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芦荟大黄素抑制人口腔癌KB细胞增殖和迁移的双重效应及其机制研究

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中华口腔医学杂志 2009年第1期44卷 50-52页

作者：肖丙秀郭俊明宁波大学医学院生化教研室浙江315211

目的探讨芦荟大黄素抑制人口腔癌细胞生长和迁移的双重效应及其机制。方法对人口腔上皮癌KB细胞分别用2．5、5、10、20和40μmol／L的芦荟大黄素处理，对照组为含0．1％二甲基亚砜的培养液，分别用结晶紫实验和划痕损伤愈合迁移实验分... 详细信息

目的探讨芦荟大黄素抑制人口腔癌细胞生长和迁移的双重效应及其机制。方法对人口腔上皮癌KB细胞分别用2．5、5、10、20和40μmol／L的芦荟大黄素处理，对照组为含0．1％二甲基亚砜的培养液，分别用结晶紫实验和划痕损伤愈合迁移实验分析长效抗增殖作用和抗迁移效应，并用Western blotting方法检测蛋白激酶Ca和c—myc蛋白水平的变化。结果芦荟大黄素能长时间抑制KB细胞的生长；划痕损伤愈合迁移实验结果显示，药物处理3d后进入划痕区域的细胞数为（6．2±0．2）个／mm^2，而对照组为（33．5±0．4）个／mm^2，差异有统计学意义（P〈0．05）；对照组细胞抑制蛋白激酶Cα和c—myc的水平较高，经芦荟大黄素处理后，均以剂量依赖方式下降。结论芦荟大黄素的抗增殖和抗迁移活性与抑制蛋白激酶C信号传导途径有关。

关键词：细胞生长过程细胞运动蛋白激酶C 芦荟大黄素

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长链非编码RNA的作用机制及其研究方法

遗传 2013年第3期35卷 269-280页

作者：夏天肖丙秀郭俊明宁波大学医学院生物化学与分子生物学研究所浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)通过多种机制发挥其生物学功能,这些机制包括基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等。lncRNA通过这些作用机制在不同水平进行基因表达调控。在研究lncRNA功能... 详细信息

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)通过多种机制发挥其生物学功能,这些机制包括基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等。lncRNA通过这些作用机制在不同水平进行基因表达调控。在研究lncRNA功能的过程中,研究方法的建立和应用起着非常重要的作用。目前用于lncRNA研究的主要方法有:微阵列、转录组测序、Northern印迹、实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应、荧光原位杂交、RNA干扰和RNA结合蛋白免疫沉淀等。文章着重介绍了3种前沿方法,即:在线快速预测RNA与蛋白质相互作用的catRAPID、RNA纯化的染色质分离(Chromatin isolation by RNA purification,ChIRP)以及非编码RNA沉默与定位分析技术(Combined knockdown and localization analysis of non-coding RNAs,c-KLAN)。

关键词：长链非编码RNA 作用机制基因表达调控研究方法

数字PCR定量检测血浆中环状RNA方法的建立

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生物化学与生物物理进展 2021年第6期48卷 721-726页

作者：阮垚郭俊明肖丙秀宁波大学医学院、浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211

生物标志物一直是医学领域的研究热点.目前主要以实时荧光定量PCR技术作为分子诊断的检测手段,用于大样本的核酸检测,但该技术具有限制性,会导致假阴性.作为第三代PCR的数字PCR技术,优化并提高了检测灵敏度,无需标准曲线实现绝对定量检... 详细信息

生物标志物一直是医学领域的研究热点.目前主要以实时荧光定量PCR技术作为分子诊断的检测手段,用于大样本的核酸检测,但该技术具有限制性,会导致假阴性.作为第三代PCR的数字PCR技术,优化并提高了检测灵敏度,无需标准曲线实现绝对定量检测,大大提高了检测的精准度,尤其是对于低表达RNA的检测,显得更为出色.本研究以hsacirc0061276为例,利用微滴式数字PCR EvaGreen染料法对血浆中hsacirc0061276的拷贝数进行绝对定量地检测,成功检测出胃炎和胃癌患者血浆中hsacirc0061276的具体拷贝数.因此,数字PCR作为新型检测技术在临床实际应用中有较大推广价值.

关键词：数字PCR 环状RNA 生物标志物

微小RNA对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的影响

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中华口腔医学杂志 2010年第3期45卷 152-154页

作者：肖丙秀郭俊明钟久昌宁波大学医学院组织胚胎教研室浙江315211 宁波大学医学院生化教研室浙江315211

目的探讨微小RNA（microRNA,miRNA）对体外培养的人舌鳞状细胞癌TeaS113细胞增殖的影响.方法用脂质体把miRNA-31和miRNA-139的类似物或抑制物分别导人人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别为实验组,脂质体试剂为对照组,然后用甲基噻唑基四... 详细信息

目的探讨微小RNA（microRNA,miRNA）对体外培养的人舌鳞状细胞癌TeaS113细胞增殖的影响.方法用脂质体把miRNA-31和miRNA-139的类似物或抑制物分别导人人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别为实验组,脂质体试剂为对照组,然后用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖情况.结果对照组吸光度值（A值）在24、48和72 h时分别为（0.125±0.002）、（0.169±0.002）和（0.216 4±0.004）;miRNA-31类似物可促进Tca8113细胞增殖,使其A值分别增至（0.136±0.001）（P〈0.001）、（0.186±0.004）（P〈0.001）和（0.249±0.012）（P〈0.01）;miRNA-139抑制物也使A值分别增加到（0.148±0.002）（P〈0.001）、（0.214±0.002）（P〈0.001）和（0.250±0.009）（P〈0.01）.与此相反,miRNA-31抑制物在48、72 h时抑制Tea8113细胞增殖,其A值分别降至（0.145±0.001）和（0.155±0.011）（P〈0.001）;mjRNA-139类似物在24、48 h也分别使A值降至（0.135±0.001）和（0.170±0.009）（P〈0.001）.结论 miRNA-31和miRNA-139在人舌鳞状细胞癌发生过程中起着重要作用,调整其活性有可能成为一种有效治疗口腔癌的新方法.

关键词：癌,鳞状细胞微小RNA 细胞生长过程

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核仁小RNA在肿瘤发生中的作用

中国生物化学与分子生物学报 2012年第12期28卷 1087-1092页

作者：肖丙秀夏天郭俊明宁波大学医学院生物化学与分子生物学研究所、浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211

核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)是一类真核细胞核仁中的60～300个核苷酸长度的非编码RNA,主要参与rRNA和其它小RNA转录后的成熟加工过程.它们与肿瘤的关系曾一度被人们所忽视,然而,近年来有关snoRNA新功能的研究证明,它们与肿... 详细信息

核仁小RNA(small nucleolar RNA,snoRNA)是一类真核细胞核仁中的60～300个核苷酸长度的非编码RNA,主要参与rRNA和其它小RNA转录后的成熟加工过程.它们与肿瘤的关系曾一度被人们所忽视,然而,近年来有关snoRNA新功能的研究证明,它们与肿瘤的发生、发展密切相关.snoRNA以多种方式参与肿瘤的发生:一些snoRNA(如:U50、SNORD12、SNORD12b、SNORD12c、SNORD44和h5sn2等)具有抑癌活性,而另一些snoRNA(如:SNORD33、SNORD66、SNORD76、SNORD112、SNORD113、SNORD114、SNORA42、U70C和ACA59B等)具有促癌活性.另外,编码snoRNA基因的异常也被发现与肿瘤的发生有关.因此,开展snoRNA与肿瘤关系的研究将有可能为肿瘤诊治提供新线索.

关键词：核仁小RNA 肿瘤肿瘤发生促癌活性抑癌活性

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微小RNA与胃癌关系的研究进展

中华病理学杂志 2008年第8期37卷 558-560页

作者：蒋振郭俊明肖丙秀宁波大学医学院生化教研室 315211

微小RNA（mircoRNA，miRNA）是22个核苷酸左右的非编码RNA。自从Lee等于1993年在秀丽线虫（C．elegans）体内发现了第一种呈时间特异性表达的miRNA以来，关于miRNA研究的新成果不断涌现。miRNA在生物个体发育、细胞增殖、分化、凋亡、... 详细信息

微小RNA（mircoRNA，miRNA）是22个核苷酸左右的非编码RNA。自从Lee等于1993年在秀丽线虫（C．elegans）体内发现了第一种呈时间特异性表达的miRNA以来，关于miRNA研究的新成果不断涌现。miRNA在生物个体发育、细胞增殖、分化、凋亡、脂类代谢、激素分泌及肿瘤发生等多种生理和病理过程中发挥着重要作用。目前，miRNA已成为肿瘤病理学研究领域中最受关注的生物大分子之一。由于胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，我们就miRNA与胃癌关系的研究进展综述如下。

关键词：非编码RNA 胃癌 miRNA 生物大分子肿瘤病理学特异性表达个体发育细胞增殖

竞争性内源RNA：一种全新的基因表达调控模式

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第12期28卷 1075-1081页

作者：夏天肖丙秀郭俊明宁波大学医学院生物化学与分子生物学研究所、浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211

竞争性内源RNA(ceRNA)假说是一种全新的基因表达调控模式:mRNA、假基因转录物和长链非编码RNA等转录物通过microRNA应答元件竞争结合相同的microRNA来调控各自的表达水平,从而影响细胞的功能.迄今为止,多家实验室已从生物信息学、细胞... 详细信息

竞争性内源RNA(ceRNA)假说是一种全新的基因表达调控模式:mRNA、假基因转录物和长链非编码RNA等转录物通过microRNA应答元件竞争结合相同的microRNA来调控各自的表达水平,从而影响细胞的功能.迄今为止,多家实验室已从生物信息学、细胞生物学和动物实验等层面验证了该假说.本文追溯了ceRNA假说提出的历程,讨论了ceRNA调控网络的影响因素,并提出了一些有待进一步完善的内容.ceRNA假说大大拓展了人类基因组中功能遗传信息的范畴,也为解析一些人类疾病发生的机制提供了新线索.

关键词：基因表达调控竞争性内源RNA(ceRNA) 转录物 microRNA应答元件

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非编码RNA与肿瘤关系的研究进展

中华医学遗传学杂志 2010年第1期27卷 56-59页

作者：李科事郭俊明肖丙秀周辉宁波大学医学院生化室浙江省宁波市315211

非编码RNA是指除mRNA、tRNA和rRNA以外，不编码蛋白质的RNA分子。它们在细菌、真菌和哺乳动物等许多生物体的重要生命活动中发挥着极广泛的调控作用。近年来研究表明，非编码RNA既可作为癌基因，也可作为抑癌基因，对肿瘤的发生、发展... 详细信息

非编码RNA是指除mRNA、tRNA和rRNA以外，不编码蛋白质的RNA分子。它们在细菌、真菌和哺乳动物等许多生物体的重要生命活动中发挥着极广泛的调控作用。近年来研究表明，非编码RNA既可作为癌基因，也可作为抑癌基因，对肿瘤的发生、发展产生重大的影响。同时，非编码RNA又有希望成为肿瘤诊断的标志物和肿瘤治疗的新靶点。作者综述了小干扰RNA和微小RNA等主要非编码RNA与肿瘤关系的最新研究进展。

关键词：非编码RNA 肿瘤小干扰RNA 微小RNA

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环状RNAs翻译功能研究方法的建立

中国细胞生物学学报 2021年第5期43卷 1021-1028页

作者：李哲肖丙秀宁波大学医学院浙江省病理生理学技术研究重点实验室宁波315211

环状RNAs(circular RNAs,circRNAs)翻译功能的发现改变了circRNAs作为非编码RNA的传统认识,研究circRNAs的翻译功能是circRNAs生物学功能研究领域中的一个新方向。该文旨在建立一种circRNAs翻译功能的研究方法。该研究基于胃癌患者癌组... 详细信息

环状RNAs(circular RNAs,circRNAs)翻译功能的发现改变了circRNAs作为非编码RNA的传统认识,研究circRNAs的翻译功能是circRNAs生物学功能研究领域中的一个新方向。该文旨在建立一种circRNAs翻译功能的研究方法。该研究基于胃癌患者癌组织和血浆circRNAs芯片检测结果,筛选同步变化的circRNAs,利用开放阅读框查找器(open reading frame finder,ORF finder)和编码潜力评估工具(coding-potential assessment tool,CPAT)分别检测上述circRNAs是否存在开放阅读框架(open reading frame,ORF)和翻译的可行性;随后使用内部核糖体进入位点查找器(internal ribosome entry site finder,IRES finder)和circRNADb数据库分析circRNAs是否存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES),进而采用基于序列特征的多物种m6A强大预测(robust prediction of N6-methyladenosine sites with sequence-based features in multiple species,M6AMRFS)和基于序列的RNA腺苷甲基化位点预测器(sequence-based RNA adenosine methylation site predictor,SRAMP)等工具筛选circRNAs是否含有m6A修饰位点;最后通过交集分析,筛选出可能具有翻译功能的circRNAs。结果显示,7种circRNAs可能具有翻译功能,其中hsacirc0001479同时具有IRES和m6A介导的翻译功能;hsacirc0001278、hsacirc0001439和hsacirc0000220可能通过IRES介导翻译,而hsacirc0001017、hsacirc0008351和hsacirc0004406可能通过m6A介导翻译。该研究为探讨circRNAs是否具有翻译功能提供了参考依据,对所选择的分析方法的可行性通过构建过表达质粒和Western blot加以验证。结果表明,该研究建立了一套具有可行性的circRNAs翻译功能研究方法。

关键词：环状RNAs 翻译生物学功能实验技术