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基于ferritin纳米载体的抑制素α亚基的多克隆抗体的制备

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基因组学与应用生物学 2024年第5期43卷 877-889页

作者：韩璐宋新辉徐佳寅张家宁覃朝斌羊玉凤刘庆友李志鹏广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 佛山科学技术学院生命科学与工程学院动物分子设计与精准育种广东省重点实验室佛山528225

为了制备高效价和多动物适用性的抑制素α(inhibinα,INH-α)多克隆抗体,通过生物信息学分析INH-α物种同源保守性,并以pET-32α为骨架,构建INH-α和INH-α-Ferritin表达载体,原核表达纯化后的重组蛋白用于免疫日本大耳兔,采用间接ELIS... 详细信息

为了制备高效价和多动物适用性的抑制素α(inhibinα,INH-α)多克隆抗体,通过生物信息学分析INH-α物种同源保守性,并以pET-32α为骨架,构建INH-α和INH-α-Ferritin表达载体,原核表达纯化后的重组蛋白用于免疫日本大耳兔,采用间接ELISA方法测定兔血清中抗体效价。结果表明,本研究成功构建了INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,在0.4 mmol/L IPTG、37℃诱导6 h的条件下,分别获得了35 kDa和50 kDa包涵体形式的重组蛋白。通过免疫获得了高效价的兔抗多克隆抗体,INH-α-Ferritin抗血清效价达到1∶19531250。生物信息学分析结果显示INH-α在哺乳动物间的同源性高、保守性强。本研究成功构建INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,并通过INH-α-Ferritin显著提高多克隆抗体的效价,为提高哺乳动物家畜繁殖力的研究奠定基础。

关键词：抑制素α 生物信息学原核表达多克隆抗体

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circRBBP7促进成肌细胞增殖和分化及小鼠肌损伤修复的分子机制研究

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circRBBP7促进成肌细胞增殖和分化及小鼠肌损伤修复的分子机制研究

作者：羊玉凤广西大学

学位级别：硕士

了解骨骼肌的发育和生长调节机制是动物遗传学和动物生殖生理的重点,circRNA已被发现通过调节基因转录和转录后翻译在肌肉发生过程中发挥关键作用。然而,circRNA对骨骼肌发育的潜在调控机制仍未完全阐明。在本研究中,我们鉴定了一种新的... 详细信息

了解骨骼肌的发育和生长调节机制是动物遗传学和动物生殖生理的重点,circRNA已被发现通过调节基因转录和转录后翻译在肌肉发生过程中发挥关键作用。然而,circRNA对骨骼肌发育的潜在调控机制仍未完全阐明。在本研究中,我们鉴定了一种新的circRNA-circRBBP7,并通过构建细胞模型和肌损伤模型系统地研究了其对肌肉发育的调控作用。研究发现circRBBP7是影响肌细胞发生的潜在调控因子,可以作为肉牛遗传育种的候选标记基因,并有望应用于肌损伤相关疾病的治疗。具体研究结果如下:***7的环状结构检测和编码能力研究。对circRBBP7使用RNase R进行消化,发现circRBBP7具有稳定且不容易被降解的环状RNA结构特点,Sanger测序证实circRBBP7具有环状连接区。进一步制备circRBBBP7的兔源多克隆抗体,通过Western blot检测发现circRBBP7可编码一个约13 k Da的蛋白质。成肌细胞免疫荧光和FISH结果显示,circRBBP7存在于细胞核和细胞质中。说明circRBBBP7是一个可编码的circRNA。***7对黄牛成肌细胞增殖和分化的影响及其分子调控机制的研究。在黄牛成肌细胞中过表达circRBBP7,可以显著促进成肌细胞增殖和分化标记基因的表达;CCK8和Ed U检测circRBBP7可以促进成肌细胞增殖;分化期细胞免疫荧光结果显示,circRBBP7可以提高成肌细胞分化肌管的效率。通过RNA-seq测序发现,过表达circRBBP7可以显著上调MDM2等成肌细胞发育相关基因的表达。KEGG富集分析表明,差异表达基因(DEG)主要富集在p53和PI3K-Akt信号通路。此外,circRBBP7的过表达下调了分化期慢肌形成相关的基因。Co-IP质谱分析发现,circRBBP7与VEGFR-1靶向特异性结合。结果说明,过表达circRBBP7可以通过靶向VEGFR-1上调MDM2的表达并促进p53的降解,随后CDK2、Cyclin D1以及Myo D的表达量增加并最终促进增殖和分化。***7在C57小鼠肌损伤修复中的应用。构建C57BL/6小鼠的肌肉损伤模型,发现在损伤组织中过表达circRBBP7,其损伤肌肉纤维更紧密,肌肉纤维更完整。在肌损伤修复第14天时,过表达circRBBP7的损伤修复肌肉组织中Myo D表达量比对照组高100倍。并通过同源荧光双标,检测肌损伤修复第14天的肌肉组织,发现体内转染circRBBP7的肌肉组织中,快肌纤维数量显著多于慢肌纤维。说明circRBBP7可以促进骨骼肌损伤修复和再生。综上所述,本研究发现circRBBP7具有编码多肽的能力,其编码肽与VEGFR-1靶向互作,MDM2的表达被circRBBP7和VEGFR-1显著调节,MDM2是p53信号通路中的一个关键调控基因,影响p53的稳定性,p53信号通路的下游基因CDK2和Cyclin D1是调节肌肉发育的关键基因,因此,我们推测circRBBP7参与MDM2/p53信号通路,进而促进黄牛成肌细胞增殖和分化。同时,circRBBP7可以显著促进C57BL/6小鼠骨骼肌损伤的修复和再生。本研究为分子调控技术在家畜遗传育种中的应用提供参考,并为促进现代生物技术在优质畜牧种质资源的开发与利用提供理论基础。

关键词： circRBBP7 牛成肌细胞增殖和分化肌损伤

舍饲与放牧黑山羊血清生化指标及差异代谢物解析

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基因组学与应用生物学 2022年第9期41卷 1870-1880页

作者：王艳羊玉凤施雯冯彤黄孔威崔奎青李志鹏韦明松刘庆友广西大学动物科学技术学院亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 佛山科学技术学院生命科学与工程学院动物分子设计与精准育种广东省重点实验室佛山528225 广西农业职业技术大学畜牧研究院南宁530012

不同饲养方式对黑山羊(Capra hircus‘Black goat’)机体代谢、肉品质和风味有着较大影响,市场上放牧的马山黑山羊肉价格比舍饲的高约30%。为探讨不同饲养方式对黑山羊血清代谢的影响,本研究采集并制备了60只6月龄马山黑山羊血清,其中... 详细信息

不同饲养方式对黑山羊(Capra hircus‘Black goat’)机体代谢、肉品质和风味有着较大影响,市场上放牧的马山黑山羊肉价格比舍饲的高约30%。为探讨不同饲养方式对黑山羊血清代谢的影响,本研究采集并制备了60只6月龄马山黑山羊血清,其中放牧与舍饲各30只,系统分析了其血清生化指标和非靶向代谢物的差异。结果表明:舍饲组血清中总胆固醇(cholesterol,CHOL)的含量和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL_C)的含量均极显著高于放牧组的(P羊的不饱和脂肪酸占比更低,风味物质含量更多。研究结果为揭示放牧马山黑山羊优质风味形成的分子机制、基于代谢组分析鉴别黑山羊饲养方式,以及通过血清代谢物来评估黑山羊肉质和风味研究奠定了基础。

关键词：马山黑山羊舍饲与放牧血清生化指标血清代谢组风味物质

新型冠状病毒RBD基因序列特征分析、原核表达及免疫原性研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第7期 7-14,129-131页

作者：张家宁韩璐胡金玲羊玉凤刘庆友李志鹏崔奎青广西大学动物科学技术学院南宁530004

为了探究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白用于制备亚单位疫苗的免疫原性,试验对不同国家的15种SARS-CoV-2 RBD序列的同源性和保守域进行联合分析,预测RBD蛋白理化性质和结构特征,构建原核表达载体pET28a-RBD并对其进行PCR和双酶切鉴定... 详细信息

为了探究新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白用于制备亚单位疫苗的免疫原性,试验对不同国家的15种SARS-CoV-2 RBD序列的同源性和保守域进行联合分析,预测RBD蛋白理化性质和结构特征,构建原核表达载体pET28a-RBD并对其进行PCR和双酶切鉴定,将原核表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中并进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE和Western-blot验证重组蛋白RBD的表达情况,再将小鼠分成单剂组、佐剂组、AL组和PBS组,免疫重组蛋白RBD后采用ELISA法检测血清中特异性抗体效价。结果表明:RBD蛋白在不同毒株间具有高度保守性,该蛋白质性质稳定;成功构建出原核表达载体pET28a-RBD,重组蛋白RBD在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,分子质量约为25 ku。免疫后第1周的单剂组和佐剂组特异性IgG抗体效价(166.70±21.08和116.70±16.67)显著或极显著高于AL组和PBS组(P<0.05或P<0.01);第2周佐剂组的IgG抗体效价(4 800.00±715.50)显著高于单剂组(2 667.00±337.30,P<0.05),单剂组和佐剂组的IgG抗体效价均极显著高于AL组和PBS组(P<0.01);单剂组和佐剂组第1周和第2周的IgM抗体效价(333.30±42.16,466.70±66.67和366.70±33.33,600.00±200.00)均极显著高于AL组和PBS组(P<0.01)。说明重组蛋白RBD有良好的免疫原性,可以作为SARS-CoV-2亚单位疫苗的候选蛋白。

关键词：新型冠状病毒受体结合域原核表达纯化疫苗免疫原性

Shewanella oneidensis MR-1对地下水低渗透区中Cr(Ⅵ)和硝酸盐的协同异化还原

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中国环境科学 2024年第5期44卷 2473-2482页

作者：贡玉凤上海市环境科学研究院国家环境保护城市土壤污染控制与修复工程技术中心上海200233 同济大学环境科学与工程学院污染控制与资源化国家重点实验室上海200092

Cr(Ⅵ)和硝酸盐是地下水中常见的复合污染物,且有可能通过迁移扩散至低渗透区而导致其修复问题被忽视.利用Shewanella oneidensis MR-1作为功能微生物,分别研究了摇瓶和非均质模拟装置中两种污染物的协同异化还原过程.结果表明:摇瓶实验... 详细信息

Cr(Ⅵ)和硝酸盐是地下水中常见的复合污染物,且有可能通过迁移扩散至低渗透区而导致其修复问题被忽视.利用Shewanella oneidensis MR-1作为功能微生物,分别研究了摇瓶和非均质模拟装置中两种污染物的协同异化还原过程.结果表明:摇瓶实验中,Cr (Ⅵ)的去除主要依赖于初始菌浓度,而受硝酸盐浓度、电子供体乳酸盐浓度的影响较小.反之,硝酸盐的还原则明显受到Cr (Ⅵ)的抑制,当Cr(Ⅵ)浓度在0到0.02mmol/L时,其一级动力学还原速率从0.635h^(-1)降至0.164h^(-1).同时,乳酸盐氧化也明显受到Cr(Ⅵ)的抑制,表明Shewanella oneidensis MR-1的代谢过程可能受到了Cr(Ⅵ)的毒性干扰.在非均相装置实验中,Cr(Ⅵ)进水浓度小于等于5mg/L(约0.1mmol/L)时,15d基本可以完全去除,对应硝酸盐去除60%左右;当Cr(Ⅵ)浓度增至10mg/L (约0.2mmol/L)时,Cr(Ⅵ)和硝酸盐的去除率分别降至40%和50%左右.装置内截留的Cr(Ⅵ)还原产物以Cr(OH)_3为主,硝酸盐的还原产物以氨为主.

关键词： Shewanella oneidensis MR-1 六价铬硝酸盐

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水流速度对斑马鱼体色和肥满度的影响

上海海洋大学学报 2024年

作者：丁长晨黄亚娟司玉凤鲍宝龙上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室水产科学国家级实验教学示范中心

为了探究水流对鱼类体色的影响，比较了不同流速水流养殖下斑马鱼皮肤黑色素细胞数量和基因的表达，结果表明：相对于低流速(0.010m/s)，在高流速(0.022m/s)下养殖斑马鱼3个月后，皮肤黑色素细胞数量显著增加，尤其是鱼体尾部区域；实... 详细信息

为了探究水流对鱼类体色的影响，比较了不同流速水流养殖下斑马鱼皮肤黑色素细胞数量和基因的表达，结果表明：相对于低流速(0.010m/s)，在高流速(0.022m/s)下养殖斑马鱼3个月后，皮肤黑色素细胞数量显著增加，尤其是鱼体尾部区域；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）结果显示高流速组斑马鱼皮肤黑色素细胞标记基因kita、mitfa和tyrp1a相对表达量显著升高，黄色素细胞标记基因csf1ra显著降低，虹彩细胞标记基因pnp4a无显著变化，表明高流速水流诱导黑色素细胞而抑制黄色素细胞的形成。RT-qPCR结果显示，相比于低流速组，高流速组斑马鱼皮肤中黑色素细胞形成抑制因子基因asip1的相对表达量显著减少，与黑色素细胞形成相关的黑皮质素受体基因mc1r、阿黑皮素原基因pomca无显著性变化，视黄酸合成相关的视黄醛脱氢酶基因raldh2和raldh3显著下调，提示水流刺激可通过降低asip1的表达来诱导黑色素细胞形成；水流刺激瞬时受体通道蛋白基因trpv4和压电式机械敏感通道蛋白基因piezo2的表达上调，而piezo1无显著性变化。以上结果表明，水流能诱导斑马鱼黑色素细胞的形成，可能是通过皮肤机械力感受蛋白Trpv4或Piezo2介导水流刺激减少asip1表达的结果。Asip1除了调控黑色素细胞形成以外还调控脂肪的积累，相比于低流速组，高流速组斑马鱼肥满度也显著下降，GO富集分析显示差异表达基因主要富集到甘油三酯分解代谢、高密度脂蛋白颗粒、脂质结合等条目，差异表达基因显著富集的KEGG通路有：氨基糖和核苷酸糖的代谢、PPAR信号通路、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢等。RT-qPCR检测与脂肪代谢相关的脂肪酸过饱和酶2基因fads2显著上调，瘦素基因lep无显著性差异，提示水流可能通过Asip1影响Fads2影响脂肪降解。总之，本研究首次报道了水流对鱼类体色的影响，为理解目前越来越普遍的流水养殖对鱼类体色和肥满度的影响提供了初步的理论基础。

关键词：水流斑马鱼体色肥满度

新时代党的监督保障法规体系的主要创新及其基本经验

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河南社会科学 2024年第5期032卷 6-15页

作者：祁净玉唐皇凤新疆大学马克思主义学院武汉大学马克思主义学院

党的监督保障法规是制约与激励党组织和党员干部更好地行使党和人民赋予的权力的党内法规。党的十八大以来，为完善权力运行的制约和监督机制，强化党内法规制度的激励与保障功能，推动党的监督保障法规科学化体系化发展，以习近平同志... 详细信息

党的监督保障法规是制约与激励党组织和党员干部更好地行使党和人民赋予的权力的党内法规。党的十八大以来，为完善权力运行的制约和监督机制，强化党内法规制度的激励与保障功能，推动党的监督保障法规科学化体系化发展，以习近平同志为核心的党中央深刻把握党的监督保障法规及其建设的基本规律，持续优化其内容与形式，不断增强其衔接性和联动性，党的监督保障法规体系的科学化规范化协调化水平不断提升。坚持问题导向与系统观念，提升内部要素的完备性与增强相关党内法规的贯通性相结合，与国家法律协调衔接，提升党的监督保障法规的权威性与实施效能，是新时代党的监督保障法规体系创新发展的基本经验。

关键词：新时代党的监督保障法规体系创新发展基本经验

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区块链与网络舆论引导的耦合机理及赋能进路

思想教育研究 2024年第2期 107-112页

作者：聂智羊江瑶湖南工商大学马克思主义学院湖南长沙410205

在网络场域“碎片化”“圈层化”“后真相化”的环境下,网络舆论引导面临诸多藩篱。区块链技术具有去中心化、分布式共识、可溯源与不可篡改等特征,具有弥合碎片化叙事、突破圈层化壁垒、规制后真相频发的潜力,赋能网络舆论引导突破藩... 详细信息

在网络场域“碎片化”“圈层化”“后真相化”的环境下,网络舆论引导面临诸多藩篱。区块链技术具有去中心化、分布式共识、可溯源与不可篡改等特征,具有弥合碎片化叙事、突破圈层化壁垒、规制后真相频发的潜力,赋能网络舆论引导突破藩篱。因此,应着眼网络舆论引导主体、引导客体及引导环体的优化,构建“区块链+网络舆论引导”的应用场景,构建协同传播格局、引领受众回归价值理性、清朗网络舆论环境,有效增强网络舆论引导力,巩固壮大奋进新时代的主流思想舆论。

关键词：区块链网络舆论引导耦合机理赋能进路

基于转录组测序与生物信息学综合分析短葶山麦冬中调控甾体皂苷积累的分子机制

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生物工程学报 2024年第4期40卷 1120-1137页

作者：陈莹仇明月胡若群曹佳玉梁婉凤闫淑君福建农林大学风景园林与艺术学院福建福州350100

本研究旨在以短葶山麦冬的叶与根为研究对象进行高通量Illumina转录组测序,并结合生物信息学分析参与调控短葶山麦冬主要活性成分甾体皂苷类化合物积累的相关酶基因及关键转录因子,为研究短葶山麦冬甾体皂苷积累的分子机制提供理论基础... 详细信息

本研究旨在以短葶山麦冬的叶与根为研究对象进行高通量Illumina转录组测序,并结合生物信息学分析参与调控短葶山麦冬主要活性成分甾体皂苷类化合物积累的相关酶基因及关键转录因子,为研究短葶山麦冬甾体皂苷积累的分子机制提供理论基础。通过转录组测序,鉴定到AACT、CAS、DXS与DXR等31个参与甾体皂苷类化合物合成的代谢酶,其中萜类化合物骨架合成阶段有16个,倍半萜和三萜生物合成阶段有3个,甾体化合物合成阶段有12个。基因差异表达显示,在叶与根之间具有34条差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),分别编码甾体皂苷合成有关的15个代谢酶,通过基因共表达模式进一步分析,编码其中14个代谢酶的31条DEGs呈现共表达模式。此外,还通过共表达分析及PlantTFDB的转录因子分析工具预测到8个转录因子GAI、PIF4、PIL6、ERF8、SVP、LHCA4、NF-YB3和DOF2.4可能参与调节6个代谢酶DXS、DXR、HMGR、DHCR7、DHCR24和CAS。通过启动子分析预测这些转录因子表明,其主要调控机制涉及脱落酸响应、干旱诱导胁迫响应及光响应等过程,特别是脱落酸响应元件(abscisic acid responsive elements,ABRE)与干旱诱导胁迫响应元件(MYB binding site involved in drought-inducibility,MBS)响应途径;并通过qRT-PCR分析这8个关键转录因子和代谢酶基因,结果表明它们在叶与根中差异表达与测序结果一致。

关键词：短葶山麦冬转录组学甾体皂苷

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