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内含子源性27nt-microRNA对大鼠血管平滑肌细胞表型转换的影响及其机制研究

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中国现代医学杂志 2024年第14期34卷 36-45页

作者：周炜潜罗雪兰王光耀黄凤欧和生广西中医药大学附属国际壮医医院壮瑶医药研究实验室广西南宁530201 广西中医药大学附属国际壮医医院心血管内科广西南宁530201

目的探讨内含子源性27nt-miRNA(27nt-miR)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的影响及其分子机制。方法用27nt-miR表达慢病毒转染培养的VSMCs,观察其对PDGF-BB诱导的VSMCs表型转换的影响;将细胞... 详细信息

目的探讨内含子源性27nt-miRNA(27nt-miR)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的影响及其分子机制。方法用27nt-miR表达慢病毒转染培养的VSMCs,观察其对PDGF-BB诱导的VSMCs表型转换的影响;将细胞分为对照组、PDGF-BB诱导组、27ntmiR组、27nt-miR-sponge组及27nt-miR NC组(27nt-miR NC组)。雷帕霉素(100 nmol/L)与MHY-1485(10μmol/L)作用于27nt-miR组、27nt-miR-sponge组及27nt-miR NC组,以验证27nt-miR是否参与mTOR与p70S6k通路的调控。用生物信息学预测27nt-miR与mTOR的靶向结合位点,用CCK-8法与EdU法分别测定VSMCs活力与增殖情况,划痕试验测定VSMCs迁移能力,实时荧光聚合酶链反应检测α-SMA、SM22α及OPN mRNA表达,Western blotting检测α-SMA、SM22α、OPN、mTOR、p-mTOR、p70S6k与pp70S6k蛋白表达。结果 CCK-8法结果示,PDGF-BB诱导组细胞增殖率较正常值高(P 0.05);27nt-miR组细胞增殖率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。PDGFBB诱导组细胞迁移率较对照组高(P 0.05);27nt-miR组细胞迁移率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。EdU法结果示,PDGF-BB诱导组细胞增殖率较对照组高(P 0.05);27nt-miR组细胞增殖率较27nt-miR NC组低(P 0.05)。PDGF-BB诱导组α-SMA mRNA相对表达量较对照组低(P 0.05)。27nt-miR NC组与PDGF-BB诱导组α-SMA、SM22α、OPN mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);27nt-miR组α-SMA、SM22α mRNA相对表达量较27nt-miR NC组高(P 0.05),27nt-miR-sponge组OPNm RNA相对表达量较27nt-miRNC组高(P<0.05)。PDGF-BB诱导组α-SMA、SM22α蛋白相对表达量较对照组低(P <0.05);27nt-miR NC组、PDGF-BB诱导组OPN蛋白相对表达量较27nt-miR组高(P <0.05);27nt-miR组α-SMA、SM22α蛋白相对表达量较27nt-miR NC组高(P <0.05),OPN蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05);27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k与p-mTOR蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05);各组经雷帕霉素处理后,27ntmiR-sponge组与27nt-miR NC组各蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量较27nt-miR NC组低(P <0.05),27nt-miR-sponge组与27nt-miR NC组p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。各组经MHY-1485处理后,27nt-miR组p70S6k、p-p70S6k、mTOR、p-mTOR蛋白相对表达量较27ntmiR NC组低(P <0.05);27nt-miR-sponge组与27nt-miR NC组各蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 27nt-miR可能通过靶向m TOR/p70S6k信号通路从而

关键词： 27nt-microRNA 血管平滑肌细胞 mTOR/p70S6k信号通路表型转换

一类磁流体力学方程组的二阶Crank-Nicolson算法研究

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一类磁流体力学方程组的二阶Crank-Nicolson算法研究

作者：罗雪兰温州大学

学位级别：硕士

本论文提出了一类磁流体力学方程组的二阶半隐Crank-Nicolson算法，该磁流体力学方程组是由非定常的Navier-Stokes方程与定常的Maxwell方程的耦合系统.该算法的主要特点有两方面,一方面算法是解耦的,在同一个时间层上先计算磁场,再计... 详细信息

本论文提出了一类磁流体力学方程组的二阶半隐Crank-Nicolson算法，该磁流体力学方程组是由非定常的Navier-Stokes方程与定常的Maxwell方程的耦合系统.该算法的主要特点有两方面,一方面算法是解耦的,在同一个时间层上先计算磁场,再计算速度场.另外,两个子问题是线性的,节省计算时间,易于数值计算.本论文主要分为以下几个部分:1.在时间方向采用二阶Crank-Nicolson外推格式,证明了该算法对于磁场、速度场和压力具有二阶收敛速度;2.对磁场-速度场-压力采用Galerkin有限元逼近,得到了空间有限元误差估计;3.利用有限元软件FreeFEM++,通过数值算例验证理论中证明的误差估计结果.

关键词：磁流体动力学方程 Crank-Nicolson算法有限元误差估计

27nt-miRNA对eNOS表达/活性调节及NO生成、血管新生的影响及相关机制研究

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27nt-miRNA对eNOS表达/活性调节及NO生成、血管新生的影响及相关...

作者：罗雪兰广西医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题组前期研究显示,27nt-miRNA由内皮型NOS(eNOS)的第4内含子27碱基重复序列产生,并负性调控eNOS的转录水平和蛋白表达水平。本研究进一步探讨27nt-miRNA对eNOS表达、活性的调节及代谢产物NO的生成、血管新生的影响及相关分子... 详细信息

目的:本课题组前期研究显示,27nt-miRNA由内皮型NOS(eNOS)的第4内含子27碱基重复序列产生,并负性调控eNOS的转录水平和蛋白表达水平。本研究进一步探讨27nt-miRNA对eNOS表达、活性的调节及代谢产物NO的生成、血管新生的影响及相关分子机制研究:1)研究27nt-miRNA对血管内皮细胞eNOS基因表达的调节及其相关分子调控机制;2)明确27nt-miRNA对血管内皮细胞eNOS活性及其代谢产物NO生成的影响及其分子机制;3)阐明27nt-miRNA对细胞增殖、迁移和管腔形成的影响及其相关分子机制,为分子水平治疗心血管疾病提供理论依据。方法:1)构建27nt-miRNA野生型与突变型基因序列的高表达质粒,使用X-treme GENE HP DNA脂质体进行转染,根据所染的质粒将人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为:空白质粒对照组(Control group)、野生型27-nt-miRNA质粒组(Wt-27-ntmiRNA组)和突变型27-nt-miRNA质粒组(Mut-27-nt-miRNA组)。2)检测27nt-miRNA对eNOS基因表达的影响:将空白质粒、Wt-27-ntmiRNA质粒和Mut-27-nt-miRNA质粒转染入HUVECs。应用RT-PCR实验检测eNOS mRNA和核转录因子AP-1 mRNA转录水平的改变;应用免疫细胞化学实验(Immunocytochemistry)和免疫印迹实验(western blotting)检测eNOS蛋白和核转录因子AP-1蛋白表达水平的改变。3)检测27nt-miRNA对eNOS活性及其代谢产物NO生成的影响:将空白质粒、Wt-27-nt-miRNA质粒和Mut-27-nt-miRNA质粒转染入HUVECs。应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定不同时间细胞培养液中eNOS活性的变化;应用硝酸还原法测定不同时间细胞培养上清液中NO生成的变化。4)检测27nt-miRNA对HUVECs增殖的影响:将空白质粒、Wt-27-nt-miRNA质粒和Mut-27-nt-miRNA质粒转染入HUVECs。细胞转染消化后接种于96孔板,并于24、48和72 h三个时间点,采用MTT法检测各实验HUVECs的增殖能力。5)检测27nt-miRNA对HUVECs迁移和管腔形成的影响:将空白质粒、Wt-27-nt-miRNA质粒和Mut-27-nt-miRNA质粒转染入HUVECs。细胞转染消化后接种于96孔板,采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力;采用人工基底膜(Matrigel)检测各组细胞的管腔形成能力。结果:1)与对照组比较,27nt-miRNA高表达组eNOS mRNA和AP-1 mRNA转录水平明显降低(P<0.05),eNOS和AP-1蛋白表达明显下降(P<0.05)。2)与对照组比较,27nt-miRNA高表达组细胞培养液上清中eNOS活性明显减弱(P<0.05)及其代谢产物NO生成明显减少(P<0.05)。3)与对照组比较,27nt-miRNA高表达组的细胞增殖能力明显降低(P<0.05),迁移能力明显下降(P<0.05),血管新生面积比率也明显降低(P<0.05)。结论:1)27nt-miRNA显著抑制血管内皮细胞eNOS mRNA转录和蛋白表达,显著抑制核转录因子AP-1 mRNA转录和蛋白表达,AP-1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。2)27nt-miRNA显著抑制血管内皮细胞eNOS活性及其代谢产物NO的生成,并且可能与其对eNOS基因的调控表达有关。3)27nt-miRNA显著抑制血管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成能力,可能与其对eNOS基因的调控表达有关,并且eNOS/NO/可能是其调控的相关通路之一。

关键词： 27nt-miRNA 内皮型一氧化氮合酶 AP-1 血管内皮细胞一氧化氮管腔形成

miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响

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国际药学研究杂志 2017年第3期44卷 245-250页

作者：罗雪兰陈伟莫国君杨鹏欧和生广西医科大学药学院南宁530021

目的探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响。方法构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移... 详细信息

目的探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响。方法构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量。结果与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%。结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点。

关键词：微小RNA-24 内皮细胞内皮型一氧化氮合酶代谢产物

人骨髓间充质干细胞定向血管内皮细胞诱导分化前后eNOS表达/活性及其代谢产物的差异

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西安交通大学学报（医学版） 2017年第3期38卷 386-391页

作者：罗雪兰陈伟莫国君杨鹏欧和生广西医科大学药学院广西南宁530021

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)定向血管内皮细胞诱导分化前后内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性及其代谢产物的差异。方法建立hBMSCs定向血管内皮细胞诱导分化系统。应用倒置显微镜观察细胞形态的改变,Transwell实验检测细... 详细信息

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)定向血管内皮细胞诱导分化前后内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性及其代谢产物的差异。方法建立hBMSCs定向血管内皮细胞诱导分化系统。应用倒置显微镜观察细胞形态的改变,Transwell实验检测细胞的迁移能力,细胞免疫荧光及Western blot检测eNOS的蛋白表达,ELISA法检测eNOS的活性,硝酸还原法检测细胞培养上清液NO含量。结果与未分化组相比,分化后的细胞形态发生明显改变;细胞的迁移能力增强238.10%(73.000±7.002 vs.21.000±4.359,P<0.05);eNOS蛋白的表达增加114.72%(0.423±0.011 vs.0.197±0.079,P<0.05);eNOS的活性增强157.49%(4.967±0.073 vs.1.929±0.103,P<0.05);NO合成与释放增加155.67%(184.909±1.853 vs.72.323±0.426,P<0.05)。结论 hBMSCs定向内皮细胞诱导分化后eNOS基因表达增加、活性增强,其代谢产物NO的合成与释放增加。本结果可能为干细胞在心血管疾病等防治提供依据。

关键词：人骨髓间充质干细胞血管内皮细胞诱导分化内皮型一氧化氮合酶(eNOS) 代谢产物

百年平桂不忘初心提质增效砥砺前行——中国有色集团(广西)平桂飞碟股份有限公司改革发展纪实

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中国金属通报 2017年第2期 20-25页

作者：罗雪兰

中国有色集团(广西)平桂飞碟股份有限公司(下文简称"平桂飞碟")地处三省通衢之贺州,经历了风雨磨砺后,依然壮志在胸、步伐坚定。今天的平桂飞碟,矢志复兴百年平桂辉煌,正在迈向跨越式发展征程。今天的平桂飞碟,正载着飞碟人多少年来的"... 详细信息

中国有色集团(广西)平桂飞碟股份有限公司(下文简称"平桂飞碟")地处三省通衢之贺州,经历了风雨磨砺后,依然壮志在胸、步伐坚定。今天的平桂飞碟,矢志复兴百年平桂辉煌,正在迈向跨越式发展征程。今天的平桂飞碟,正载着飞碟人多少年来的"飞碟梦"扬帆起航!

关键词：中国有色集团扬帆起航跨越式发展平桂矿务局电力公司企业管理现代化工业科学技术主要经济指标绿色矿山找矿成果

miR-24对人脐静脉内皮细胞增殖、转移及自噬的影响

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山东医药 2017年第13期57卷 24-27页

作者：杨鹏罗雪兰莫国君陶晓静沈凤欧和生广西医科大学药学院南宁530021

目的探讨miR-24对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、转移、自噬的影响。方法将HUVECs随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组、雷帕霉素组。空白对照组不给予任何处理;雷帕霉素组的HUVECs用1 000 nmol/L雷帕霉素处理6 h建立自噬模... 详细信息

目的探讨miR-24对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、转移、自噬的影响。方法将HUVECs随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组、雷帕霉素组。空白对照组不给予任何处理;雷帕霉素组的HUVECs用1 000 nmol/L雷帕霉素处理6 h建立自噬模型。雷帕霉素+miR-24高表达组的HUVECs先转染miR-24高表达质粒,待转染成功后以同样方法建立自噬模型;用CCK-8法检测HUVECs增殖能力,细胞划痕试验检验细胞的转移能力,进一步用免疫组织化学和Western blotting法检测HUVECs自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的蛋白表达水平,采用透射电镜观察细胞内部自噬小体。结果与空白对照组相比,雷帕霉素组、雷帕霉素+miR-24高表达组OD值、细胞迁移比例降低、Beclin-1蛋白及LC3Ⅱ蛋白表达量上升(P<0.01或<0.05)。与雷帕霉素组相比,雷帕霉素+miR-24高表达组OD值、细胞迁移比例下降,Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.01或<0.05)。透射电镜观察结果显示,空白对照组和雷帕霉素+miR-24高表达组的细胞质内各细胞器分布基本正常,细胞核形态也正常,细胞质中未见明显自噬小体;雷帕霉素组细胞质中可见明显的空泡状结构、包含部分双层膜结构的自噬小体。结论 miR-24可显著抑制HUVECs的增殖、转移及自噬。

关键词：人脐静脉内皮细胞 miRNA-24 细胞自噬细胞增殖