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快速通道建设工程中跨线钢箱梁吊装技术的应用

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交通世界 2023年第4期 269-271页

作者：聂瑞强程鹏江西省公路桥梁工程有限公司江西南昌330008

为探究快速通道施工建设项目中使用的跨线钢箱梁吊装技术,结合江西某快速通道的施工实例,研究其钢箱梁的设计要点与安装技术,并分析施工要点。研究结果表明,跨线钢箱梁吊装技术能够有效缩短工期,节约成本,降低施工安全隐患,且能够满足... 详细信息

为探究快速通道施工建设项目中使用的跨线钢箱梁吊装技术,结合江西某快速通道的施工实例,研究其钢箱梁的设计要点与安装技术,并分析施工要点。研究结果表明,跨线钢箱梁吊装技术能够有效缩短工期,节约成本,降低施工安全隐患,且能够满足高速公路的通行需求。

关键词：快速通道跨线钢箱梁吊装承重支架

Pax610Neu基因对小鼠和绵羊黑色素细胞内黑色素生成的影响

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Pax610Neu基因对小鼠和绵羊黑色素细胞内黑色素生成的影响

作者：聂瑞强山西农业大学

学位级别：硕士

高度保守的PAX转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中有着重要的作用,其家族共有的PD结构域含有其与下游基因结合的主要位点,而PD结构域氦基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥着重要的作用。Pax610Neu基因含有P... 详细信息

高度保守的PAX转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中有着重要的作用,其家族共有的PD结构域含有其与下游基因结合的主要位点,而PD结构域氦基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥着重要的作用。Pax610Neu基因含有Pax6基因完整的PAI亚结构域。本文通过对只含有正常Pax6 PD结构域前102个氨基酸的Pax610Neu基因是否仍对黑色素细胞内的黑色素生成产生影响的研究,来探究Pax6对其下游基因的作用机理,并且对PAX转录因子家族共有的PD结构域和PAI亚结构域进行探究。本研究首先对小鼠PAX家族和小鼠Pax6基因进行相关的生物信息学分析。其次构建小鼠Pax610Neu真核表达载体,在小鼠和绵羊黑色素细胞中过量表达Pax610Neu基因,通过荧光定量PCR和western blot对调控黑色素生成的相关基因的表达量进行检测。最后对黑色素细胞的黑色素生成量进行测定。主要的研究内容和结果如下:1、通过Jaspar预测分析,可得MITF启动子-695处存在Pax6 PD结构域的结合位点,TYR启动子-873、-1133处存在Pax6PD结构域的结合位点,TYRP1启动子-629处存在Pax6PD结构域的结合位点,TYRP2启动子-655处存在Pax6PD结构域的结合位点。2、在小鼠黑色素细胞中过表达Pax610Neu后,与对照组相比,实验组MITFmRNA升高2.05倍(P<0.01),蛋白质升高1.7倍(P<0.01);TYR mRNA升高2.09倍,蛋白质升高 2 倍(P<0.05);TYRP1 mRNA 升高 2.93 倍(P<0.05),蛋白质升高 1.9 倍(P<0.01);TYRP2mRNA升高3.62倍(P<0.01),蛋白质升高1.37倍;同时实验组的黑色素含量是对照组黑色素含量的1.33倍(P<0.001)。在绵羊黑色素细胞中过量表达Pax610Neu后,与对照组相比,实验组MITF mRNA显著升高3.2倍(P<0.05),蛋白质显著升高8.24倍(P<0.001);TYRmRNA升高1.31倍,蛋白质升高2.09倍(P<0.001);同时实验组黑色素含量是对照组黑色素含量的1.22倍(P<0.05)。在小鼠和绵羊黑色素细胞中,过量表达小鼠Pax610Neu基因可以促进MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的表达,进而使黑色素细胞黑色素的生成量增加。

关键词：黑色素细胞 Pax6 Pax610Neu 黑色素

Foxj2基因对羊驼黑素细胞黑色素生成的影响

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山西农业科学 2023年第6期51卷 702-708页

作者：段志成董常生范瑞文谢建山杨玉静聂瑞强山西农业大学动物医学学院山西太谷030801 山西医科大学基础医学院山西太原030001

叉头框转录蛋白家族成员Foxj2(Forkhead Box J2)基因在U87细胞和U251细胞中与上皮-钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)的表达呈正相关,且CDH1参与黑色素的生成具有介导表皮-黑色素单位完整性的作用。为了验证Foxj2基因参与调节羊驼黑素细胞中黑... 详细信息

叉头框转录蛋白家族成员Foxj2(Forkhead Box J2)基因在U87细胞和U251细胞中与上皮-钙黏蛋白(E-cadherin,CDH1)的表达呈正相关,且CDH1参与黑色素的生成具有介导表皮-黑色素单位完整性的作用。为了验证Foxj2基因参与调节羊驼黑素细胞中黑色素的生成,采用PCR方法验证Foxj2基因在羊驼皮肤内的表达情况;采用生物信息学方法分析Foxj2与黑色素生成相关基因TYR以及Foxj2与黑色素的生成相关蛋白的关联性;合成Foxj2的siRNA和空载siRNA,构建沉默siRNA的羊驼黑素细胞模型,观察记录细胞的转染情况;使用Real-time PCR方法检测各组羊驼黑素细胞中Foxj2基因和黑色素生成相关基因TYR的mRNA变化;通过Western blot的方法检测比较各组细胞中Foxj2与TYR的蛋白水平的变化;提纯各组细胞的3种黑色素(总黑素、真黑素、褐黑素),使用酶标仪测各组细胞中3种黑色素的OD值并比较变化。结果表明,羊驼黑素细胞中检测到Foxj2基因表达;生物信息学分析得出,Foxj2基因在细胞内涉及运输氨基酸调控、生长因子等一系列作用,在Foxj2中存在的Forkhead结构域可以与TYR基因启动子存在结合位点;Real-time PCR结果显示,和NC组相比,沉默组中Foxj2的mRNA表达量极显著降低24990%,TYR的表达量显著升高35%;Western blot结果显示,沉默组Foxj2的蛋白相对表达水平极显著降低25%,TYR的蛋白相对表达水平极显著升高25%。酶标仪波长分析显示,与NC组相比,沉默组的总黑素相对表达水平极显著升高88.0%,真黑素相对表达水平极显著升高21.8%,褐黑素相对表达水平极显著升高21.6%。抑制羊驼黑素细胞中Foxj2基因的转录可以升高羊驼黑素细胞中黑色素的生成,并且对黑色素生成的主要调控基因TYR起促进作用,说明Foxj2基因可能在羊驼黑素细胞中对于黑色素的生成起着调控作用。

关键词： Foxj2 siRNA TYR 生物信息学羊驼黑素细胞黑色素

Nkx2-5基因的克隆及其与黑色素细胞黑色素生成相关性的研究

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中国畜牧杂志 2016年第15期52卷 12-14页

作者：聂瑞强石轶男杨玉静谢建山董常生山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 山西医科大学基础医学院山西太原030001

本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位... 详细信息

本实验旨在探究Nkx2—5基因在小鼠黑色素细胞中是否表达，同时通过生物信息学的方法预测其是否与调控黑色素生成的基因有相互作用。结果表明：转录因子Nkx2—5在小鼠黑色素细胞中表达，其编码的蛋白作为转录因子与下游基因作用的主要位点在144～196位氨基酸残基处，且其在黑色素生成中的关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子中都有作用位点，同时Nkx2—5蛋白与对神经嵴分化有重要影响的Hand1、Hand2存在相互作用，故可以推测转录因子Nkx2—5在黑色素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用，进而为从分子水平解释动物被毛白化的发病机理提供新的思路。

关键词： Nkx2—5 黑色素生物信息学

小鼠黑素细胞中过表达Oct-1对毛色主效基因的影响

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中国农业科学 2017年第4期50卷 764-773页

作者：杨玉静聂瑞强谢建山范瑞文许冬梅董常生山西农业大学动物科技学院山西医科大学基础医学院

【目的】克隆小鼠八聚体结合转录因子1(octamer-binding transcription factor 1,Oct-1)基因序列,探讨八聚体结合转录因子1在小鼠黑素细胞中过表达对毛色主效基因表达的影响及在毛色形成中的作用。【方法】使用实验室冻存的第5代小鼠黑... 详细信息

【目的】克隆小鼠八聚体结合转录因子1(octamer-binding transcription factor 1,Oct-1)基因序列,探讨八聚体结合转录因子1在小鼠黑素细胞中过表达对毛色主效基因表达的影响及在毛色形成中的作用。【方法】使用实验室冻存的第5代小鼠黑素细胞,通过普通PCR方法用引物以小鼠黑素细胞c DNA为模板克隆Oct-1基因c DNA序列,构建小鼠Oct-1克隆载体和真核表达载体;通过KEGG PATHWAY、NCBI、Transfec等软件对获得的序列进行生物信息学分析;在细胞水平通过细胞转染技术过量表达小鼠Oct-1;转染后使用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用分光光度计对小鼠黑素细胞中黑色素含量进行测定,并进行Real-time PCR实验检测转染后黑素细胞中毛色主效基因在m RNA水平表达量的变化,Western blot实验检测转染后细胞中MITF、TYR、TYRP-1和TYRP-2蛋白水平的变化。【结果】经测序和拼接最终获得长度为2 313 bp的小鼠Oct-1基因的c DNA序列;成功构建真核表达载体,载体上连有小鼠黑素细胞特异性TYRP-2基因启动子和一个启动报告基因绿色荧光蛋白;通过KEGG PATHWAY分析获得与毛色形成有关的34个候选基因,NCBI查找出34各个基因的启动子,由Transfec启动子分析软件找出Oct-1可以调节的毛色主效基因;细胞转染后,在荧光显微镜下可观察到黑素细胞带有绿色荧光说明转染效率明显;分光光度计检测显示,转染后小鼠黑素细胞中黑色素含量减少(P<0.05);荧光定量检测结果显示,小鼠黑素细胞中Oct-1 m RNA表达量显著增加(P<0.001),表明小鼠Oct-1转染效率显著,MITF m RNA显著降低至0.70倍(P<0.01),TCF m RNA显著降低至0.66倍(P<0.01),Ras、Frizzled、ERK2和TYRP-2 m RNA的表达未见变化,TYR m RNA显著增加至7.69倍(P<0.01),TYRP-1 m RNA升高至3.11倍(P<0.01),αMSH m RNA显著增加至18.49倍(P<0.001),AC m RNA显著增加至6.88倍(P<0.01),c-kit m RNA显著增加至18.75倍(P<0.001),ET1 m RNA增加至1.50倍(P<0.05),ETB-R m RNA显著增加至13.47倍(P<0.001),CAM m RNA增加至1.46倍(P<0.05);蛋白免疫印迹结果显示,小鼠黑素细胞中Oct-1转染组MITF蛋白显著降低至0.67倍(P<0.01),TYR蛋白增加至1.16倍(P<0.05),TYRP-1蛋白升高至1.15倍(P<0.05),TYRP-2蛋白未见变化。【结论】通过PCR和克隆技术及核酸测序技术获得了小鼠Oct-1基因全长2 313 bp的CDS区,经生物信息学分析找出Oct-1作用的毛色主效基因,过表达Oct-1后使黑素细胞中MITF和TCF的表达降低,TYR、TYRP-1、αMSH、AC、c-kit、ET1、ETB-R和CAM的表达增加。证实Oct-1可调节毛色主效基因的表达,参与黑色素合成的调节,改变毛色。

关键词：八聚体结合转录因子1 黑色素毛色主效基因 MITF TYR

小鼠毛囊不同生长周期中MITF下游色素相关基因的定位表达及相关性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2017年第2期33卷 198-206页

作者：赵兵令王海东陈天直于秀菊杨玉静许灿胡帅鹏聂瑞强董常生山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 河北征宇制药有限公司河北栾城051431

小眼畸形转录因子(MITF)不仅是黑色素细胞发育、增殖和存活的必要调节因子,而且对调节相关酶和黑素体蛋白表达来确保黑色素产生具有至关重要的作用。MITF下游色素相关基因在小鼠毛囊生长周期中的表达及相关性仍有待研究。HE染色结果表... 详细信息

小眼畸形转录因子(MITF)不仅是黑色素细胞发育、增殖和存活的必要调节因子,而且对调节相关酶和黑素体蛋白表达来确保黑色素产生具有至关重要的作用。MITF下游色素相关基因在小鼠毛囊生长周期中的表达及相关性仍有待研究。HE染色结果表明不同毛囊时期的小鼠毛囊呈现典型的组织形态学结构;免疫组织化学显示,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在不同毛囊生长周期中的毛基质及内外毛根鞘均有不同程度的阳性表达。黑色素测定结果表明,在毛囊生长初期和中期,碱性可溶性总黑色素(ASM)、真黑素(EM)以及褐黑素(PM)相对含量高于毛囊生长末期。蛋白免疫印迹结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2在毛囊生长初期和中期蛋白质相对水平明显高于毛囊生长末期。实时荧光定量PCR结果表明,MITF、GPNMB、OA1、TYR、TYRP2、PMEL在毛囊生长初期和中期,mRNA相对表达量显著高于毛囊生长末期。在不同毛囊生长周期小鼠皮肤的MITF下游色素相关基因表达存在显著差异,表明上述因子在维持黑色素细胞色素生成是不可或缺的因素。

关键词：小鼠小眼畸形转录因子毛囊免疫组化学

鸡十二指肠、法氏囊IFN-α基因的克隆和生物信息学分析

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兽医导刊 2016年第10期 201-202页

作者：石轶男聂瑞强山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

IFN-α是干扰素的一种,其对动物免疫力和抗病能力的增强有重要的作用,本试验首次通过PCR技术克隆鸡十二指肠和法氏囊IFN-α基因,并使用生物信息学的方法分析IFN-α基因和蛋白的理化性质和结构.结果显示,鸡十二指肠、法氏囊都有IFN-α基... 详细信息

IFN-α是干扰素的一种,其对动物免疫力和抗病能力的增强有重要的作用,本试验首次通过PCR技术克隆鸡十二指肠和法氏囊IFN-α基因,并使用生物信息学的方法分析IFN-α基因和蛋白的理化性质和结构.结果显示,鸡十二指肠、法氏囊都有IFN-α基因的表达,其是一种主要由α螺旋排列而成的蛋白质.

关键词：干扰素 IFN-α 生物信息学

STX17在不同毛色小鼠皮肤中差异表达与在毛囊中的定位

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第10期31卷 1109-1116页

作者：张丹瑾谢建山申艳范瑞文聂瑞强杨玉静于秀菊段力升曹靖董常生山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 山西医科大学晋祠学院山西太原030025 北京农业职业学院北京102442

突触融合蛋白17(STX17)是一种囊泡蛋白,参与细胞中物质的运输.为研究Stx17在不同毛色皮肤中是否存在差异表达及明确它在毛囊中的定位,进行了普通PCR、real-time PCR、免疫组化和蛋白免疫印迹实验对小鼠皮肤组织和体外培养黑素细胞的Stx1... 详细信息

突触融合蛋白17(STX17)是一种囊泡蛋白,参与细胞中物质的运输.为研究Stx17在不同毛色皮肤中是否存在差异表达及明确它在毛囊中的定位,进行了普通PCR、real-time PCR、免疫组化和蛋白免疫印迹实验对小鼠皮肤组织和体外培养黑素细胞的Stx17基因及蛋白的检测.普通PCR检测得出小鼠皮肤和黑色素细胞总RNA有Stx17 CDS区序列的表达;荧光定量检测显示,在白、灰、黑3种组织中Stx17均有表达,在灰色腹部表达量最高,是黑色皮肤的1.682倍,昆明鼠白色皮肤中表达量最低,是黑色皮肤的0.115倍;皮肤组织免疫组化结果显示,STX17表达于毛囊的上皮根鞘,且毛囊上段和中段表达量高于下段,黑色素细胞的免疫组化分析得出,STX17在黑色素细胞的细胞质和细胞膜上均有表达;蛋白免疫印迹结果显示,在白色、灰色和黑色皮肤均有STX17蛋白阳性条带且灰色皮肤中表达量最高,黑色皮肤次之,白色皮肤中表达量是最低的,这与荧光定量检测结果一致,体外培养的小鼠黑色素细胞中也有STX17蛋白阳性条带.实验结果表明,小鼠Stx17基因在皮肤组织、毛囊角化细胞以及黑色素细胞中均有表达,Stx17可能参与毛色的形成,且在小鼠腹部毛色变浅中起到了一定的作用.

关键词：突触融合蛋白17 不同毛色毛囊定位差异表达

小鼠Oct-1基因CDS区克隆与生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2016年第8期43卷 1960-1966页

作者：杨玉静聂瑞强谢建山范瑞文董常生山西农业大学动物科技学院太谷030801 山西医科大学基础医学院太原030001

为研究小鼠Oct-1基因的生物学特性,试验扩增小鼠黑色素细胞中Oct-1基因CDS区序列,并运用生物信息学软件分析小鼠Oct-1基因序列的特性、编码蛋白理化性质、亚细胞定位、靶基因及保守性结构域等,从而预测其是否调控黑色素的生成。结果表明... 详细信息

为研究小鼠Oct-1基因的生物学特性,试验扩增小鼠黑色素细胞中Oct-1基因CDS区序列,并运用生物信息学软件分析小鼠Oct-1基因序列的特性、编码蛋白理化性质、亚细胞定位、靶基因及保守性结构域等,从而预测其是否调控黑色素的生成。结果表明,小鼠Oct-1基因大小为2 313bp,编码蛋白质的分子式C3425H5606N976O1163S15,是一个不稳定可溶性蛋白质,二级结构以无规卷曲和α-螺旋为主,亚细胞定位主要分布在细胞核,推测其可能在能量代谢和辅因子的生物合成过程中发挥信号转导和转录因子调控的作用;Oct-1基因在小鼠黑色素细胞中表达,其编码的蛋白含有一个保守的POU结构域和一个保守的同源域,参与调控13个黑色素形成相关基因转录表达,在黑色素生成关键基因MITF、TYR、TYRP1、TYRP2的启动子上存在Oct-1转录因子的作用位点,Oct-1蛋白质还可能与Brf2、Pou2af1、Tbp等蛋白相互作用调控毛色基因表达,故可以推测转录因子Oct-1在黑素细胞的黑色素生成中发挥着重要的作用,为研究毛色形成机制提理论依据。

关键词： Oct-1基因黑色素细胞基因克隆生物信息学