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猪瘟病毒中国标准强毒株——F114株全长cDNA的构建

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微生物学报 2001年第4期41卷 452-456页

作者：聂玉春柯叶艳陈建国丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

应用RT PCR技术 ,分段克隆了猪瘟病毒中国标准强毒株F1 1 4株的全基因组 ,经测序验证 ,用DNAman软件比较分析与其它几个代表毒株的同源性 ,发现与Brescia、Alfort及C株核苷酸序列同源性分别为 96 80 % ,86 0 3%和 95 70 % ,氨基酸序列... 详细信息

应用RT PCR技术 ,分段克隆了猪瘟病毒中国标准强毒株F1 1 4株的全基因组 ,经测序验证 ,用DNAman软件比较分析与其它几个代表毒株的同源性 ,发现与Brescia、Alfort及C株核苷酸序列同源性分别为 96 80 % ,86 0 3%和 95 70 % ,氨基酸序列同源性分别为 98 54% ,93 33%和 97 41 %。将各段cDNA连接到pGEM T和pBluescriptⅡsk+质粒 ,得到两个亚克隆sk 0 1 64(即sk+质粒中插入片断为 1～ 6441nts,依次类推 )和sk 641 2 2 ,再将两个亚克隆连接成sk 1 2 2 97,即CSFV全长cDNA克隆。

关键词：猪瘟病毒全长cDNA 序列同源性

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陆龟疱疹病毒对中华鳖不致病

畜牧与兽医 1999年第S1期31卷 3-4页

作者：聂玉春陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095

用在龟心细胞系(TortoiseHeartCellLine,THC)上增殖的陆龟疱疹病毒(Testudoherpesvirus,THV),分别腹腔接种巴西彩龟(Trachemysscriptasliders)和中华鳖(Trionyxsinensis)。水温21～28℃,饲养82d。感染彩龟出现明显的呼吸道症状及眼睑肿胀,继而死亡,取死亡彩龟内脏匀浆,用THC分离病毒,出现与接种THV完全一致的CPE。接种THC冻融液的对照彩龟正常。中华鳖饲养115d,对照及感染鳖均无异常。

关键词：陆龟疱疹病毒龟心细胞系中华鳖人工感染

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不能离体增殖病毒的鉴定及分类

中国兽医杂志 1997年第12期23卷 39-40页

作者：聂玉春陆承平南京农业大学动物医学院

不能离体增殖病毒的鉴定及分类聂玉春陆承平（南京农业大学动物医学院，江苏２１００９５）关于病毒的分类，多年来一直是困扰微生物学的难题，特别是不能离体增殖病毒，通过常规的分类方法很难得到满意的结果。随着基因克隆、载体表达... 详细信息

不能离体增殖病毒的鉴定及分类聂玉春陆承平（南京农业大学动物医学院，江苏２１００９５）关于病毒的分类，多年来一直是困扰微生物学的难题，特别是不能离体增殖病毒，通过常规的分类方法很难得到满意的结果。随着基因克隆、载体表达及ＰＣＲ技术等的发展，使得这一难题...

关键词：病毒鉴定分类

由标准强毒F114株全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒

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科学通报 2003年第10期48卷 1059-1063页

作者：聂玉春陈建国丁明孝北京大学生命科学学院细胞生物学与遗传学系北京100871

通过RT-PCR获得猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)强毒株cF114株(中国标准强毒F114株经PK-15细胞增殖)全长基因组cDNA并测序. 与已知其他几株CSFV代表毒株F114, Brescia, Alfort和C株的核苷酸同源性分别为99.41%, 96.80%, 86.03%和95.70%; 氨基酸同源性分别为99.28%, 98.54%, 93.33%和97.41%. 将获得的各基因片段按病毒基因组顺序连接成全长cDNA, 插入pMC18质粒SalⅠ/ XbaⅠ之间, 得到含病毒全长基因组的重组质粒pMC12297. 用T7 RNA聚合酶进行体外转录, 转录出的RNA转染PK-15细胞, 细胞上清液经扩增后, 测定上清液中病毒滴度. 质粒来源的CSFV(vM12297)在抗原反应性和复制能力方面与父代病毒相似. 将疫苗毒C株囊膜蛋白基因E01和E2分别替换到pMC12297相应位置, 获得嵌合体基因组质粒pM/CE01和pM/CE2, 体外恢复获得嵌合体病毒vM/CE01和vM/CE2. 两种嵌合体病毒均能感染PK-15, SK-6和原代猪睾丸细胞, 间接免疫荧光检测显示较vM12297弱, 在PK-15细胞上滴度达到8×105 F-PFU/mL. 这一工作为进一步研究和探讨CSFV增殖与致弱的机理提供了重要的实验和理论资料.

关键词：猪瘟病毒全长cDNA克隆感染性RNA 转染体外转录氨基酸核苷酸

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水疱性口炎病毒L蛋白N端存在新的定位信号

科学通报 2003年第11期48卷 1191-1196页

作者：聂玉春柯叶艳王在于翔邓宏魁丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)L蛋白是该病毒复制酶的主要成分,分子量约为241kD。通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式,将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游,在多种动物细胞中瞬时表达了重... 详细信息

水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)L蛋白是该病毒复制酶的主要成分,分子量约为241kD。通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式,将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游,在多种动物细胞中瞬时表达了重组的融合蛋白。荧光显微镜观察结果显示,仅保留N端96个氨基酸残基或缺失N端120个以上残基时,融合蛋白均匀分布于整个细胞质中,而含有N端120个以上残基时,融合蛋白呈点状或局部分布于核周围部位。截取L蛋白96～120氨基酸片段,连接到GFP蛋白氨基端,同样融合蛋白亦特异性地分布到核周围局部区域.进一步研究含定位信号的25个残基片段发现,仅13个残基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108～120)就具有定位功能,缺失D或V均导致定位信号完全丧失。含有这13个残基的GFP融合蛋白,在多种细胞和不同表达模式下均显示了同样的分布规律,表明L蛋白N端这种定位信号具有独立的定位功能,并且在不同细胞中是保守的。

关键词：水疱性口炎病毒 L蛋白复制酶定位转染

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《两位数加两位数(口算)》教学实录

小学教学设计 2007年第Z2期 90-91页

作者：聂玉春甘肃天水市平南中心小学

教学内容人教版《数学》二年级(上册)第10～11页。教学目标1.使学生掌握两位数加两位数的口算方法。2.培养学生积极思考、大胆探索的良好品质。

关键词：教学实录孙悟空花果山发散思维

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猪瘟病毒的形态结构及侵染机理的研究

电子显微学报 2002年第5期21卷 555-556页

作者：聂玉春王镇周海霞邓宏魁丁明孝北京大学生命科学院北京100871

猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)，属黄病毒科，瘟病毒属成员，是严重危害养猪生产的主要病原体之一。CSFV是具有囊膜的正链RNA病毒。除基因组RNA外，还有衣壳蛋白C和三种囊膜蛋白E0，E1和E2组成。一般认为病毒侵染细胞是... 详细信息

猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)，属黄病毒科，瘟病毒属成员，是严重危害养猪生产的主要病原体之一。CSFV是具有囊膜的正链RNA病毒。除基因组RNA外，还有衣壳蛋白C和三种囊膜蛋白E0，E1和E2组成。一般认为病毒侵染细胞是通过囊膜蛋白与细胞表面受体相互作用形成Infecosome后进入宿主细胞。然而对CSFV感染细胞的细节当不甚明了。本项研究在观察CSFV形态结构与发生过程的基础上对其侵染细胞的机理进行了初步研究。

关键词：猪瘟病毒形态结构侵染机理 CSFV

特异寡聚核苷酸对猪瘟病毒在细胞中增殖抑制作用的研究

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中国病毒学 2001年第3期16卷 270-274页

作者：周鹏程聂玉春曹圻陈建国丁明孝北京大学生命科学学院北京100871

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性。实验结果表明针对CS FV 5’端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用 ,而针对CSFV 3’端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑... 详细信息

本实验探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗CSFV新型药物的可行性。实验结果表明针对CS FV 5’端非编码区NS3蛋白丝氨酸蛋白酶功能区的寡聚核苷酸对CSFV复制均有显著的抑制作用 ,而针对CSFV 3’端非编码区寡聚核苷酸仅有轻微抑制作用 ,5′端寡聚核苷酸具有最佳抑制作用 ,同时发现相应序列中正义聚核苷酸的作用要优于反义寡聚核苷酸 ;脂质体介导转染能显著提高寡聚核苷酸对CSFV复制的抑制作用。这些初步结果也提示 ,CSFV 5’端和 3’端非编码区对CSFV复制的重要性和作用有所不同。

关键词：猪瘟病毒寡聚核苷酸抗病毒复制抑制作用

两种消毒杀菌类药物体外对龟疱疹病毒的灭活检验

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海洋水产研究 1998年第2期19卷 10-13页

作者：聂玉春陆承平南京农业大学动物医学院南京210095

用微量板细胞培养法测试了两种水产用的消毒杀菌类药物SB（含40％±2％季胺盐类物质）和SSN（含浓度为100g／L的甲基氯胺类物质）对龟疱疹病毒（THV）的灭活作用，14d后记录THV在龟心细胞株的细胞致病变（CPE）情况（Marschangetal．199... 详细信息

用微量板细胞培养法测试了两种水产用的消毒杀菌类药物SB（含40％±2％季胺盐类物质）和SSN（含浓度为100g／L的甲基氯胺类物质）对龟疱疹病毒（THV）的灭活作用，14d后记录THV在龟心细胞株的细胞致病变（CPE）情况（Marschangetal．1997），结果发现SB和SSN均有体外灭活THV的作用。根据Reed和Muench法计算两种药物的半数保护量（PD50）分别为6．76和3．91。

关键词：灭活水产药物龟疱疹病毒