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乙型肝炎病毒大蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用

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乙型肝炎病毒大蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用

乳腺癌患者手术前后血清IL-2、MMP-9、TK1和sFas测定的临床价值

第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：李梅肖华龙刘洁胡志刚南京医科大学附属无锡人民医院检验科南京医科大学附属无锡人民医院内科

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中乙型肝炎病毒大蛋白（hepatitis B virus large surf ace protein,HBV-LP）的时间分辨荧光免疫分析方法。方法以抗人HBV-LP单克隆抗体和抗HBs多克隆抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,应... 详细信息

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中乙型肝炎病毒大蛋白（hepatitis B virus large surf ace protein,HBV-LP）的时间分辨荧光免疫分析方法。方法以抗人HBV-LP单克隆抗体和抗HBs多克隆抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,应用双抗夹心荧光免疫分析方法对血液中HBV-LP进行检测。对建立的时间分辨荧光免疫（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA）法检测HBV-LP的准确度、灵敏度、特异度回收率及实验的稳定性等进行分析。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,单侧95%参考范围为0-1.36ng/ml,灵敏度为0.1ng/ml,30份我院正常体检者血清标本进行HBV-LP的检测,结果均正常,特异性100%。TRFIA比ELISA的检测范围更宽,二者的相关系数为0.8009（P＜0.001）。TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内、批间精密度均低于5%;平均回收率为101.17%;稳定性能好。结论 TRFIA法检测患者血清中的HBV-LP灵敏度高,特异性强,检测范围宽,对早期筛选乙型肝炎病毒患者及监测抗病毒治疗的疗效具有潜在的重要价值。

关键词：酶联免疫分析乙型肝炎病毒大蛋白时间分辨荧光免疫分析

来源： cnki会议评论

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放射免疫学杂志 2013年第4期26卷 396-399页

作者：谢国强肖华龙邵耀明马坚江苏省无锡市人民医院检验科 214000

目的:讨论乳腺癌患者血清IL-2、MMP-9、TK1和sFas四项指标在手术治疗前后测定的临床价值。方法:血清IL-2采用放射免疫分析;MMP-9和sFas采用酶联免疫吸附分析法检测;TK1测定采用CIS-型免疫印迹-增强发光检测系统检测。结果:本文结果显示... 详细信息

目的:讨论乳腺癌患者血清IL-2、MMP-9、TK1和sFas四项指标在手术治疗前后测定的临床价值。方法:血清IL-2采用放射免疫分析;MMP-9和sFas采用酶联免疫吸附分析法检测;TK1测定采用CIS-型免疫印迹-增强发光检测系统检测。结果:本文结果显示,血清IL-2水平对照组与正常组无显著差异(P>0.05),术前组分别低于对照组和正常组(P<0.05,P<0.01),术后组较术前组升高显著(P<0.05)。MMP-9水平则术前组和对照组均显著高于正常组(P<0.05,P<0.01),术后组较术前组下降显著(P<0.05),但仍显著高于正常组(P<0.05)。TK1水平术前组和对照组均显著高于正常组(P<0.05,P<0.01),同时术前组又显著高于对照组(P<0.01),术后组较术前组下降显著(P<0.05),但仍显著高于正常组(P<0.05)。sFas水平的变化同MMP-9。结论:患者血清4项指标手术前后发生了显著变化有可能与乳腺癌的发生和病理过程有关,其测定对于了解其病理机制和评估预后有一定帮助。

关键词：乳腺癌白细胞介素-2 基质金属蛋白酶9 胸苷激酶1 可溶性凋亡相关因子

血清中乙型肝炎病毒全基因组及X基因的克隆与鉴定

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第2期28卷 198-201页

作者：陈伟张晓峰邓超包菊平肖华龙江南大学医药学院江苏无锡214122 南京医科大学附属无锡人民医院感染科江苏无锡214023

目的:建立从血清样品直接扩增乙型肝炎病毒(HBV)全长DNA的方法,构建HBV全基因组克隆。方法:用长链PCR从血清样品一次性扩增HBV全长DNA,测序鉴定后插入质粒puc19构建含HBV全基因组的重组质粒,再从重组质粒扩增X基因并进行序列分析。结果:... 详细信息

目的:建立从血清样品直接扩增乙型肝炎病毒(HBV)全长DNA的方法,构建HBV全基因组克隆。方法:用长链PCR从血清样品一次性扩增HBV全长DNA,测序鉴定后插入质粒puc19构建含HBV全基因组的重组质粒,再从重组质粒扩增X基因并进行序列分析。结果:经DNA序列测定和酶切分析,获得HBV全基因组克隆,从克隆的HBV全基因组扩增到X基因。结论:从血清中可直接扩增到HBV全基因组DNA,为整体水平研究HBV基因组的变异与其致病及宿主抗感染免疫之间的关系奠定了实验基础。

关键词：乙型肝炎病毒基因组 X基因聚合酶链反应克隆

乙酰肝素酶生物素-链亲和素系统时间分辨荧光免疫分析法的建立及应用

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中华核医学与分子影像杂志 2014年第4期34卷 308-311页

作者：朱宝谢国强肖华龙黄飚邵科晶许亚丰张艺南京医科大学附属无锡人民医院核医学科 214023 南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科 214023 卫生部核医学重点实验室

目的建立测定乙酰肝素酶（HPA）的生物素-链亲和素系统（BSA） TRFIA并进行初步应用.方法采用部分基因重组的鼠抗人HPA单克隆抗体包被微孔板条,加入HPA标准品和生物素标记的HPA,两者竞争性结合HPA单克隆抗体,再利用铕标记链亲和素（E... 详细信息

目的建立测定乙酰肝素酶（HPA）的生物素-链亲和素系统（BSA） TRFIA并进行初步应用.方法采用部分基因重组的鼠抗人HPA单克隆抗体包被微孔板条,加入HPA标准品和生物素标记的HPA,两者竞争性结合HPA单克隆抗体,再利用铕标记链亲和素（Eu^3＋-SA）作为示踪物,建立竞争法BSA-TRFIA.利用该方法检测健康人血清样本（n=32）和肿瘤患者血清样本（n=54）HPA水平,并比较TRFIA结果与ELISA结果的相关性.数据分析采用两样本t检验或t′检验、直线相关分析.结果该法测定HPA的灵敏度为0.33 μg/L,批内和批间CV分别为5.29%和7.54%,平均回收率为105.5%,标准曲线范围为O-1 000 μg/L.健康人血清样本测定结果为（2.03±1.47）μg/L,患者血清样本为（22.13±7.38） μg/L（t′=19.388.P〈O．01）。该法测定值与ELISA结果相关（r=0．979，P〈0．01）。结论应用BSA-TRFIA建立的HPA测定法是一种灵敏度高，可测范围广，稳定，高效的定量检测方法。

关键词：荧光免疫测定生物素抗生蛋白链菌素乙酰肝素酶

肺移植受者痰标本细菌培养和药敏试验结果:12例特点分析

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第21期11卷 4066-4069页

作者：肖华龙强新晨张晓峰周丽珍孙剑陈云清江南大学附属无锡市第五人民医院检验科江苏省无锡市214073

目的:了解肺移植受者感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法:选择2003-06/2005-05在江南大学附属无锡市第五人民医院进行肺移植的受者12例,术前均知情并签署手术同意书。其中双肺移植3例(男1例,... 详细信息

目的:了解肺移植受者感染病原菌的分布及其对抗菌药物的耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法:选择2003-06/2005-05在江南大学附属无锡市第五人民医院进行肺移植的受者12例,术前均知情并签署手术同意书。其中双肺移植3例(男1例,女2例),单肺移植9例(均为男性)。在肺移植前后分别对受者深部脓性痰标本镜检筛选合格标本,将合格标本接种于平板培养基培养,对可疑菌落进行分离,采用法国梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析系统各种细菌鉴定卡和药敏试验卡进行细菌鉴定和药敏试验。结果:①12例肺移植受者移植前后痰标本中分离出各种细菌14种,肺移植前培养出阳性标本8例,其中2例为1种细菌,6例为2种以上的细菌混合感染。移植术前,对培养出阳性的肺移植受者抗感染治疗至痰培养阴性。在移植后3d内,每天连续培养均未检出阳性标本,第4天起开始有阳性标本出现。肺移植后培养出阳性标本10例,其中4例为1种细菌,6例为2种以上的细菌混合感染。②肺移植前后共分离出菌株48株,G+菌28株,占58.3%(28/48);G-菌9株,占18.8%(9/48);真菌11株占22.9%(11/48)。感染的主要病原菌除对磷霉素、万古霉素较为敏感外,其他均有多药耐药性。结论:在肺移植前后受者痰内均可培养分离出多种致病菌,肺部感染是普遍存在的问题。药敏试验结果表明,多数菌株具有多药耐药性。因此,分析肺移植受者痰液标本的细菌种类及耐药性情况对临床合理选择抗菌药物,避免盲目经验用药,及时控制感染有重要意义。

关键词：肺移植痰/微生物学细菌学技术药物耐受性器官移植

CTn-I RIA对急性心肌梗塞诊断价值的评价

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江苏医药 1995年第4期21卷 228-229页

作者：孙钧铭唐新俞惠英肖华龙江苏省原子医学研究所附属医院 214002

以心肌肌钙蛋白1放射免疫分析法（CTn－IRIA）测定急性心肌梗塞（AMI）35冽，非心肌梗塞（NMI）60例和正常健康人37例血清CTn－I的浓度，结果AMI组4．06±0．09ug／L（±s）明显高于后两组（P＜0．01），正常组为2．04±0．13ug／L，单... 详细信息

以心肌肌钙蛋白1放射免疫分析法（CTn－IRIA）测定急性心肌梗塞（AMI）35冽，非心肌梗塞（NMI）60例和正常健康人37例血清CTn－I的浓度，结果AMI组4．06±0．09ug／L（±s）明显高于后两组（P＜0．01），正常组为2．04±0．13ug／L，单侧95％可信上限界为3．35ug／L，以＞3.35ug/L为阳性.AMI组阳性率为94.3％，骨骼肌损伤18倒无1例阳性。提示CTn－I特异地存在于心肌中。按林氏推荐的公式[1]评价本方法对AMI的诊断价值阳性结果为90．41％，阴性结果为99.04％，准确率达92.15%,且CTn-I在AMI一周内为阳性。

关键词：心肌梗塞心肌肌钙蛋白I 放射免疫测定诊断

可溶性细胞间黏附分子-1时间分辨荧光免疫分析法的建立

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中华核医学杂志 2008年第5期28卷 344-346页

作者：肖华龙黄飚张晓峰虞竞峰陆国础朱岚强新晨祝炳方郁震江苏省无锡市人民医院检验科 214023 江苏省无锡市人民医院卫生部核医学重点实验室 214023

目的建立一种新的高灵敏度、宽范围的可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）生物素．链亲和素（BSA）系统时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）方法并用于临床。方法使用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体，利用制备的铕标记链亲和... 详细信息

目的建立一种新的高灵敏度、宽范围的可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）生物素．链亲和素（BSA）系统时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）方法并用于临床。方法使用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体，利用制备的铕标记链亲和素（SA—Eu^3＋）作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合，建立双位点多层夹心法BSA—TRFIA并进行质量控制，考核其灵敏度、特异性、测量范围及方法稳定性等。检测32例血清样品中sICAM-1含量，并与ELISA所测结果进行相关分析。测定31名健康对照者和22例肺部疾病患者血样中的sICAM-1含量。结果该法测定sICAM-1的灵敏度为1．32μg／L，批内和批间CV分别为4．24％和6．83％，平均回收率为99．87％，线性范围为（2．5～1933）μg/L。该方法测定值与ELISA所测结果高度相关（R^2=0．939）。与肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-8、IL-1、IL-2和IL-6等无交叉反应。溶血、脂血和高胆红素等血清标本对该方法基本无干扰。31名健康对照者测定结果为（365．74±45．03）μg／L。22例肺部疾病患者血样结果示，在炎症和肺损伤的情况下，可见sICAM-1有升高的趋势。结论该sICAM-1 BSA-TRFIA法灵敏度高，可测范围广，可以方便地应用于临床。

关键词：细胞黏着分子荧光免疫测定肺疾病

肺移植供体肺支气管分泌物细菌培养及药敏试验

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世界感染杂志 2005年第6期5卷 478-479页

作者：强新晨肖华龙周丽珍江南大学附属江苏省无锡市第五人民医院检验科江苏无锡214073

目的分析肺移植供体肺支气管分泌物的细菌种类及药物敏感试验的情况。方法对本院2002年9月至2005年5月送检的10份肺移植供体肺支气管分泌物进行培养，并对阳性标本进行细菌鉴定和药敏试验。结果供体中共检出细菌4例，均为嗜氧性革兰氏... 详细信息

目的分析肺移植供体肺支气管分泌物的细菌种类及药物敏感试验的情况。方法对本院2002年9月至2005年5月送检的10份肺移植供体肺支气管分泌物进行培养，并对阳性标本进行细菌鉴定和药敏试验。结果供体中共检出细菌4例，均为嗜氧性革兰氏阳性球菌，检出率为40％，其中2例为表皮葡萄球菌，属血浆凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），对红霉素、林可霉素、青霉素G耐药。结论目前对肺移植供体肺的细菌感染，尚未见相关实验报导，对供体肺支气管分泌物应进行细菌培养和药敏，依据细菌检验报告合理选择抗菌药物，对预防术后感染的发生有重要意义。

关键词：肺移植供体肺支气管分泌物细菌培养药敏试验

血清HBVDNA与乙型肝炎病毒血清学标志物的关系

维普期刊数据库评论

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世界感染杂志 2006年第5期6卷 453-454页

作者：祝炳方张晓峰柳毅肖华龙江南大学附属医院无锡市第五人民医院检验科江苏无锡214073

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术定量检测HBV DNA与乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物之间的关系。方法采用ELISA检测乙肝病毒血清学标志物，FQ-PCR法检测HBVDNA，比较不同乙肝病毒血清学标志物阳性组合HBVDNA阳性情况。结果... 详细信息

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术定量检测HBV DNA与乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物之间的关系。方法采用ELISA检测乙肝病毒血清学标志物，FQ-PCR法检测HBVDNA，比较不同乙肝病毒血清学标志物阳性组合HBVDNA阳性情况。结果HBsAg、HBeAg和HBcAb性组HBVDNA阳性率为100％（155／155）；HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为35．2％（50／142）；HBsAg、HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为30．2％（38／126），HBsAg阳性组血清HBVDNA阳性率为10．0％（3／30）。结论荧光定量PCR法检测血清中衄VDNA含量可以准确地反映病人体内病毒的感染和复制情况，可准确地为临床提供科学的诊断依据。

关键词：乙肝病毒血清学标志物荧光定量PeR HBV DNA