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融合柚苷酶体系的构建及性能研究

融合柚苷酶体系的构建及性能研究

作者：罗臣暮集美大学

学位级别：硕士

柚苷酶是一种具有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶活性的多亚基糖苷水解酶,被广泛应用于食品和制药行业,其中,利用柚苷酶水解柚皮苷合成更具生物利用度和药用价值的柚皮素引起了研究者的兴趣。在柚苷酶水解柚皮苷过程中,柚皮苷首先通... 详细信息

柚苷酶是一种具有α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶活性的多亚基糖苷水解酶,被广泛应用于食品和制药行业,其中,利用柚苷酶水解柚皮苷合成更具生物利用度和药用价值的柚皮素引起了研究者的兴趣。在柚苷酶水解柚皮苷过程中,柚皮苷首先通过α-L-鼠李糖苷酶被水解为普鲁宁和鼠李糖,普鲁宁再通过β-D-葡萄糖苷酶被水解为柚皮素和葡萄糖。然而,由于天然来源柚苷酶活性不协调、稳定性不足和无法重复利用等缺陷致使柚皮苷的水解为柚皮素的过程受到阻碍。受到构建多功能融合酶能够提高酶催化效率和稳定性的启发,人工融合柚苷酶体系可能是一种弥补天然柚苷酶缺陷,提高柚皮素合成效率的理想途径。因此,本论文利用融合酶技术构建性能优良的融合柚苷酶体系,并将其应用于柚皮苷的高效水解。主要从以下三个方面进行研究:首先,选择来源于Spirochaeta thermophila的α-L-鼠李糖苷酶（St Rha）和来源于Pyrococcus furiosus的β-D-葡萄糖苷酶（Pf BGL）,分别通过直接融合、柔性连接肽（GGGGS）和刚性连接肽（EAAAK）介导融合的方式,构建融合柚苷酶DL-NGase、FL-NGase和RL-NGase。经酶学性质分析,融合柚苷酶中的St Rha和Pf BGL最适p H改变,且经过融合后的St Rha在酸性条件下的稳定性和Pf BGL在碱性条件下的稳定性均得到了提升;融合柚苷酶体系的温度稳定范围在35-65℃之间,DL-NGase在55℃和65℃下的残余酶活力分别保持在75%和50%以上。与天然来源柚苷酶相比,融合柚苷酶体系具有更为优良的热稳定性。动力学参数结果显示,融合柚苷酶中St Rha的K值在1.07-1.67 m M之间,k值在5.13-6.40 s之间,融合柚苷酶中Pf BGL的K值在0.64-0.70 m M之间,k值在12-14 s之间。其次,对融合柚苷酶体系的催化性能进行研究,并将其全细胞催化剂应用于柚皮素的催化制备。经催化性能分析,与混合游离酶体系相比,DL-NGase、FL-NGase和RL-NGase对柚皮苷的催化效率分别提高了49.8%、32.3%和35.9%;底物通道评估结果显示融合柚苷酶的普鲁宁累积浓度显著低于混合游离酶体系,这表明融合柚苷酶通过桥接双酶形成底物通道效应,使普鲁宁的传质效率提高。此外,将具有最佳催化性能的DL-NGase全细胞催化剂应用于柚皮素的催化制备,结果显示在p H 9.0、70℃、50 mg/m L全细胞条件下,融合柚苷酶全细胞催化剂可以将8 mg/m L柚皮苷在4 h内被完全转化为柚皮素,30 mg/m L柚皮苷经催化水解2 h后,柚皮素产量为6.4 mg/m L;将反应体系进一步扩大到100 m L,融合柚苷酶全细胞在6 h内催化30 mg/m L柚皮苷,其转化率可达到95.7%,柚皮素的产量为13.5mg/m L,柚皮素的时空产量为2.25 mg/m L/h,这是目前报道的柚皮素的最高产量。最后,利用金属配位作用与酶的多聚作用驱动融合柚苷酶DL-NGase形成聚集体。经微观结构表征,Mn-DL-NGase聚集体呈现出无序的颗粒状结构,且随着组装时间的增加,聚集体粒径增大;对融合柚苷酶聚集体组装条件进行优化,当Mn浓度为5 m M、组装时间为10 min时,融合柚苷酶聚集体酶活力提高了7.8%;经酶学性质表征,组装前后的最适p H均为7.0,最适温度分别为70℃、75℃;融合柚苷酶聚集体的p H、温度稳定性均有一定程度的提升,在70℃下半衰期提高了30 min,热变性温度提高了5℃。将融合柚苷酶聚集体应用于水解催化柚皮苷,反应前30 min,聚集体的柚皮素产量是游离融合酶的3.3倍。在反应180 min后,融合柚苷酶聚集体对柚皮苷的水解效率为96.4%,产量达1.14mg/m L。因此,融合柚苷酶聚集体的形成具有良好的热稳定性和较好的操作稳定性,能够为柚皮素的高效合成提供有效可行的生产方案。

关键词：柚苷酶融合酶酶聚集体柚皮苷柚皮素

ChatGPT对循证医学发展的影响、挑战及其应对

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医学与哲学 2024年第12期45卷 16-21页

作者：罗姚谈在祥徐州医科大学徐州临床学院江苏徐州221004 徐州医科大学管理学院江苏徐州221004 徐州医科大学附属医院现代医院管理研究中心江苏徐州221006 徐州医科大学卫生政策与健康管理研究中心江苏徐州221004

探讨了ChatGPT在循证医学领域的应用潜力,分析其可能带来的挑战并提出应对策略。ChatGPT作为当前最火爆的人工智能技术之一,在推动循证医学学科发展方面发挥着重要作用,尤其体现在:扩展原始证据来源、提高证据获取的效率、协助医患共同... 详细信息

探讨了ChatGPT在循证医学领域的应用潜力,分析其可能带来的挑战并提出应对策略。ChatGPT作为当前最火爆的人工智能技术之一,在推动循证医学学科发展方面发挥着重要作用,尤其体现在:扩展原始证据来源、提高证据获取的效率、协助医患共同决策、促进循证医学教育和科普教育。当前ChatGPT正处于“技术萌芽期”,需要警惕其带来的风险,例如“证据污染”、算法黑箱、安全漏洞和数字鸿沟等。为了平衡ChatGPT在循证医学领域的积极作用与潜在风险,笔者从ChatGPT的伦理规范、证据来源、专家验证和使用规范等角度给出了对策和建议。

关键词：生成式预训练对话模型循证医学人工智能自然语言处理

海洋核动力平台定位系统多体动力学模型试验验证

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哈尔滨工程大学学报 2024年第7期45卷 1251-1257页

作者：郭冲冲武文华吴国东罗起航大连理工大学工业装备结构分析优化与CAE软件国家重点实验室辽宁大连116024 大连理工大学宁波研究院浙江宁波315000 武汉第二船舶设计研究所湖北武汉430064 海洋石油工程股份有限公司天津300451

为验证海洋核动力平台定位系统多体动力学模型的合理性,从而提高该平台长期系泊的可靠性,本文采用多体动力学方法与缩比模型试验方法,对核动力平台定位系统进行建模与验证。基于定位系统多铰连接的拓扑结构,结合多刚体动力学理论,建立... 详细信息

为验证海洋核动力平台定位系统多体动力学模型的合理性,从而提高该平台长期系泊的可靠性,本文采用多体动力学方法与缩比模型试验方法,对核动力平台定位系统进行建模与验证。基于定位系统多铰连接的拓扑结构,结合多刚体动力学理论,建立了定位系统的多体动力学仿真模型。搭建了定位系统1∶9缩比模型试验平台,并选取2种典型工况进行验证。研究结果表明:定位系统多体动力学模型计算的系泊腿受力与实验结果符合良好,平均误差在2%以内。算例分析发现,系泊腿受力循环次数主要集中在低幅值高均值区域。本文模型试验验证了所提出的定位系统多体动力学模型的可行性与正确性,能够为定位系统系泊能力的评估提供参考和借鉴。

关键词：海洋核动力平台定位系统多铰连接多体动力学约束反力模型试验六自由度平台系泊能力

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基于SSPs气候场景的濒危植物银杉潜在分布区预测

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南京林业大学学报（自然科学版） 2024年第1期48卷 161-168页

作者：罗楚滢佘济云唐子朝中南林业科技大学林学院湖南长沙410004 湖南省农林工业勘察设计研究总院湖南长沙410007

【目的】探讨影响濒危植物银杉(Cathaya argyrophylla)种群发生的关键因子及预测其在当前与未来的潜在分布区,为银杉天然种质资源的保护和引种栽培提供理论依据。【方法】基于银杉的41个样本点,结合气候、地形、土壤、辐射因子数据,采用... 详细信息

【目的】探讨影响濒危植物银杉(Cathaya argyrophylla)种群发生的关键因子及预测其在当前与未来的潜在分布区,为银杉天然种质资源的保护和引种栽培提供理论依据。【方法】基于银杉的41个样本点,结合气候、地形、土壤、辐射因子数据,采用MaxEnt模型预测当前情景下银杉的潜在分布区,评估不同环境因子对银杉地理分布的影响,同时以未来共享社会经济数据(SSPs)作为气候数据,预测银杉未来的潜在分布区。【结果】当前气候条件下,银杉核心适生区面积约为1.325×10^(5)km^(2),约占我国国土面积的1.38%;最干月份降水量、下行紫外线辐射、海拔、最冷月份最低温度对银杉分布影响的累计贡献率为91.9%,是影响银杉地理分布的主导因子。未来3种气候情景下,银杉核心适生区面积均有增加,但仍以黔、湘、桂、渝为中心。【结果】当前气候条件下,银杉核心适生区面积约为1.325×10^(5)km^(2),约占我国国土面积的1.38%,最干月份降水量、下行紫外线辐射、海拔、最冷月份最低温度对银杉分布影响的累计贡献率为91.9%,是影响银杉地理分布的主导因子。未来3种气候情景下,银杉核心适生区面积均有增加,但仍以黔、湘、桂、渝为中心。以生存概率大于0.5作为适应范围,则适宜银杉生存的主要环境条件为:最干月份降水量18.03~215.63 mm,下行紫外线辐射1070728~1437806 W/m^(2),海拔493.68~1731.10 m,最冷月最低温-1.01~4.05℃。【结论】最干月份降水量、下行紫外线辐射可以被认定是影响银杉潜在分布的主要因子。在3种未来气候情景下,银杉的核心适生区均呈扩张趋势,扩张区主要分布于云南、浙江、福建、贵州4省。此外,中间发展路径情景(SSP2-4.5)更适合银杉的生长与繁殖。

关键词：银杉共享社会经济路径(SSPs) 潜在分布区气候因子濒危植物

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面向双边用户满意的产能分享平台配置策略研究

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工业工程与管理 2024年第2期29卷 90-100页

作者：赵道致罗碟天津仁爱学院经济与管理学院天津301636 天津大学管理与经济学部天津300072

新一代信息技术和工业互联网正在促进产能分享业务的快速发展,产能分享正在成为数智化制造的一种重要形式。本文旨在设计一种面向平台双边用户满意,且考虑加工任务工艺顺序要求的产能配置策略。产能分享平台为产能供需双方提供产能匹配... 详细信息

新一代信息技术和工业互联网正在促进产能分享业务的快速发展,产能分享正在成为数智化制造的一种重要形式。本文旨在设计一种面向平台双边用户满意,且考虑加工任务工艺顺序要求的产能配置策略。产能分享平台为产能供需双方提供产能匹配和交易服务。不同于Airbnb和Uber等产品分享平台,产能分享平台在匹配双边客户的产能时要考虑产能需求方的加工工序要求及供方的加工时间窗,故制造任务的匹配需在给定的工艺关系约束下追求整体资源组合的最优。考虑产能分享平台同时满足产能需求方的订单完成时间最优和产能供给方剩余产能获得的总满意度最大的协调目标,研究了产能分享平台的双边用户的协调稳定匹配策略。最后,基于上述匹配情景,设计了求解稳定匹配方案的遗传算法,通过算例验证了产能配置机制的可行性,提高资源利用率。

关键词：产能分享双边匹配遗传算法产能配置

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基于文化场域理论的武当文创产品设计研究

包装工程 2024年第6期45卷 416-421,433页

作者：韩君罗心怡天津理工大学天津300384

目的以文化场域理论为指导,梳理武当山文化场域中的符号类型与文化意象,探索武当山文创视觉设计新思路,为传统武当文化意象的推陈出新提供指引,并与新时代审美相融合。方法将武当山文创视觉设计分为四个层级,通过不同层级下的视觉语言,... 详细信息

目的以文化场域理论为指导,梳理武当山文化场域中的符号类型与文化意象,探索武当山文创视觉设计新思路,为传统武当文化意象的推陈出新提供指引,并与新时代审美相融合。方法将武当山文创视觉设计分为四个层级,通过不同层级下的视觉语言,运用解构与重构、变异与重组等方法,提取出视觉符号并结合设计实践,构建符合新时代传播要素及文化赋能的创新理论框架。结果提炼出武当山文化场域内特有的文化符号和意象并融入设计中,得到一系列具有武当文化独特精神与韵味的文创产品设计。结论基于场域视角研究武当道教文化的视觉元素符号,可以更全面地挖掘和展示武当的文化特色,能从历史脉络与人文习俗中凝练文化符号,将传统与现代的审美特征相结合,为文化符号赋予趣味性和灵动性,从而清晰有效地向大众传播武当文化。

关键词：文化场域武当文创视觉设计文化符号解构与重构

考虑两个短路点的配电网不对称短路分析与通用计算方法

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电网技术 2024年

作者：杨杉喻希张晓彤罗朝旭西安交通大学电力设备电气绝缘国家重点实验室湖南工业大学电气与信息工程学院

针对换流器型分布式电源(inverter based distributed generation，IBDG)广泛应用的新型配电网，解决目前不对称短路电流计算方法主要以计算单个短路点为主，且新增短路点后将面临计算通用性问题，研究一种新颖的配电网不对称短路电流... 详细信息

针对换流器型分布式电源(inverter based distributed generation，IBDG)广泛应用的新型配电网，解决目前不对称短路电流计算方法主要以计算单个短路点为主，且新增短路点后将面临计算通用性问题，研究一种新颖的配电网不对称短路电流计算方法。该方法将2个短路点的情况考虑在内，进一步对不对称短路进行分类，并形成结合IBDG短路等效电路的配电网不对称短路通用等效电路。接着分别建立1个和2个短路点情况下的计算方程和边界方程，提出一种能计及2个不对称短路点的，对配电网普遍适用的不对称短路电流通用计算方法。最后，在一个配电网算例中对所提计算方法进行验证，结果显示所提方法的正确性和有效性。

关键词：新型配电网不对称短路电流换流器型分布式电源通用计算 2个短路点

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融资融券交易能够提高业绩承诺完成率吗

会计研究 2024年第3期 80-93页

作者：罗棪心窦超翟进步北京交通大学经济管理学院 100044 中央财经大学商学院 100081 中央财经大学财政税务学院 100081

本文以我国2011-2021年披露业绩承诺的A股上市公司为样本,考察了融资融券这一交易机制对业绩承诺完成率的影响。研究发现,相比于非融资融券标的公司,融资融券标的公司的业绩承诺完成率更低,且主要是由于融资交易引起的。机制分析表明,... 详细信息

本文以我国2011-2021年披露业绩承诺的A股上市公司为样本,考察了融资融券这一交易机制对业绩承诺完成率的影响。研究发现,相比于非融资融券标的公司,融资融券标的公司的业绩承诺完成率更低,且主要是由于融资交易引起的。机制分析表明,融资融券交易加剧了管理层短视行为、降低了机构投资者持股比例,进而导致业绩承诺完成率的下降。进一步研究发现,信息环境差、非国有控股和缺乏市场竞争的企业在成为融资融券标的后业绩承诺完成率显著更低。研究结论表明,我国融资融券交易所存在的严重非对称性是融券交易卖空威胁难以发挥作用的重要原因。本文的研究成果对于完善我国融资融券制度和业绩承诺机制具有一定的理论和现实意义。

关键词：业绩承诺融资交易融券交易

长株潭地区县域生态旅游与城乡融合发展协调度评价

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中南林业科技大学学报 2024年 173-183页

作者：罗棋方苑祎然熊曦湖南幼儿师范高等专科学校文学院中南林业科技大学商学院

【目的】县域是城乡经济和空间演变相互融合的重要载体，也是连结城乡的枢纽，对于实现城乡融合发展具有重要意义。生态旅游作为一种倡导人与自然和谐共生的绿色旅游方式，能有效地推进城乡发展，促进农民增收，生态旅游业以其较高的产... 详细信息

【目的】县域是城乡经济和空间演变相互融合的重要载体，也是连结城乡的枢纽，对于实现城乡融合发展具有重要意义。生态旅游作为一种倡导人与自然和谐共生的绿色旅游方式，能有效地推进城乡发展，促进农民增收，生态旅游业以其较高的产业关联，成为最具发展前景的行业，为城乡融合发展提供了强大的动力，同时，城乡融合发展也会在一定程度上促进该地区的旅游业发展，两者协调发展产生叠加效应以带动该区域的经济发展。【方法】文章以2013—2022年长株潭地区城乡融合与生态旅游面板数据为基础构建两者的耦合协调综合评价指标体系，通过对长株潭地区县域生态旅游和城乡融合两个系统进行耦合协调发展分析，探究两个系统的时空差异格局。【结果】1）长株潭地区6个县域耦合协调度基础水平差异大，但总体发展趋势稳步上升。2）长株潭地区各县域空间差异明显，2013年、2019年与2022年6个县域城乡融合与生态旅游耦合协调发展内部差异性较大，发展水平北部优于南部，其中浏阳市耦合协调程度最好，已达到优质协调。3）长株潭地区城乡融合与生态旅游耦合协调度没有实现突破性、跨越式的提升，生态旅游发展滞后的问题较为明显，影响了两者实现高耦合协调度的进程。【结论】长株潭地区县域的生态旅游和城乡融合之间具有长期均衡关系，生态旅游发展能够有效推动县域城乡融合发展水平，大部分县域生态旅游业与城乡融合的耦合协调度由失调逐渐发展为协调状态，协调类型由失调衰退发展成为协调上升，二者具有较强的耦合关系。基于此，各县域应采取因地制宜的政策措施，提出相关对策建议以推进城乡融合与生态旅游耦合协调优质发展。

关键词：长株潭地区县域城乡融合生态旅游耦合协调