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重组人白介素2-穿孔蛋白免疫毒素的制备及功能活性

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西安医科大学学报 1997年第3期18卷 317-320页

作者：王一理司履生耿宜萍司华新申文红毕红西安免疫病理学研究室西安710061

以人白细胞介素2为载体，人Perforin为毒素，利用基因工程技术构建成pBV221／IL2－Perforom表达质粒，在大肠杆菌中成功地表达出IL2－Perforin重组毒素，SDS－PAGE获得分子量的20KD的蛋白条带，细胞毒测定对活化的人T淋巴细胞和IL2依赖... 详细信息

以人白细胞介素2为载体，人Perforin为毒素，利用基因工程技术构建成pBV221／IL2－Perforom表达质粒，在大肠杆菌中成功地表达出IL2－Perforin重组毒素，SDS－PAGE获得分子量的20KD的蛋白条带，细胞毒测定对活化的人T淋巴细胞和IL2依赖株CTLL2有明显的杀伤作用，并且明显抑制同种混合淋巴细胞反应，这是一种性质全新的重组毒素，其杀伤机制不同于以往所用的毒素（PE，DT等）。这种新的重组毒素不仅有益于器官移植，也可能对自身免疫病的治疗带来新的方法。

关键词：重组毒素 IL2-Perforin 器官移植免疫毒素

THE EUKARYOTIC EXPRESSION OF HUMAN PERFORIN PROTEIN AND THE ESTABLISHMENT OF HYBRIDOMAS PRODUCING ANTI-HUMAN PERFORIN PROTEIN

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Academic Journal of Xi'an Jiaotong University 2001年第1期13卷 77-80页

作者：刘培军王一理耿宜萍阎晓彩司履生 Institute of Immunopathology Med. Sch. of Xi'an Jiaotong Univ. Xi'an 710061 China

Objective To prepare the monoclonal antibody against human perforin(HP). Methods Recombi- nant eukaryotic expression plasmid pCDM8-HP was extracted and purified, and the BALB/C mice were immunized with the plasmid. The hybridomas producing anti-HP McAbs were established by using hybridoma technique, then the specificity of the McAbs was identified by using immunocytochemical technique and Western blot. Results Three hy- bridoma cell lines secreting McAbs against human perforin were established, and the three McAbe showed positive only with LAK cells containing human perforin protein, and showed negative with inactive human peripheral blood lymphocytes (PBLs). The subclasses of the three McAbs were determined as IgG2bK. Western blot results showed that the three McAbs recognized a specific band of LAK cell lysateds with molecular weight of 70.0Kd. Conclusion The three hybridoma cell lines secreting McAbs against human perforin were established and the secreted McAbs were specific.

关键词： naked gene immunization human perforin(HP) monoclonal antibody(McAb)

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TIL治疗人体进展期肿瘤后的免疫学监测

中国肿瘤生物治疗杂志 1996年第3期3卷 207-210页

作者：王一理宋建明耿宜萍司履生姚德茂潘承恩西安医科大学免疫病理研究室西安710061 西安医科大学第一附属医院外科西安710061

对8例晚期恶性肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分离、培养至l0°细胞以上．再重输给病人，同时应用小剂量IL-2,在治疗前一周及治疗后一个月采集病人外周静脉血、分离单个核细胞作为效应细胞，选用一组不同类型人肿瘤细胞株为靶细胞．以MTT... 详细信息

对8例晚期恶性肿瘤的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)分离、培养至l0°细胞以上．再重输给病人，同时应用小剂量IL-2,在治疗前一周及治疗后一个月采集病人外周静脉血、分离单个核细胞作为效应细胞，选用一组不同类型人肿瘤细胞株为靶细胞．以MTT比色法测定效应细胞对靶细胞的杀伤活性，同时分析效应细胞表型变化．结果显示．治疗后对不同靶细胞的杀伤活性均有不同程度提高。最有趣的是对与病人有相同组织学类型的瘤细胞的杀伤活性显著提高(43升高到1249溶解单位p<0．06)，用T4、T8单抗双染流式细胞仪分析表明T4、T8细胞表面荧光强度明显增强(T4：l9→3．98．T8：445→7．2 p<0．06)。提示TIL能够明显上调病人的免疫状况．其作用途径除直接的细胞毒效应外．免疫调节作用可能是其主要效应途径。

关键词： TIL 治疗人体进展期肿瘤免疫学监测过继性免疫治疗恶性肿瘤

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蛋白质组学方法鉴定卵巢癌转移相关蛋白

蛋白质组学方法鉴定卵巢癌转移相关蛋白

IN VITRO CO-STIMULATORY ACTIVITY OF HUMAN B7.2(IgV+C) PROTEIN PRODUCED BY ENGINEERED BACTERIA

中华医学会病理学分会2007年学术年会暨第九届全国病理大会

作者：周乐王燕张盈涛耿宜萍杨筱凤司履生王一理西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学癌症研究所

目的探讨卵巢癌转移的蛋白分子机制。方法采用双向电泳(2DE)对比分析具有相同来源、不同转移能力的卵巢癌细胞株 HO8910 和 HO8910pm 间的蛋白表达差异,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS) 鉴定差异蛋白。结果 2DE 分... 详细信息

目的探讨卵巢癌转移的蛋白分子机制。方法采用双向电泳(2DE)对比分析具有相同来源、不同转移能力的卵巢癌细胞株 HO8910 和 HO8910pm 间的蛋白表达差异,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS) 鉴定差异蛋白。结果 2DE 分析发现有39种蛋白的表达水平在两个细胞株之间变化达2倍以上, MALDI-TOF-MS 鉴定出其中18种蛋白,涉及细胞凋亡、细胞外基质、细胞骨架、生长因子、糖酵解、蛋白质代谢和免疫系统等领域。结论不同生物学特征的两株卵巢癌细胞的确表现出不同的蛋白表达谱,且与其生物学特征相适应。这些差异表达蛋白可能参与调节肿瘤转移过程。对这些蛋白的深入研究将可能发现肿瘤治疗的新靶点。

关键词：卵巢癌肿瘤转移蛋白质组

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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Academic Journal of Xi'an Jiaotong University 2001年第1期13卷 16-19页

作者：闫晓彩司履生王一理刘培军来宝长耿宜萍 Institute of Immunopathology Med. Sch. of Xi'an Jiaotong Univ. Xi'an 710061 China

Objective To express human B7. 2 extracellular domain with prokaryote expression system and to evaluate its biological activity in vitro. Methods PCR was used to amplify the extracellular region of human B7. 2 which contained both the IgV and IgC domains. The recombinant PGEX-4T-3/hB7. 2 (IgV+C) was obtained by cloning the PCR product into a prokaryote expression plasmid PGEX-4T-3 and was transformed into the host strain of DH5-a. Tke fusion protein consisted of GST and hB7. 2(IgV+C) was identified by SDS-PAGE and Western blotting. T cell activation was observed by exposing purified T lymphocytes to the fusion protein and [3H]-TdR incorporation with the presence of the first signal imitated hy anti-CD3 antibody. Results The fusion protein GST-hB7. 2 (IgV+ C) was produced and detected in inclusive body form from engineered bacterial cells. With the first signal existed,T lymphocytes proliferated when it was co-stimulated by the fusion protein. Conclusion These results indicated that the functional human B7. 2(IgV+C) fusion protein can be produced in bacterial cells and the fusion protein displays the co-stimulatory activity in T lymphocytes activation.

关键词： human B7. 2/CD86 co-stimulation fusion protein gene expression

MAPPING EPITOPES OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 PROTEIN WITH A PHAGE DISPLAY EPITOPE LIBRARY

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Journal of Pharmaceutical Analysis 1998年第2期12卷 109-114页

作者：刘天菊司履生王一理孙向乐杨居祥耿宜萍 Department of Immunopathology Xi'an Medical University Xi'an 710061 China

The objective of this study is to map epitopes on HPMAPV16 L1 protein and provide information to the design of HPV16 prophylactic peptide vaccine. The epitopes on L1 protein were screenedby polyclonal and two monoclonal antibodies (BS and F4G3) against RPV16 L1 protin from a 6-merfd phage display epitope library with the method or immuuo-afrinity screening (Biopauuing). Aferthree rounds or Bio-Panning, the Positive phages were detected by L1 antibodies again with *** positive phages reacted strongly with L1 antibodies were then identified by DNA *** mimotopes have been screened by polycloual and two monoclonal antibodies. The mimotope(LSLFSC) reacted with mouoclonal antibody B8 showed 50% pomology with the sequence 270275a. a (DSLFFY) of prototype HPV16 L1. Another mimotope (LTSSYS) reacted with polyclonalantibodies had 66% pomology with the L1 sequence 516~521a. A(TTSSTS), also a mimotope (DRWDRF) was found had the bomologic RF with the known L1 sequence 441 ~446a. a. The mimotopesLSLFSC and DRWDRF were adjacent to the epitopes at 267~269a. a and 422~441 a. a reported byother researchers Previously. Our results suggest that there might be a batch of epitopes on HPV16L1 ppotein, and the predominant epitopes of HPV16 L1 protein are located in the above two domains. These results will be helpful for design or HPV16 prophylactic peatide vaccines and HPVpolyvalent vaccines.

关键词： HPV16 L1 protein phage display epitope library antigeuic epitope

同系细胞瘤苗对低免疫原性小鼠黑色素瘤治疗作用的研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2002年第1期9卷 60-61页

作者：齐旭周伊王一理马军闫晓彩韩俊宏来宝长尚宁宽耿宜萍司履生西安交通大学医学校区生命科学与技术学院免疫病理研究室西安710061

肿瘤的主动特异性免疫治疗(肿瘤疫苗)是极具吸引力的治疗方法.目前虽已相继建立了一系列在动物模型中被证明有效的细胞瘤苗设计方案,但在临床上所取得的疗效大多有限.其中一个重要的原因是人类自发性肿瘤多为低免疫原性,因此,人们力求... 详细信息

肿瘤的主动特异性免疫治疗(肿瘤疫苗)是极具吸引力的治疗方法.目前虽已相继建立了一系列在动物模型中被证明有效的细胞瘤苗设计方案,但在临床上所取得的疗效大多有限.其中一个重要的原因是人类自发性肿瘤多为低免疫原性,因此,人们力求发展一种佐剂,以增强瘤苗的免疫原性.迄今为止,在所试过的佐剂中仍以BCG最优,且制备简单,但BCG可引起人体组织坏死破溃,难以在人体应用.

关键词：同系细胞瘤苗低免疫原性小鼠黑色素瘤治疗作用研究肿瘤疫苗佐剂

白血病瘤苗对荷瘤小鼠细胞免疫功能影响的研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2001年第4期8卷 269-273页

作者：赵万红何爱丽张王刚王一理耿宜萍田玮宋长琐西安交通大学第二医院血液内科西安710004 西安交通大学医学院免疫病理研究室

目的 :探讨白血病细胞疫苗主动免疫治疗在血液恶性肿瘤中的作用。方法 :建立红白血病荷瘤小鼠 ,用自制的 3种不同的白血病细胞瘤苗进行主动免疫治疗 ,用MTT比色法测其治疗 2周和 4周的小鼠Mφ和CTL的杀伤活性 ,并与对照组相比较。结果 ... 详细信息

目的 :探讨白血病细胞疫苗主动免疫治疗在血液恶性肿瘤中的作用。方法 :建立红白血病荷瘤小鼠 ,用自制的 3种不同的白血病细胞瘤苗进行主动免疫治疗 ,用MTT比色法测其治疗 2周和 4周的小鼠Mφ和CTL的杀伤活性 ,并与对照组相比较。结果 :①随着肿瘤细胞在小鼠体内的增长 ,小鼠的细胞免疫功能受到严重抑制 ,特异性细胞免疫功能的抑制滞后于非特异性细胞免疫功能。②灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗在提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能方面 ,尤其是特异性细胞免疫功能方面优于灭活肿瘤细胞 +IFA肿瘤疫苗 ,而仅含灭活肿瘤细胞的疫苗作用不明显。结论 :灭活肿瘤细胞 +IFA +细胞因子 (rGM CSF +rIL 2 +rIL 6 )的肿瘤疫苗在血液恶性肿瘤的特异性主动免疫治疗中很有潜力。

关键词：特异性主动免疫治疗白血病肿瘤疫苗巨噬细胞细胞毒性T淋巴细胞小鼠

肿瘤浸润淋巴细胞在泌尿系统肿瘤治疗中的应用

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中华外科杂志 1995年第12期33卷 718-718页

作者：王武生王一理何辉司履生南勋义张越耿宜萍王亚峰西安医科大学第一附属医院泌尿外科西安医科大学免疫病理研究室

肿瘤浸润淋巴细胞在泌尿系统肿瘤治疗中的应用王武生，王一理，何辉，司履生，南勋义，张越，耿宜萍，王亚峰我院于１９９２年５月至１９９４年１０月应用肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）治疗膀胱移行细胞癌术后１３例和肾癌术后３例，随访... 详细信息

肿瘤浸润淋巴细胞在泌尿系统肿瘤治疗中的应用王武生，王一理，何辉，司履生，南勋义，张越，耿宜萍，王亚峰我院于１９９２年５月至１９９４年１０月应用肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）治疗膀胱移行细胞癌术后１３例和肾癌术后３例，随访半年至２年，未见复发及转移，患者的...

关键词：泌尿系统肿瘤肿瘤浸润细胞