2岁、2~<3岁及3岁年龄组之间并发症发生率的分别为37.34%(31/83)、56.75%(21/37)、3.33%(13/39)及41.94%(13/31), 组间比较差异无统计学意义(χ^(2)=5.21, P=0.157), 内置型和外置型扩张器注水壶伤口感染发生率分别为16.67%(6/36)和14.94%(23/154), 两者比较差异亦无统计学意义(χ^(2)=0.07, P=0.795)。所有患儿外形得到了显著改善, 效果良好, 患儿家长满意度评价:39例患儿家长为特别满意, 20例为一般, 未发现患儿出现心理健康问题。结论皮肤软组织扩张术是早期治疗先天性巨痣较为可靠的方法。

关键词：组织扩张术痣色素整形手术外科皮瓣手术后并发症先天性黑色素细胞痣综合征

应用组织瓣修复小腿及足踝部瘢痕癌的适应证及组织瓣选择与修复效果

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中华烧伤杂志 2021年第4期37卷 363-368页

作者：梁伟强石芬张剑张佳琦肖小莲张金明中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510120

目的探讨应用组织瓣修复小腿及足踝部瘢痕癌的适应证、组织瓣的选择及其修复效果。方法采用回顾性队列研究方法。2008年6月—2018年12月,中山大学孙逸仙纪念医院收治6例小腿及足踝部瘢痕癌男性患者,年龄48~64岁,病灶面积为3 cm×2 cm~15... 详细信息

目的探讨应用组织瓣修复小腿及足踝部瘢痕癌的适应证、组织瓣的选择及其修复效果。方法采用回顾性队列研究方法。2008年6月—2018年12月,中山大学孙逸仙纪念医院收治6例小腿及足踝部瘢痕癌男性患者,年龄48~64岁,病灶面积为3 cm×2 cm~15 cm×6 cm。病灶扩大切除后缺损面积为8 cm×5 cm~22 cm×9 cm,均有肌腱或骨组织外露。根据创面位于下肢的部位、手术体位的选择、受区吻合血管的位置、小腿是否有可利用的良好皮肤软组织等因素,选择应用游离股前外侧穿支皮瓣、背阔肌肌皮瓣或带蒂腓肠神经营养血管皮瓣进行创面修复,皮瓣面积为11 cm×8 cm~26 cm×10 cm。5例游离皮瓣或肌皮瓣供区直接缝合,1例带蒂皮瓣供区移植全厚皮片修复。观察术后移植组织瓣血运及成活情况、皮片存活质量、并发症情况,随访观察瘢痕癌复发及转移情况、供受区外观及功能。结果全部患者均顺利完成手术,移植的组织瓣全部成活且血运良好,1例供区植皮者皮片存活良好。全部患者的供区及受区创面均愈合良好,无感染、积液或裂开等表现。术后随访1~5年,均无瘢痕癌局部复发或远处转移发生;移植组织瓣质量良好,受区局部外形较佳,患肢活动功能良好;供区外形良好,无功能障碍。结论小腿及足踝部瘢痕癌切除术后有肌腱及骨等组织外露者,适用组织瓣移植修复。可根据瘢痕癌的位置、手术体位、受区吻合血管的位置、小腿是否有可利用的良好皮肤软组织等因素来选择修复的组织瓣,其中游离的股前外侧穿支皮瓣或背阔肌肌皮瓣为理想的修复选择,这2种组织瓣可切取面积大,供区可直接缝合且功能不受影响。

关键词：癌,鳞状细胞外科皮瓣治疗效果瘢痕癌适应证

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1型神经纤维瘤病的整形外科治疗决策

中华整形外科杂志 2021年第8期37卷 840-846页

作者：张剑张金明葛鋆梁伟强张佳琦肖小莲陈宸中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510000

目的探讨1型神经纤维瘤病(NF1)的切除及修复方法的可行性及临床效果。方法回顾性分析2000年1月至2020年12月中山大学孙逸仙纪念医院整形外科确诊为NF1,且行整形性切除及修复的患者资料,修复方式包括直接缝合、皮瓣及植皮。结果共纳入34... 详细信息

目的探讨1型神经纤维瘤病(NF1)的切除及修复方法的可行性及临床效果。方法回顾性分析2000年1月至2020年12月中山大学孙逸仙纪念医院整形外科确诊为NF1,且行整形性切除及修复的患者资料,修复方式包括直接缝合、皮瓣及植皮。结果共纳入34例NF1患者(16例巨大NF1,其中2例为头面部巨大NF1,14例为四肢及躯体巨大NF1)。男14例,女20例,年龄16~46岁,平均30.4岁。病变部位累及头面部、胸背部、腰臀部、上下肢等全身多个部位。肿瘤面积65~2080 cm^(2),平均252 cm^(2),9例经介入科会诊后行术前介入栓塞主干供血动脉。所有患者均成功根据术前制定的计划切除标记的瘤体,其中33例患者出血均可控,切除及修复均一期完成。1例女性面部巨大神经纤维瘤患者第1次切除手术中切除部分瘤体后出现难以控制的出血,予以先行加压包扎止血后行分期手术完成切除及修复。瘤体切除后直接缝合14例,其中2例术后1周内出现伤口裂开,在局麻下予以修整重新缝合后恢复良好。皮瓣方式修复16例,其中5例患者因术后皮瓣远端血运不良,行手术修整重新缝合,恢复良好。植皮方式修复4例,其中1例患者因部分皮片成活不良,行二次植皮手术修整,恢复良好。所有患者随访6~36个月,平均22.6个月。除1例患者出现恶变及1例患者瘤体复发明显外,其余患者均未出现复发或恶变,对手术效果满意。结论NF1尤其是巨大NF1的切除修复需要根据瘤体的位置和大小制定合适的整形性切除范围,在控制出血的前提下,尽量达到一期切除和修复。可根据病变部位、大小及形态,应用不同类型的修复方法,达到切除病变、保护形态功能的目的。

关键词： 1型神经纤维瘤病修复外科手术外科,整形

阴囊皮瓣在阴茎阴囊Paget病切除修复中的应用

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中华整形外科杂志 2021年第3期37卷 281-288页

作者：张剑梁伟强张金明张佳琦肖小莲苏正刘蒙中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510000

目的探讨应用阴囊皮瓣即刻修复阴茎阴囊Paget病切除术后缺损的方法、可行性及临床效果。方法2008年1—9月中山大学孙逸仙纪念医院整形外科共收治21例确诊为阴茎阴囊Paget病患者,年龄42~74岁,所有患者均行局部扩大切除,术中冰冻切片检查... 详细信息

目的探讨应用阴囊皮瓣即刻修复阴茎阴囊Paget病切除术后缺损的方法、可行性及临床效果。方法2008年1—9月中山大学孙逸仙纪念医院整形外科共收治21例确诊为阴茎阴囊Paget病患者,年龄42~74岁,所有患者均行局部扩大切除,术中冰冻切片检查确定阴性边缘,根据缺损部位及大小,所有患者均使用阴囊皮瓣或阴囊皮瓣联合其他手术方法修复缺损。观察皮瓣存活情况,以及对缺损区域修复效果,随访Paget病复发情况。结果修复时单纯应用阴囊皮瓣10例,阴囊皮瓣联合其他皮瓣7例,阴囊皮瓣联合植皮4例。全部转移的阴囊皮瓣血运良好,除2例植皮小部分坏死及1例皮瓣供区延迟愈合外,其余18例患者伤口愈合良好。所有患者随访6~60个月,平均30.6个月。绝大部分患者[20例(95.2%)]对术后阴茎及阴囊外形满意,全部转移皮瓣无水肿表现;4例患者2年内出现局部复发,1例在3年内出现局部复发和腹股沟淋巴结转移,局部复发率为23.8%(5/21)。因局部复发病损较小,故局部复发病灶扩大切除后,再次成功利用阴囊邻近皮瓣转移修复,腹股沟淋巴结转移患者行同侧腹股沟淋巴结清扫。结论应用阴囊皮瓣修复阴茎阴囊Paget病术后缺损,具有切取面积大、设计切取灵活、皮瓣转移方便、血运可靠、方法简单且安全有效的特点,并可获得满意的术后阴茎及阴囊外形。对于难以单纯应用阴囊皮瓣修复的病损,可联合其他皮瓣或植皮方法进行修复,可以获得良好的治疗效果;对于绝大多数的复发病损,仍可再次应用残留的阴囊皮肤形成阴囊皮瓣进行修复。

关键词：佩吉特病,乳腺外修复外科手术外科皮瓣阴茎阴囊

以ADSCs附着ADM植入促进扩张皮瓣真皮修复的实验研究

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岭南现代临床外科 2018年第2期18卷 155-161页

作者：刘志瀚肖小莲梁伟强张金明中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510120

目的观察脂肪干细胞对扩张皮瓣的影响。方法将雌性SD大鼠制备成扩张器模型,皮肤下方与扩张器之间放置着附着大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的脱细胞真皮基质(ADM)。培养3周后获取扩张皮瓣,免疫组化分析组织形态变化,使用western blot分析作用部... 详细信息

目的观察脂肪干细胞对扩张皮瓣的影响。方法将雌性SD大鼠制备成扩张器模型,皮肤下方与扩张器之间放置着附着大鼠脂肪干细胞(ADSCs)的脱细胞真皮基质(ADM)。培养3周后获取扩张皮瓣,免疫组化分析组织形态变化,使用western blot分析作用部位皮瓣内ColⅠ、ColⅢ和fibronectin蛋白表达情况,使用QPCR检测作用部位皮瓣内转化生长因子β1(TGF-β1)的表达量。结果三周后组织切片提示ADSCs促进扩张皮瓣真皮内TGF-β1表达升高;术后第一周及第二周,在ADSCs的作用下,扩张皮瓣中ColⅠ和fibronectin蛋白表达明显上升,第三周有一个明显衰减,而ColⅢ表达量平稳,无明显变化趋势;QPCR提示术后第一周TGF-β1高表达,之后其表达量随时间衰减。结论 ADSCs诱导皮肤组织中的TGF-β1增加,进而促进真皮层下层成纤维细胞分泌更多的胶原结构与蛋白,促进扩张皮瓣真皮层修复。

关键词：脂肪干细胞脱细胞真皮基质扩张器

MSCs与CD34^＋单核细胞共培养联合脱细胞支架植入体内构建兔阴茎海绵体

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岭南现代临床外科 2017年第2期17卷 177-182页

作者：李瑞庭刘志瀚冀晨阳肖小莲梁伟强张金明中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510120

目的研究将异体骨髓间充质干细胞(MSCs)和CD34^+单核细胞(MNCs)共培养体系种植于脱细胞海绵体支架上在兔体内构建阴茎海绵体组织的可行性。方法分别从兔骨髓与兔外周血中提取并鉴定MSCs与CD34^+MNCs,将两种细胞组分以107/mL的密度种植... 详细信息

目的研究将异体骨髓间充质干细胞(MSCs)和CD34^+单核细胞(MNCs)共培养体系种植于脱细胞海绵体支架上在兔体内构建阴茎海绵体组织的可行性。方法分别从兔骨髓与兔外周血中提取并鉴定MSCs与CD34^+MNCs,将两种细胞组分以107/mL的密度种植于制备好的兔阴茎海绵体脱细胞胶原支架上,同时将相同密度的MSCs、CD34^+MNCs分别种植于支架上,培养4天后植入一种兔阴茎海绵体缺损模型中。3个月后对工程化组织进行取材,行H&E及Masson三色染色等组织学检测。结果 MSCs和CD34^+MNCs共培养组近白膜处的海绵体保留了正常海绵体结构,而MSCs组、CD34+单核细胞组及空白支架组以疤痕增生为主,尽管较之CD34^+单核细胞组及空白支架组,间充质干细胞组疤痕组织中的血管数目较多(P<0.05)。结论我们的研究证明了将MSCs和CD34^+MNCs的共培养体系种植于脱细胞支架上植入兔体内可以构建出一段组织学上与原生海绵体相似的组织;CD34^+MNCs在体内主要通过协同MSCs而非单独发挥其促血管化的生物学效应。

关键词： CD34+单核细胞骨髓间充质干细胞脱细胞海绵体支架组织工程组织工程化阴茎海绵体阴茎再造

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面部肿物切除后组织缺损的美学修复效果

中华医学美学美容杂志 2020年第6期26卷 469-471页

作者：刘蒙苏正张金明梁伟强张佳琦肖小莲中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510120

目的观察面部肿物切除后组织缺损的美学修复效果。方法2015年1月至2019年12月,中山大学孙逸仙纪念医院整形外科收治262例(男123例,女139例,年龄7个月至88岁,中位年龄52岁)面部肿物患者,手术切除肿物后,根据面部组织缺损情况选择合适的... 详细信息

目的观察面部肿物切除后组织缺损的美学修复效果。方法2015年1月至2019年12月,中山大学孙逸仙纪念医院整形外科收治262例(男123例,女139例,年龄7个月至88岁,中位年龄52岁)面部肿物患者,手术切除肿物后,根据面部组织缺损情况选择合适的修复方法。结果262例患者中局部皮瓣转移修复面部组织缺损69例,皮瓣全部存活良好,1例皮瓣远端出现瘀血,通过注射肝素原液处理后皮瓣存活,最终瘢痕愈合,后经3次CO_(2)点阵激光处理后瘢痕不明显,外形满意。结论局部皮瓣是修复面部肿物切除后组织缺损的一种有效办法,成功率高,美容效果好。

关键词：面部肿物手术切除组织缺损美学修复

微创钨针在横形包皮岛状皮瓣法尿道下裂一期修复术中的应用

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岭南现代临床外科 2021年第4期21卷 462-466,470页

作者：石芬陈宸梁伟强张佳琦肖小莲张金明中山大学孙逸仙纪念医院整形外科广州510120

目的总结微创钨针在横形包皮岛状皮瓣管状尿道成形法尿道下裂一期修复术的应用方法及术后效果。方法我科2013年5月至2019年10月收治的其中226例尿道下裂患者,年龄6月~26岁(平均3.8岁),其中阴茎体型119例,阴茎阴囊型83例,阴囊型及会阴型2... 详细信息

目的总结微创钨针在横形包皮岛状皮瓣管状尿道成形法尿道下裂一期修复术的应用方法及术后效果。方法我科2013年5月至2019年10月收治的其中226例尿道下裂患者,年龄6月~26岁(平均3.8岁),其中阴茎体型119例,阴茎阴囊型83例,阴囊型及会阴型24例。术中应用微创钨针进行阴茎矫直、阴茎包皮脱套、横形包皮岛状皮瓣的切取及解剖等操作,将成形的横形包皮岛状皮瓣缝合成管状尿道,对各型尿道下裂进行一期尿道重建术。结果术后7~8天拔除硅胶尿管排尿后,共发现12例伤口愈合不良、尿外渗及尿瘘形成。全部病例随访3月~2年,共发现尿瘘及尿道部分裂开24例,尿道外口狭窄2例,尿道(吻合口)狭窄3例,尿道憩室1例,阴茎下弯复发2例,总的并发症发生率为32/226(14.2%)。结论在尿道下裂一期修复手术中,合理应用微创钨针的电切及电凝功能的优势特点,可精细分离解剖横形包皮岛状皮瓣,可安全有效获取尿道再造所需要的血运良好的包皮瓣等组织,有利于提高手术效率、减轻组织的损伤,可促进组织愈合、降低术后并发症。

关键词：尿道下裂尿道成形术横形包皮岛状皮瓣微创钨针术后并发症