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桑茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测方法的建立

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华南农业大学学报 2022年

作者：袁婷罗龙辉张雪吟刘吉平华南农业大学动物科学学院/亚太地区蚕桑培训中心

【目的】桑树青枯病是由桑茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种危害严重的细菌性病害，建立一种快速、灵敏的桑茄科雷尔氏菌检测方法，对桑树青枯病的有效控制有重要意义。【方法】本研究以桑茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因(Pect...

【目的】桑树青枯病是由桑茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种危害严重的细菌性病害，建立一种快速、灵敏的桑茄科雷尔氏菌检测方法，对桑树青枯病的有效控制有重要意义。【方法】本研究以桑茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因(Pectate lyase gene)为靶标，基于等温多自配引发扩增技术(Isothermal multiple self-matching-initiated amplification，IMSA)的引物设计原理，结合环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)的反应体系，建立一种快速有效检测桑茄科雷尔氏菌的IMSA-LAMP法，并对该方法的最佳反应参数进行了筛选。【结果】基于果胶裂解酶基因建立的IMSA-LAMP检测方法在64.5 ℃下，45 min内可完成对阳性样品的特异检测，对桑茄科雷尔氏菌的模板DNA检测灵敏度达200 fg/μL；对生产上收集的桑树青枯病病样的检出率为87.75%。【结论】IMSA-LAMP检测方法具有良好的实用性，可为桑树青枯病的快速检测、诊断与防疫提供新的技术支持。

关键词：

茄科雷尔氏菌IMSA-LAMP检测方法的建立

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华南农业大学学报 2022年第4期43卷 89-98页

作者：袁婷罗龙辉张雪吟刘吉平华南农业大学动物科学学院/亚太地区蚕桑培训中心广东广州510642

【目的】桑树青枯病是由茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种危害严重的细菌性病害,建立一种快速、灵敏的茄科雷尔氏菌检测方法,对桑树青枯病的有效控制有重要意义。【方法】本研究以茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因(Pectate lyas... 详细信息

【目的】桑树青枯病是由茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的一种危害严重的细菌性病害,建立一种快速、灵敏的茄科雷尔氏菌检测方法,对桑树青枯病的有效控制有重要意义。【方法】本研究以茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因(Pectate lyase gene)为靶标,基于等温多自配引发扩增技术(Isothermal multiple self-matchinginitiated amplification,IMSA)的引物设计原理,结合环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的反应体系,建立一种快速有效检测茄科雷尔氏菌的IMSA-LAMP法,并对该方法的最佳反应参数进行了筛选。【结果】基于果胶裂解酶基因建立的IMSA-LAMP检测方法在64.5℃条件下,45 min内可完成对阳性样品的特异检测,对茄科雷尔氏菌的模板DNA检测灵敏度达200 fg/μL(对应菌为1×10^(2) CFU/mL);对生产上收集的疑似桑树青枯病病样的检出率为87.5%。【结论】IMSA-LAMP检测方法具有良好的实用性,可为桑树青枯病的快速检测、诊断与防疫提供新的技术支持。

关键词：桑树青枯病 IMSA-LAMP 茄科雷尔氏菌果胶裂解酶基因

12株桑源克雷伯菌属细菌耐药性、毒力基因及分子分型分析

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中国抗生素杂志 2024年第7期49卷 823-831页

作者：张雪吟罗龙辉刘吉平华南农业大学动物科学学院广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642 华南农业大学食品学院广州510642 华南农业大学群体微生物中心广州510642

目的为了解不同来源的人类条件病原体的特征和耐药机制,预防环境病原体和医院病原体交叉感染,对桑树中分离的克雷伯菌进行耐药性、毒力基因、分子分型特点的探究。方法从广东和广西两地采集桑树和桑树根际土壤样本,其中共分离得到12株... 详细信息

目的为了解不同来源的人类条件病原体的特征和耐药机制,预防环境病原体和医院病原体交叉感染,对桑树中分离的克雷伯菌进行耐药性、毒力基因、分子分型特点的探究。方法从广东和广西两地采集桑树和桑树根际土壤样本,其中共分离得到12株克雷伯菌,对其采用纸片扩散法(K-B法)检测菌株耐药性表征;采用PCR技术对6类9个抗生素相关耐药基因和毒力基因进行检测;采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术进行遗传分析。结果12株桑源克雷伯菌检测到bla_(SHV)、tet(D)、tet(A)和aadA14种耐药基因,其中携带氨基糖苷类相关基因aadA1的有5株(41.67%);12株桑源克雷伯菌均对氨基糖苷类抗生素红霉素和链霉素表现出耐药,对6种以上抗生素耐药的菌株有6株(50%),对7种抗生素耐药的菌株有2株(16.67%);8株(66.67%)携带脂多糖相关的wabG毒力基因;MLST分析显示12株桑源克雷伯菌划分为3大类,包括产酸克雷伯菌复合体(Klebsiella oxytoca species complex,KoSC)、肺炎克雷伯菌复合体(*** species complex,KpSC)以及产气克雷伯菌(***);可分成7个序列型(sequence typing,ST),ST260为优势序列型,有5株(41.67%)。结论12株桑源克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素耐药情况严峻,氨基糖苷类aadA1耐药基因检出率最高;ST260是主要的序列型,菌株之间存在遗传多样性,为环境中桑树来源的克雷伯菌病原体致病机制提供理论依据。

关键词：克雷伯菌属条件致病菌耐药性毒力基因 ST分型

桑细菌性枯萎病病原菌的分离鉴定与全基因组序列分析

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植物保护 2022年第1期48卷 44-51,89页

作者：罗龙辉王继承刘吉平华南农业大学动物科学学院亚太地区蚕桑培训中心广州510642

为明确华南蚕区桑树细菌性枯萎病主要病原菌的种类,本研究从广西、广东等地桑园采集了多份桑树细菌性枯萎病病样,采用分离培养、形态学鉴定和分子生物学鉴定的方法,对病原菌进行了分离鉴定,并通过药敏试验分析病原菌的耐药性。结果表明... 详细信息

为明确华南蚕区桑树细菌性枯萎病主要病原菌的种类,本研究从广西、广东等地桑园采集了多份桑树细菌性枯萎病病样,采用分离培养、形态学鉴定和分子生物学鉴定的方法,对病原菌进行了分离鉴定,并通过药敏试验分析病原菌的耐药性。结果表明,结合柯赫氏法则,将分离到的桑枯萎病病原菌鉴定为产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca,编号AKKL-001(菌种保藏号GDMCC No.1.1602)。该病原菌属革兰氏阴性菌,基因组全长6149586 bp,含有5792个基因,GC含量55.80%;药敏试验结果表明,病原菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻吩、链霉素、麦迪霉素等抗生素具有耐受性。本研究报道了桑细菌性枯萎病病样上分离的产酸克雷伯氏菌,为桑细菌性枯萎病病原菌的研究提供理论依据,全基因组测序的结果为桑细菌性枯萎病的相关致病机制研究奠定了基础。

关键词：桑树细菌性枯萎病产酸克雷伯氏菌全基因组

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2种桑树病原真菌多重PCR检测方法的建立

华南农业大学学报 2022年第5期43卷 54-60页

作者：罗龙辉张兴楠孟芳黄裕鑫刘吉平华南农业大学动物科学学院广东广州510642

【目的】褐斑病与轮纹病是桑树Morus alba的2种常见真菌性病害,危害严重,给生产上带来极大损失。本研究旨在快速准确地诊断2种病害的主要病原菌新褐斑壳丰孢Neophloeospora maculans与膝节霉Gonatophragmium triuniae。【方法】基于多重... 详细信息

【目的】褐斑病与轮纹病是桑树Morus alba的2种常见真菌性病害,危害严重,给生产上带来极大损失。本研究旨在快速准确地诊断2种病害的主要病原菌新褐斑壳丰孢Neophloeospora maculans与膝节霉Gonatophragmium triuniae。【方法】基于多重PCR原理,针对2种病原菌的核糖体内转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列设计多重PCR的特异性引物,优化多重PCR反应的条件,并通过对45份不同地区桑树褐斑病与轮纹病样本进行检测以验证所建立的多重PCR的可行性。【结果】建立的多重PCR检测体系具有良好的可操作性,特异性良好,2种病原菌的DNA检测灵敏度分别达0.1和1.0 pg/μL,通过对不同地区的田间收集的多份桑树病样进行检测,可以明显区分出不同地区2种病害病原菌的种类。【结论】所建立的多重PCR技术可用于桑树褐斑病与轮纹病病原菌的快速检测,可为桑树真菌性病害的防控建立基础。

关键词：桑树褐斑病轮纹病新褐斑壳丰孢膝节霉多重PCR